刘墨青
- 作品数：7 被引量：12H指数：2
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划“九五”国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 一种从感染的培养细胞中分离细菌RNA的方法被引量：5
- 2004年
- 病原菌全基因组表达谱研究是阐明其致病机理的必要的基础 ,已经成为当前生命科学领域的热点和重点 ;然而由于难于从感染的组织中快速固定并分离细菌RNA ,从而极大的制约了该研究的进展。介绍一种从感染的细胞中分离细菌RNA的方法———冷酸酚法 ,其主要特点是 :(1)使用可以破碎真核细胞但不影响细菌细胞完整性的SDS浓度 ,实现了从感染的细胞中快速分离完整的细菌 ,减少了宿主细胞RNA的污染 ;(2 )在将细菌从细胞中分离的同时即利用苯酚 乙醇混合液将其总RNA快速固定 ,既减少了RNA的降解 ,又最大限度地保持了细菌在哺乳细胞内原有的表达模式 ;(3)可以从 10 8个菌体中提取到至少 30 μg的总RNA ,足够用于反转录等其他研究。该方法将为利用DNAMicroarray技术进行的病原菌表达谱研究提供有益的借鉴。
- 刘红董杰刘墨青金奇
- 关键词：志贺氏菌RNA提取
- 福氏2a志贺氏菌sitC插入突变体的构建、检测及微阵列分析被引量：1
- 2005年
- 针对在低拷贝自杀质粒pCVD442中难以进行基因操作的缺陷,将Gateway技术应用在基因敲除前期的重组质粒构建过程.应用这一改进的系统构建了福氏2a志贺氏菌301株转铁相关基因sitC的插入突变体MTS.对突变体分别在培养基、细胞和动物实验水平进行了功能检测, 并利用芯片技术进行了限铁条件下突变体和野生型菌株的表达谱比较.结果显示,在添加150 μmol/L铁螯合剂DIP(2,2’-dipyridyl)条件下,MTS生长水平明显低于野生株,补加铁离子或锰离子可使突变株生长回复到丰富培养基条件下的生长水平;在HeLa细胞和U937细胞的胞内存活增殖能力和胞间扩散能力以及豚鼠角膜结膜炎实验中,MTS没有显现出明显的毒力改变,但在HeLa细胞侵袭过程中添加65 μmol/L 的DIP,MTS的胞内存活增殖能力和Sf301相比下降了51.6%.限铁条件下的表达谱结果表明,整体上MTS对缺铁变化比Sf301更敏感,上调的基因比野生株多106个,主要涉及膜转运、氨基酸代谢和功能未分类基因,而下调基因中参与能量代谢和碳水化合物代谢的较多.缺铁条件下,已知的转铁相关基因普遍上调,且MTS中上调的基因数目及上调幅度要高于Sf301.此结果再次证实了Sit铁转运系统对志贺氏菌生长的重要性.
- 刘墨青刘红孙立连董杰薛颖陈淑霞金奇
- 关键词：志贺氏菌福氏2A增殖能力缺铁
- 基因敲除技术建立及痢疾杆菌突变体的构建与检测
- 福氏2a痢疾杆菌301株(Shigella flexneri 2a strain 301)全基因组序列测定的完成,为功能基因组学的研究提供了源泉和契机.基因敲除作为功能基因组学的一个重要技术平台,是揭示和验证未知基因的功...
- 刘墨青
- 关键词：痢疾杆菌基因敲除MICROARRAY
- 文献传递
- 一种从发酵液中直接提取聚羟基烷酸酯的一步分离法
- 本发明公开了一种从含有聚羟基烷酸酯的细胞发酵液中直接提取聚羟基烷酸酯一步分离提取法。本发明属生物工程技术领域。其主要特征是在以真养产碱杆菌发酵生产聚羟基烷酸酯(PHAs)的发酵液中,直接加入表面活性剂、次氯酸钠和变形剂,...
- 翁维琦蔡以滨刘墨青易祖华陈琦
- 文献传递
- 补料培养提高真养产碱杆菌产3-羟基丁酸和3-羟基戊酸共聚物生产强度的研究被引量：4
- 2001年
- 对Alcaligeneseutrophus进行高密度培养 ,研究表明在发酵过程中进行有效控制 ,可以较大幅度地提高 3 羟基丁酸和 3 羟基戊酸共聚物 [P(3HB co 3HV) ]的生产强度。实验中选择使用限氮的方法积累P(3HB co 3HV) ,分别采用丙酸和戊酸为 3HV前体 ,对摇瓶种子生长状态 ,停氮时机对菌体生产P(3HB co 3HV)的影响以及补酸 (3HV前体 )策略进行了研究 ,在 6 6L罐中 ,以葡萄糖为碳源 ,以丙酸为 3HV前体培养 5 0h ,细胞干重 ,PHA产量 ,PHA含量分别达到 149 9g L ,12 4 9g L ,83 3% (其中 3HV组分占PHA的 12 4mol% ) ,生产强度达到 2 5 0 (g·h- 1 ·L- 1 ) ;以戊酸为3HV前体培养 45h ,细胞干重 ,PHA产量 ,PHA含量分别达到 16 0 2g L、119 0g L、74 2 % (其中 3HV组分占PHA的17 7mol% ) ,生产强度达到 2 6 4(g·h- 1 ·L- 1 )
- 蔡以滨刘墨青易祖华陈琦翁维琦
- 关键词：真养产碱杆菌3-羟基丁酸生物降解性
- 痢疾志贺菌A1型IroN,ShuA单、双突变体的构建及功能分析被引量：1
- 2006年
- 构建了痢疾志贺菌A1型SD51197株IroN与ShuA基因缺失及插入的单、双基因突变体MTS-1,MTS-2和MTS．对各突变体在培养基、细胞水平进行了功能检测,并利用SD51197全基因组芯片对各突变株进行了铁丰富和铁限制条件下的表达谱分析．结果显示,在添加铁螯合剂DIP条件下,各突变株生长水平都明显低于野生株,补加铁离子可以使突变株回复到正常生长水平;在HeLa细胞和U937细胞的胞内存活增殖和胞间扩散能力实验中,各突变株的生长状态都没有明显变化,但在HeLa细胞侵袭过程中添加DIP,MTS-1,MTS-2和．MTS的胞内存活增殖能力与野生株相比分别下降了23．4％,25．2％和43．6％．铁限制条件下的表达谱结果表明,各突变株对缺铁的变化比野生株更敏感,多个基因的表达发生改变,上调基因主要涉及转录、辅酶代谢、氨基酸代谢和功能未分类基因,而下调基因主要包括能量代谢和碳水化合物代谢以及功能未分类的基因;已知的转铁相关基因普遍上调．此结果表明,运铁相关基因IroN和ShuA可能影响着志贺氏菌的生长和毒力．
- 宾文刘墨青彭俊平孙立连徐星晔张景海金奇
- 关键词：微阵列分析
- 提高大豆根瘤菌质粒稳定性的研究被引量：2
- 2000年
- 以发光酶基因luxAB作为报告基因 ,将广谱稳定性质粒 pTR1 0 2的 parCBA/DE基因导入含 3 7kb增效片段的 pLARF3并去除该质粒的cos序列 ,构建成重组质粒 pHN1 1 5和pHN1 56。同时 ,构建只带有cos序列和luxAB的参比质粒 pHN1 57和 pHN1 58。将上述 4种质粒通过三亲本杂交分别导入费氏中华根瘤菌 (Sinorhizobium fredii)HN0 1 ,将 pHN1 55和pHN1 58通过两亲本杂交分别导入大豆慢生根瘤菌 (Bradyrhizobiumjaponicum)TA1 1 ,在人工继代培养条件下比较测定其质粒保持率。结果表明 ;经连续转接培养 7次后 ,pHN1 55、pHN1 56、pHN1 57和 pHN1 58在HN0 1中的质粒保持率分别为 1 0 0 %、67%、72 %和 92 %。连续转接培养 4次后 ,pHN1 55和 pHN1 58在TA1 1中的质粒保持率分别为 98%和 92 %。说明parCBA/DE基因能显著提高质粒在快、慢生型大豆根瘤菌中的遗传稳定性 ,cos序列的去除也有一定的作用。
- 刘墨青李友国周俊初
- 关键词：根瘤菌质粒稳定性重组质粒
