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周文硕
作品数:
1
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供职机构:
浙江省医学科学院
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发文基金:
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相关领域:
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合作作者
阎辉
浙江省医学科学院
房有荣
浙江省医学科学院
李红玉
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2012
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Zeocin和GFP双筛选标记重组痘苗病毒载体的构建
2012年
目的为研究重组痘苗病毒通用载体,构建融合Zeocin和GFP双筛选标记质粒pcB-Zeo-GFP。方法质粒LeCo-G/Zeo含有Zeo-GFP融合基因片段,通过PCR反应、BamHI酶切后连接替换空白质粒pCB的筛选基因gpt,通过菌落PCR,酶切图谱分析及测序分析鉴定重组质粒,构建成功后将其与野生型痘苗病毒进行位点特异性同源重组,经Zeocin药物筛选2代后,用流式细胞仪观察重组痘苗病毒GFP表达。结果经菌落PCR,1号、5号和10号菌落中扩增出426bp的目的条带,与预期的大小完全一致,经酶切分析和DNA测序进一步验证了重组质粒pCB-zeo-GFP;该质粒与野生型痘苗病毒同源重组,得到了重组的痘苗病毒;Zeocin筛选2代后,病毒上清感染细胞,流式细胞分析7.18%的细胞中有GFP的表达,而阴性对照仅有1.43%;Zeocin药物筛选5代后,通过激光共聚焦可在80%以上的细胞中观察带GFP;提取的重组痘苗基因组DNA也扩增出预期大小目的条带。结论 含Zeocin和GFP双筛选标记的新型重组痘苗病毒不仅具有可观察性且具有药物抗性,非常容易进行筛选鉴定。
房有荣
李红玉
陈科达
周文硕
阎辉
关键词:
痘苗病毒
GFP
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