刘楠楠
- 作品数：12 被引量：25H指数：3
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- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 水飞蓟素诱导高转移表型肺癌细胞系（Anip973）细胞凋亡的分子机制研究
- 2009年
- 目的探讨水飞蓟素诱导高转移表型肺癌细胞系A．i0973细胞凋亡的分子机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝（MTF）比色法、倒置显微镜和电子显微镜等形态学检测、流式细胞仪（FCM）技术检测、DNA Ladder分析、PARP的表达分析以及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3和caspase-9表达活性分析。结果水飞蓟素对人高转移表型肺癌细胞系埘p973细胞的增殖有显著抑制作用。随着浓度的增加，倒置显微镜下可见细胞数目减少，胞体变小、变圆，到高浓度时出现较多的死亡细胞。扫描电镜观察发现，凋亡细胞表现出典型的超微结构特征。流式细胞仪检测显示G1期细胞比例增多，S期细胞明显减少，G2期细胞略有减少，并出现明显的凋亡峰。水飞蓟素作用后的Anip973细胞出现明显的DNA Ladder和PARP降解增加等凋亡特征。凋亡相关蛋白Bax表达增加、caspase-3和caspase-9酶活性增加，而Bcl-2表达降低。结论水飞蓟素可以在体外抑制人肺腺癌细胞Anip973的增殖作用，并通过激活线粒体依赖的easpase凋亡通路，诱导其凋亡。
- 李文海梁军王春梅刘楠楠田菲胡运生刘锟
- 关键词：水飞蓟素细胞凋亡半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶
- α-亚麻酸减轻糖尿病大鼠心肌缺血/再灌注损伤被引量：2
- 2012年
- 目的研究摄食α-亚麻酸(ALA)对糖尿病大鼠心肌缺血/再灌注(MI/R)损伤的影响。方法构建高脂饲料-链脲霉素诱导的2型糖尿病大鼠模型(HFD-STZ),每日灌胃给予正常或HFD-STZ大鼠ALA处理(500μg/kg),4周后行心肌缺血(30 min)/再灌注(4或6 h),并检测心肌梗死范围、血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)活性、细胞凋亡,用Western blot检测PI3K、Akt等。结果 HFD-STZ大鼠MI/R损伤加重,虽摄食ALA 4周对正常动物MI/R损伤无影响,但可将HFD-STZ大鼠的心梗面积减小至37.7%±5.4%,显著低于对照组的45.6%±8.5%(P<0.05),且血清CK、LDH活性及细胞凋亡减少;还可增加HFD-STZ大鼠心肌PI3K表达及Akt磷酸化。结论长期摄食ALA有效减轻糖尿病大鼠MI/R损伤,可能与激活PI3K-Akt信号有关。
- 田菲张薇周和平刘楠楠于军陈宝莹张海锋
- 关键词：Α-亚麻酸糖尿病心肌缺血再灌注损伤
- GFE-1多肽与重组人肿瘤坏死因子α融合蛋白的构建及其体外活性和体内分布研究被引量：1
- 2013年
- 目的:构建GFE-1多肽与重组人肿瘤坏死因子α(rmhTNF-α)融合蛋白(GFE-1-rmhTNF),研究该融合蛋白的体外活性和体内分布。方法:利用基因工程方法,将人工合成的编码GFE-1的寡核苷酸片段连接在rmhTNF-α序列的3'端,转入大肠杆菌中诱导表达,采用Q-Sepharose FF阴离子层析柱和SP-Sepharose FF阳离子层析柱纯化蛋白,SDS-PAGE和Western印迹鉴定,测定该融合蛋白的体外活性,观察其在小鼠体内的分布情况。结果:构建了融合蛋白GFE-1-rmhTNF,并在大肠杆菌中获得高效表达。体外活性实验显示,GFE-1-rmhTNF对L929细胞有明显的杀伤活性;体内分布实验证实,GFE-1-rmhTNF在小鼠肺组织的富集远高于肝肾组织。结论:构建了融合蛋白GFE-1-rmhTNF,可显著杀伤L929细胞并特异性富集于小鼠肺组织。
- 周治中李维娜张存刘楠楠张伟张伟
- 关键词：人肿瘤坏死因子融合蛋白体外活性
- 十五肽BPC-157通过p38 MAPK信号通路途径调节人脐静脉内皮细胞的功能被引量：1
- 2013年
- 目的:初步探究十五肽BPC-157调节人脐静脉内皮细胞(HUVEC)功能的信号通路作用机制。方法:首先利用生物芯片筛选BPC-157参与激活的细胞信号转导通路途径,进而通过real-time PCR证实BPC-157对候选信号通路中相关基因的mRNA表达水平的影响,最后采用Western印迹观察BPC-157对候选信号通路中相关蛋白的磷酸化水平影响。结果:10μg/mL BPC-157作用于HUVEC 24 h后,信号转导通路发现者芯片结果显示,与18条信号转导通路相关的96个关键基因中分别有4个基因的mRNA表达水平上调和下调,其中与MAPK信号通路相关的3个关键基因c-Fos、c-Jun和Egr-1的mRNA表达水平显著性上调;低剂量BPC-157(1μg/mL)作用于HUVEC 12 h后,能够促进早期即刻基因c-Fos、c-Jun和Egr-1的mRNA表达水平;10μg/mL BPC-157作用于HUVEC 30 min后,可明显促进ERK1/2、p38蛋白磷酸化。结论:BPC-157可能通过活化MAPK信号转导通路途径后,激活下游早期即刻基因转录,启动靶基因的表达,从而发挥促进HUVEC增殖、迁移等功能。
- 王丽丽黄同列李维娜刘楠楠张伟张伟
- 关键词：人脐静脉内皮细胞基因芯片信号通路
- SD大鼠缓解-复发型实验性变态反应性脑脊髓炎模型的建立被引量：1
- 2013年
- 目的:建立大鼠缓解-复发型实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)模型,进行病理学研究,为多发性硬化(MS)的研究提供依据。方法:采用大鼠脊髓和弗氏完全佐剂混合乳剂一次性注入SD大鼠双足垫和尾部,1周后半剂量注射进行一次加强,诱导大鼠发生EAE;观察发病情况,HE染色观察病理变化,监牢兰染色观察脱髓鞘情况。结果:空白对照组大鼠均未出现症状,HE染色小脑及脊髓无炎性细胞浸润,监牢兰染色未见髓鞘脱失;模型组临床症状发生率为90%以上,HE染色可见小脑白质及脊髓血管周围有大量炎性细胞浸润,监牢兰染色发现有大片髓鞘脱落。结论:用SD大鼠脊髓髓鞘蛋白和弗氏完全佐剂混合乳剂可诱导同种SD大鼠发生缓解-复发型EAE。
- 刘烁李佳林冯国栋张阔刘楠楠薛晓畅张伟张英起
- 关键词：实验性变态反应性脑脊髓炎多发性硬化动物模型
- 复发缓解型实验性变态反应性脑脊髓炎动物模型的建立
- 2016年
- 目的:建立复发缓解型实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)动物模型,进行病理学研究,为多发性硬化(MS)的发病机制研究及治疗药物研发提供合适的动物模型。方法:选择不同品系动物(昆明种、BALB/c和C57BL/6小鼠,SD大鼠),采用各自品系来源的脊髓和弗氏完全佐剂混合乳剂一次性注入动物双足垫,1周后半剂量注射进行一次加强,诱导EAE;观察发病情况,HE染色观察病理变化,监牢兰染色观察脱髓鞘情况。结果:昆明种、BALB/c和C57BL/6小鼠均无明显症状,HE染色小脑的脊髓无炎性细胞浸润;SD大鼠对照组正常,模型组临床症状发生率为90%以上,HE染色可见小脑白质及脊髓血管周围有大量的炎性细胞浸润,监牢兰染色可见大片髓鞘脱落。结论:EAE模型在昆明种、BALB/c及C57BL/6小鼠中用脊髓匀浆不易于诱导,而用SD大鼠脊髓髓鞘蛋白和弗氏完全佐剂混合乳剂可高效率诱导出同种SD大鼠的复发缓解型EAE。
- 王静张旺倩褚楚吴守振王舒宁刘楠楠冯国栋
- 关键词：多发性硬化实验性变态反应性脑脊髓炎动物模型
- 微波诱导鼠成骨肉瘤细胞凋亡的研究
- 2009年
- 目的:探讨微波诱导鼠成骨肉瘤细胞系UMR106细胞凋亡及其适宜作用剂量、作用时间.方法:以微波不同剂量和时间作用于鼠成骨肉瘤细胞系,采用形态学观察、MTT法、软琼脂集落形成实验、FCM等方法观察微波诱导成骨肉瘤细胞的凋亡.结果:不同剂量的微波照射大鼠成骨肉瘤细胞后细胞形态发生了改变,随照射剂量的增高,细胞逐渐脱离基质;成骨肉瘤细胞在不同剂量的微波进行相同时间(1h)照射下存活率均显著下降,并呈剂量依赖性;微波作用于UMR106细胞的IC50为100W/m2微波辐射下不同时间后,细胞的存活率显著下降,呈时间依赖性;微波辐射下大鼠成骨肉瘤细胞出现G1期阻滞.结论:微波辐射可诱导大鼠成骨肉瘤细胞凋亡,其最佳作用时间和剂量为1h和100W/m2.
- 曾慈梅刘楠楠田菲王爽
- 关键词：微波成骨肉瘤凋亡
- 盘状结构域受体2胞外区在酵母系统中的融合表达、纯化和功能鉴定被引量：1
- 2007年
- 目的:盘状结构域受体2(discoidin domain recep-tor2,DDR2)是一种与肿瘤细胞转移相关的蛋白酪氨酸激酶,研究DDR2在类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)软骨破坏和肿瘤转移中的作用.方法:在毕赤酵母中表达DDR2胞外区片段(不含信号肽和跨膜区,命名为DR),并将所表达的蛋白进行纯化和功能鉴定,以备将来用作DDR2的特异性阻断剂.结果:获得了两株较高表达His-DR融合蛋白的毕赤酵母克隆;其表达的蛋白质中可溶性部分约占全部融合蛋白的18%;经Ni-NTA(nitric-tri-acetic acid)柱纯化后,获得了纯度约90%以上的可溶性His-DR融合蛋白;竞争结合抑制实验显示,His-DR具有阻断和细胞表面天然DDR2受体结合的功能.结论:所表达的融合蛋白His-DR具有抑制天然DDR2功能的作用.
- 陈健康张伟刘楠楠刘利兵田菲铁茹
- 关键词：盘状结构域受体2胞外区基因表达阻断剂
- 研究生细胞培养实验教学的准备实践被引量：4
- 2012年
- 细胞培养技术是医学和生物学研究中普遍应用的手段,在医学科研和临床应用领域里占据着极其重要的地位,也是研究型学生应该掌握的一门基本理论和技术。研究生在细胞培养实验课中学习到的理论和技术,很快就会应用到今后的科研工作中。结合实验教学的实施过程,浅谈研究生细胞培养技术课程实验教学准备实践中的几点体会。
- 梁向艳黄小军刘楠楠田菲刘芳娥曲萍周兴春于军
- 关键词：细胞培养实验教学研究生教学
- 类风湿性关节炎成纤维样滑膜(FLS)细胞中DDR2相互作用分子的筛选鉴定及其对FLS细胞侵袭能力的影响被引量：1
- 2015年
- 目的:在类风湿性关节炎(RA)成纤维样滑膜(FLS)细胞中筛选并鉴定盘状结构域受体2(DDR2)的相互作用蛋白,并研究其对FLS细胞侵袭能力的影响。方法:首先利用免疫沉淀结合SDS-PAGE分离鉴定DDR2互作蛋白波形蛋白,进而采用免疫沉淀和激光共聚焦实验,进一步验证波形蛋白是DDR2的相互作用蛋白,最后采用Transwell实验考察波形蛋白对RA FLS细胞侵袭能力的影响。结果:Ⅱ型胶原刺激引起RA FLS细胞中DDR2的磷酸化水平升高,DDR2被活化,活化前后共有8个DDR2相互作用蛋白发生变化,经质谱分析,其中变化最大的是波形蛋白和膜联蛋白A2;在HEK293T细胞中,免疫共沉淀结果显示Fc DDR2与波形蛋白存在相互作用;激光共聚焦结果显示在RA FLS细胞中,DDR2和波形蛋白存在共定位;下调RA FLS细胞中波形蛋白的表达后,细胞的侵袭能力较对照组显著下降。结论:波形蛋白是DDR2的相互作用蛋白,Ⅱ型胶原可引起RA FLS细胞的DDR2磷酸化水平升高,并通过波形蛋白促进RA FLS细胞的侵袭。
- 刘楠楠赵薇穆楠田菲薛晓畅颜真张伟
- 关键词：类风湿性关节炎盘状结构域受体2成纤维样滑膜细胞
