张晓楠
- 作品数：83 被引量：413H指数：11
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金陕西省科学技术研究发展计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学政治法律更多>>
- 硒性白内障α-晶体蛋白的分子伴侣特性被引量：1
- 2001年
- 目的:研究硒性白内障α-晶体蛋白的分子伴侣特性。方法:制作SD大鼠亚硒酸钠性白内障模型,分离纯化正常和白内障晶状体α-晶体蛋白。观察α-晶体蛋白对过氧化氢酶（CAT）热凝聚的抑制作用。结果:正常和硒性白内障幼鼠晶状体α-晶体蛋白与对照蛋白比较,具有特异性抑制CAT热凝聚的作用;αH较αL-晶体蛋白伴侣功能降低;硒性白内障α-晶体蛋白的抑制作用下降,正常和白内障晶状体αH和αL-晶体蛋白伴侣功能两者之间分别比较均有显著性差异。结论:硒性白内障α-晶体蛋白抑制CAT热凝聚的分子伴侣活性下降是导致白内障形成的重要环节。眼科学报2001;17:78～81。
- 严宏惠延年李明勇张晓楠张延凤武丽华
- 关键词：Α-晶体蛋白分子伴侣硒性白内障过氧化氢酶
- α-晶状体蛋白分子伴娘功能的初步研究被引量：3
- 2004年
- α-晶状体蛋白作为晶状体的主要结构蛋白,具有分子伴娘特性,对长期维持晶状体的透明具有重要意义[1,2].为探讨其作用机制,我们对比观察了透明晶状体皮质和核、年龄相关性白内障不同年龄患者晶状体和不同混浊程度晶状体中α-晶状体蛋白对过氧化氢酶热凝聚的抑制作用.
- 严宏惠延年李明勇张延凤张晓楠武丽华
- 关键词：Α-晶状体蛋白过氧化氢酶白内障
- 液相色谱二步法纯化人中性粒细胞防御素被引量：4
- 1997年
- 建立人中性粒细胞（PMN）防御素（HNP）的制备级纯化方法，以便更深入研究防御素的生物学活性．方法：采用Superdex30凝胶色谱法对PMN提取物进行初步分离，再用C18反相液相色谱法进一步纯化，得到HNP纯品并对其进行鉴定．结果：纯化的HNPMr为3400，纯度为91．6％，具有抗微生物活性．结论：应用两步色谱法纯化HNP，是从人的PMN中纯化HNP的较为理想的方法．
- 刘文超刘智广张晓楠张学庸胡家露彭道荣徐修礼孙怡群
- 关键词：中性粒细胞防御素液相色谱
- 用酚-氯仿直接从克隆中提取质粒DNA被引量：2
- 2007年
- 目的:对用酚-氯仿直接从克隆中提取质粒DNA的方法进行了研究。方法:采用不同次数的酚-氯仿抽提,在不同RNaseA作用温度及作用时间下提取了三种质粒。结果:用酚-氯仿抽提2次,RNase A45℃作用8min,质粒纯度(OD260/OD280)为1.85左右、产量大于0.8μg/克隆。结论:本法不但快速,且所提质粒均能满足后续实验如酶切鉴定、测序等方面的需要。对于大批量重组克隆的筛选尤为适合。
- 张晓楠黄勇张延凤张秀敏
- 关键词：克隆质粒DNA
- OPG与MBP融合蛋白在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2002年
- 目的 克隆人骨保护素 (OPG)成熟肽段编码区基因 ,并在大肠杆菌中表达。方法 采用RT PCR法 ,扩增人OPG成熟肽段编码区cDNA ,并克隆入原核表达载体pMAL c2x中 ,转化BL2 1(DE3)PlysS大肠杆菌感受态细胞。经 0 .1mmol/LIPTG诱导后 ,收集菌体蛋白 ,进行SDS PAGE及Westernblot鉴定。结果 获得人OPG成熟肽段编码区cDNA ,以构建的原核表达载体pMAL OPG转化菌株后 ,可表达人OPG和麦芽糖结合蛋白 (MBP)的融合蛋白 ,相对分子质量 (Mr)为 85 0 0 0。表达产物的蛋白量约为菌体总蛋白的 13%。Westernblot表明 ,融合蛋白能与抗人OPG多克隆抗体特异性结合。结论 获得人OPG成熟肽全长cDNA ,并在大肠杆菌中以OPG
- 刘继中纪宗玲陈苏民胡蕴玉李毅张晓楠
- 关键词：骨保护素克隆大肠杆菌RT-PCR蛋白表达
- 微波在蛋白质电泳染色和脱色中的应用被引量：3
- 2002年
- 张延凤张晓楠
- 关键词：微波蛋白质凝胶电泳染色脱色
- 一个新的MAGE-1表位为肝癌细胞表面HLA-B7分子递呈被引量：14
- 2001年
- 目的 :肿瘤抗原的存在是机体识别肿瘤并激活免疫系统的物质基础 ,机体抗肿瘤免疫以细胞免疫为主 ,故寻找被T细胞识别的肝癌细胞抗原肽 ,为肝癌免疫治疗奠定基础。方法 :对于肝癌细胞系HHCC(HLA A2 ,A2 9,B7,B5 1) ,应用细胞膜酸洗技术使抗原肽从细胞膜表面脱落 ,经过凝胶层析 ,反相高效液相色谱层析得到不同组份多肽 ,高效液相色谱 质谱仪联用技术获得抗原肽的一级结构 ,通过氨基酸锚定位点分析 ,预测其HLA配体类型 ;互联网上氨基酸同源性分析确定其同源性序列 ;人工合成抗原肽 ,HLA同型树突状细胞递呈合成抗原肽刺激特异性CTL反应 ,51Cr杀伤实验检测CTL对肿瘤细胞系的杀伤作用。结果 :经过反相高效液相色谱层析后可以获得 10多个组份 ,其中一个组份经过液质联用鉴定和氨基酸同源性分析确定其序列为EPVTKAEML ,是黑色素瘤抗原 1,MAGE 1(12 1 12 9)表位 ,由HLA B7分子递呈 ,体外诱导实验表明其可以诱导出较强的CTL反应。结论 :液质联用技术是寻找抗原肽的有效方法 ,MAGE 1抗原肽EPVTKAEML对于HLA B7阳性及MAGE
- 郭爱林隋延仿叶菁曲萍张晓楠张立红张敏卢兴森
- 关键词：肝癌液质联用技术抗原肽MAGE-1
- Red系统三种蛋白在哺乳动物细胞核中定位表达的设计和构建被引量：3
- 2008年
- 目的:构建在哺乳动物细胞核中同时定位表达Red系统三种蛋白的载体。方法:通过给red基因(gam、bet和exo)的3,端分别加入由7个氨基(pro-lys-lys-lys-Arg-Lys-val)组成的核定位信号序列(nuclear localization signal,NLS)和4个甘氨酸构成的linker序列,再从λ噬菌体基因组中,通过PCR技术分别扩增到C端均都带有NLS的gam、bet和exo的DNA全长序列,将三种PCR产物依次克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP中,得到含3个目的基因(gam-NLS、bet-NLs和exo-NLS)的三顺反子表达载体pCMV-gNIbNIxN,转染培养的哺乳类细胞后,用作者制备并纯化的抗Red3种蛋白的抗体进行间接免疫荧光检测,观察蛋白的定位情况。结果:不带有NLS的Red3种蛋白在细胞中表达主要集中在细胞质很少进入细胞核;而带有NLS的Red3种蛋白于不同时间转染人和鼠的两种细胞后,均表达定位于细胞核中。结论:三顺反子表达载体pCMV-gNIbNIxN的成功构建为进一步探索将λ噬菌体的red系统用于哺乳动物细胞的基因替代打下基础。
- 张晓楠黄勇曹蔚侯颖赵玮钦关璐媛陈苏民吴元明
- 关键词：核定位信号蛋白质表达
- 自制显示系统检测免疫印迹中的目的蛋白被引量：2
- 2006年
- 目前蛋白免疫印迹显示系统有显色法和化学发光法，因化学发光法具有灵敏、快速、准确等特点而倍受科研工作者的青睐，但一般商品化的化学发光试剂盒价格颇为昂贵，为此，在参考文献的基础上作了一些改进，将Tris-CI的pH值从7．5提高到11．0，同时提高了对碘苯酚的浓度（从1mmol／L提高到2mmol／L），得到了自制的化学发光试剂。首先用其检测了大肠杆茵中表达的2种不同分子量的蛋白（gam，13kDa；bet，30kDa），发现当蛋白上样量为2～20ng时，各蛋白条带均清晰显示。随后的斑点免疫印迹实验表明：自制及进口化学发光试剂在检测酶标二抗效价方面有着同样高的敏感性。
- 张晓楠陈南春程司堃张延凤
- 关键词：免疫印迹辣根过氧化物酶WESTERNBLOT
- 液-质联用分析肝癌细胞HLA-A2类分子递呈的抗原肽被引量：3
- 2001年
- 目的 寻找MHCⅠ类分子递呈的、T淋巴细胞识别的肝癌抗原肽。方法 人肝癌细胞系hHCC以枸橼酸 磷酸盐 (pH3 .3 )液洗脱 ,洗脱物经粗分离 ,得到相对分子质量 (Mr) <50 0 0的各种多肽组分混合液 ;取各组分多肽分离液分别与抗原加工缺陷细胞 (T2 ,HLA A2 )进行细胞表位重建 ,加入特异性细胞毒T淋巴细胞 (CTL) ,5 1Cr释放法测杀伤活性 ;选活性值高的抗原肽组分进行反相高效液相色谱 质谱 (RP HPLC MS)检测 ,对活性峰手工读谱分析其一级结构 ;最后进行氨基酸同源性分析。结果 酸洗 1 0 10 hHCC细胞 ,样品蛋白质浓度 2mg/ml;通过RP HPLC MS检测 ,其质谱图经手工解析 ,氨基酸序列为SXXVHXNEV ,X =1或L ;氨基酸同源性分析证明SXXVHXNEV为SLIVHLNEV ,是肝细胞生长因子受体的第 1 0 75～ 1 0 83肽段 ,第 1 0 80位点发生突变 ,由F变为L ,由HLA A2分子递呈。结论 细胞膜温和酸洗技术结合RP HPLC MS联用技术 ,是寻找肝癌抗原肽的有效方法 ,尚未见相同研究报道。发现的肝癌抗原肽SLIVHLNEV是肝细胞生长因子受体的突变物 ,可能具有重要生物学意义。
- 隋延仿郭爱林叶菁曲萍张晓楠张立红
- 关键词：HLA-A2高效液相色谱-质谱MHCI类分子
