于才勇
- 作品数：14 被引量：36H指数：3
- 供职机构：第四军医大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 醛糖还原酶通过cAMP反应元件结合蛋白通路调控小胶质细胞向M2型极化被引量：1
- 2014年
- 目的探讨醛糖还原酶(AR)调控小胶质细胞极化的机制。方法体外培养BV2小胶质细胞,给予醛糖还原酶抑制剂(ARI),通过免疫组织化学染色和酶标仪检测荧光强度的方法检测细胞4-羟基反式-2-壬烯酸(HNE)表达;体外培养N9小胶质细胞,分别用脂多糖(LPS)、HNE、醛糖还原酶抑制剂fidarestat(ARI)及其组合刺激后,利用Western blot法检测在不同刺激条件下N9细胞调控细胞极化和极化相关蛋白的变化;在上述刺激的条件下,联合应用cAMP反应元件结合蛋白(CREB)抑制剂KG-501,利用Western blot法检测极化相关蛋白的变化。结果阻断AR后使HNE在BV2细胞内堆积;Western blot法检测发现ARI通过增加磷酸化CREB的表达来调控N9细胞向M2型极化;应用CREB抑制剂后,能阻断上述过程。结论阻断AR可以使CREB的表达上调进而促进小胶质细胞向M2型极化。
- 张倩刘玲薛茜郭虹敏刘芳芳卞干兰于才勇鞠躬王键
- 关键词：醛糖还原酶脊髓损伤小胶质细胞CREB
- 炎性条件下PD-L1敲除小鼠星形胶质细胞的活化和增殖能力降低
- 2016年
- 目的观察炎性条件下程序性死亡蛋白配体1(PD-L1)敲除小鼠皮层来源的星形胶质细胞(AS)的增殖和活化情况。方法制备PD-L1敲除小鼠模型,分离出野生型和PD-L1敲除小鼠皮层AS,用100 ng/m L脂多糖(LPS)联合100 ng/m Lγ-干扰素(IFN-γ)刺激,免疫细胞化学染色和实时定量PCR检测野生型和PD-L1敲除小鼠来源的AS的胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、波形蛋白(vimentin)、S100钙结合蛋白B(S100β)、bystin、神经上皮干细胞蛋白(nestin)、一氧化氮合成酶2(NOS2)、CC趋化因子配体5(CCL5)、白细胞介素6(IL-6)、集落刺激因子2(CSF2)、丝氨酸蛋白酶抑制剂A3n(Serpin A3n)和脂质运载蛋白2(Lcn2)的改变。结果 LPS联合IFN-γ刺激可明显促进AS的PD-L1的表达,PD-L1敲除小鼠AS的骨架结构较野生型AS存在差异。敲除小鼠AS的GFAP、vimentin、S100β、bystin mRNA水平较野生型AS明显下调,nestin mRNA水平无明显差异,但PD-L1敲除小鼠AS的增殖水平低于野生型AS。LPS联合IFN-γ刺激增加NOS2、CCL5、IL-6 mRNA的表达水平、但CSF2、Serpin A3n和Lcn2 mRNA无明显变化。结论炎性条件下PD-L1敲除小鼠星形胶质细胞的活化与增殖水平较野生型AS下降。
- 宋俊许智华田野方超刘芳芳于才勇刘玲王键
- 关键词：星形胶质细胞反应性星形胶质细胞细胞骨架增殖
- 一种红色荧光蛋白转基因小鼠的建立被引量：1
- 2009年
- 目的:建立广泛表达红色荧光蛋白(RFP)的转基因小鼠,便于组织和细胞移植研究.方法:把DsRed基因片段插入到pCAGGS载体的强启动子下游构建转基因载体pCAG-DsRed.经细胞转染验证,受精卵原核注射,建立红色荧光蛋白转基因C57BL/6小鼠.PCR鉴定转基因小鼠的基因型;红色荧光蛋白在组织中的表达情况,则通过荧光显微镜检测小鼠各组织器官冰冻切片.结果:pCAG-DsRed载体可以在真核细胞中表达RFP,经基因型分析和表型观察,得到两只红色荧光蛋白的首建鼠.经荧光显微镜观察各组织冰冻切片发现红色荧光蛋白在多个组织器官中表达,其中在神经系统和肌肉组织中表达量较高.结论:成功建立了一种红色荧光蛋白转基因小鼠,红色荧光蛋白在转基因小鼠的神经系统和肌肉组织等中高表达.
- 于才勇刘芳芳郭俊宫卫东鞠躬王键
- 关键词：红色荧光蛋白
- 醛糖还原酶在小鼠视神经损伤后的表达及作用
- 2013年
- 目的观察视神经中醛糖还原酶(AR)在小鼠视神经横断(ONT)损伤后的表达变化及其对视网膜神经节细胞存活和再生的影响。方法采用C57BL/6-AR+/+(野生型)小鼠、C57BL/6-AR-/-(AR基因敲除)小鼠、Thy1-YFP/AR+/+(AR+/+YFP小鼠)小鼠和Thy1-YFP/AR-/-小鼠(AR-/-YFP小鼠),建立视神经横断模型。通过Western blot方法,检测横断损伤后的视网膜中AR分子的表达变化;利用视网膜组织冰冻切片计数观察比较AR基因敲除小鼠和野生型小鼠视神经横断损伤后存活的视网膜神经节细胞数目;通过Western blot法,观察比较神经生长相关蛋白43(GAP-43)在AR基因敲除小鼠和野生型小鼠视神经横断后的表达变化。结果 Western blot检测发现AR分子在野生型小鼠视神经横断后表达随时间延长逐渐升高。AR敲除小鼠在视神经横断损伤后其存活的视网膜神经节细胞数目多于野生型小鼠。AR敲除小鼠在视神经横断损伤后GAP-43的表达量高于野生型小鼠组(P<0.05)。结论 AR参与了视神经横断损伤后的视网膜神经节细胞存活的调节,AR缺失会促进视神经横断损伤后的再生修复。
- 白倩刘玲陈鹏于才勇姚安会孙丽娟雷润佳胡丹王键
- 关键词：醛糖还原酶视网膜神经节细胞
- DO11.10转基因小鼠脊髓损伤后的运动功能恢复被引量：1
- 2010年
- 目的:通过比较两种小鼠-DO11.10和BALB/c小鼠脊髓损伤后不同的运动功能恢复程度和损伤区的形态学变化来分析T淋巴细胞对脊髓损伤修复的影响。方法:建立小鼠脊髓重度夹伤模型,H&E染色,GFAP、CD11b和淋巴细胞免疫组织化学实验分析损伤14 d、21 d后损伤区的变化;在损伤后0 d、7 d、14 d和21 d进行Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)运动评分来评价小鼠运动功能恢复情况。结果:脊髓损伤后21 d,BALB/c小鼠产生了较厚的胶质瘢痕并伴有明显的固缩现象;而DO11.10小鼠中只观察到稀薄的胶质瘢痕形成并没出现明显的固缩。DO11.10小鼠脊髓损伤后14 d,巨噬/小胶质细胞浸润较BALB/c小鼠明显增加。脊髓损伤后21 d,DO11.10小鼠脊髓损伤区中的T淋巴细胞较BALB/c小鼠明显减少。BBB运动评分显示,在损伤后21 d内DO11.10小鼠较BALB/c小鼠有显著的运动功能恢复。结论:脊髓损伤后21 d内,针对神经组织抗原的自身反应性T淋巴细胞的浸润和存在不利于脊髓损伤后的运动功能恢复。
- 王慧郭俊赵宇卞干兰刘芳芳于才勇冯睿鞠躬王键
- 关键词：脊髓损伤BBB评分炎症反应
- PB-GF转座子系统的构建及其在真核细胞中转座的研究被引量：1
- 2014年
- 目的构建能在真核细胞中发生转座的PB-GF(piggyBac gene-finder)转座子系统,作为发现和研究编码基因的工具。方法通过克隆技术,构建PB转座子载体pPB[CMV-neo]和PB转座酶表达载体pCAG-PBase,转染HeLa细胞,G418筛选和亚甲基蓝染色,验证PB转座酶在真核细胞中的转座能力。构建PB转座子载体pPB[β-Gal-pA/act-EGFP],使其包含两侧翼端加入PB转座酶识别位点反向末端重复序列(ITR),ITR1和ITR2,以及启动子陷阱和PolyA陷阱的DNA片段;同时与PB转座酶表达载体pCAG-PBase一起,构成PB-GF转座子系统。将PB-GF转座子系统转染HeLa细胞,通过荧光显微镜和流式细胞仪检测PolyA陷阱报告基因EGFP的表达;通过X-gal染色,观察启动子陷阱报告基因β-Gal的表达,明确PB-GF转座酶系统在真核细胞中的转座情况。结果成功构建成以转座子PiggyBac为基础的,含有启动子和PolyA陷阱的PB-GF转座子系统,并用该系统转染HeLa细胞24 h后观察到有相当数量的EGFP和LacZ阳性的细胞出现,转座效率高达26%。结论成功构建PB-GF转座子系统并可以在真核细胞中发生转座。
- 雷占翔刘芳芳于才勇卞干兰郭虹敏刘玲薛茜鞠躬王键
- 关键词：转座子基因组
- Nogo-A及其受体在中枢神经系统发育过程中作用及机制的研究进展被引量：2
- 2011年
- Nogo-A及其受体在成年哺乳动物的中枢神经系统(CNS)中,尤其是在中枢神经系统损伤及修复过程中的作用及机制已经被广泛而深入的研究,但是它们在CNS发育中的扮演的角色却了解甚少。新近研究表明,Nogo-A在CNS发育过程中神经前体细胞分化及迁移,轴突的生长及可塑性的变化以及少突胶质细胞前体细胞分化和成髓鞘化等过程中发挥着重要的作用。
- 邓斌邓斌陈静刘芳芳于才勇程建华鞠躬鞠躬
- 关键词：NOGO-ANGR神经前体细胞
- miR-152在脊髓损伤后表达变化及其真核表达载体的构建被引量：2
- 2012年
- 目的:观察脊髓损伤后miR-152的表达变化;构建miR-152真核表达载体并观察其在细胞中的表达。方法:利用原位杂交技术观察miR-152在脊髓损伤过程中的变化及细胞水平分布。根据miR-152的基因序列,设计引物,经PCR扩增后连接到pCIG质粒,构建含有EGFP报告基因的pCIG-miR-152真核表达载体;将pCIG-miR-152载体转染HeLa细胞,通过观察EGFP报告基因的表达以及qPCR方法鉴定miR-152可在真核细胞中过表达;通过生物信息学的方法预测miR-152的靶基因。结果:miR-152在正常脊髓中表达水平低,而在脊髓损伤后表达水平逐渐升高,尤其是在损伤后第14天和第21天。在损伤的脊髓中miR-152主要分布在损伤区周围的神经元中。成功构建了带有EGFP报告基因的miR-152真核表达质粒pCIG-miR-152,并能在真核细胞中高表达miR-152。结论:miR-152在损伤的脊髓神经元中高表达;成功构建了高表达的miR-152真核表达载体。
- 武昊赵宇赵湘辉薛茜于才勇刘芳芳鞠躬王键
- 关键词：脊髓损伤MICRORNA真核表达载体
- 醛糖还原酶在小鼠损伤脊髓小胶质/巨噬细胞中的表达及其作用被引量：4
- 2012年
- 目的:观察小鼠在脊髓损伤(SCI)后,醛糖还原酶(AR)在脊髓损伤后修复过程中的作用及可能的机制。方法:采用C57BL/6-ar+/+(B6野生型小鼠)和C57BL/6-ar-/-(B6-AR基因敲除)小鼠,建立脊髓重度夹伤模型。首先分析了AR分子在损伤脊髓中的细胞表达类型及脊髓损伤后AR分子mRNA的表达水平变化情况;通过BBB运动学分析,比较AR基因敲除小鼠和野生型小鼠脊髓损伤后运动功能恢复情况,对比损伤区面积变化;通过qRT-PCR方法,检测对比M1/M2型巨噬细胞特异分子iNOS和Arg I的表达变化。结果:AR分子在野生型小鼠损伤脊髓中的小胶质/巨噬细胞中高表达;qRT-PCR研究发现:脊髓损伤后AR表达逐渐升高,在损伤后第3天达到高峰。AR敲除小鼠在脊髓损伤后,其运动功能恢复好于野生型小鼠(P<0.05),同时损伤区面积也小于对照组。AR基因缺失后,损伤脊髓中的小胶质/巨噬细胞通过高表达Arg I向M2型巨噬细胞方向极化。结论:AR通过调节脊髓中小胶质/巨噬细胞的极化来影响脊髓损伤后的修复。
- 陈鹏郭宏敏郑晶晶于才勇刘芳芳卞干兰钟金淑子鞠躬王键
- 关键词：醛糖还原酶脊髓损伤小胶质细胞巨噬细胞
- 程序性死亡配体2(PD-L2)多克隆抗体在小鼠组织中的交叉反应性研究
- 2013年
- 程序性死亡分子-1(programmed death1,PD-1,由pdcd1基因编码)和它的2个配体PD-L1和PD-L2组成一条重要的抑制性免疫信号通路来防御体外微生物和维持自身免疫耐受.与B7-CD28家族的其他分子不同的是,PD-L1和PD-L2的表达并不局限于免疫系统.本研究发现,一种识别小鼠PD-L2(mPD-L2)胞外段的多克隆抗体(R&D Systems,MN,USA)可以和多种小鼠组织中的相应抗原结合,这些组织包括:垂体前叶和中间叶、嗅球、嗅上皮、舌上皮、角质上皮细胞、皮肤和胡须的毛囊.这一发现不同于以前关于mPD-L2分子组织定位的报道.然而,随后应用RT-PCR和Western印迹等方法,均未在上述组织中检测到PD-L2的转录本和蛋白,结果提示小鼠的PD-L2多克隆抗体可能与组织内其他抗原存在免疫交叉反应.小鼠发育研究显示,mPD-L2样的抗原最早表达在胚胎12.5天(E12.5)的嗅上皮中;胚胎期14.5天(E14.5)时,皮肤、舌以及皮肤和胡须的毛囊均可见mPD-L2样抗原的表达;从胚胎期18.5天(E18.5)开始,mPD-L2样抗原的分布模式与成年小鼠的分布模式基本一致.生物信息学分析和其他实验结果提示,与PD-L2多克隆抗体起交叉反应的候选蛋白可能是神经细胞黏附因子(NCAM)和Hemicentin-1.结果表明,利用这种PD-L2多克隆抗体检测mPD-L2分子在中枢神经系统和上皮组织,如嗅上皮的表达时,对于染色结果的解释需要特别谨慎.此外,这种PD-L2多克隆抗体也可用于标记小鼠胚胎发育过程中的嗅上皮细胞.
- 赵宇卞干兰于才勇刘芳芳刘玲郭虹敏郭俊鞠躬王键
- 关键词：交叉反应性PD-L2免疫反应性NCAM
