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κ-卡拉胶酶CgkX催化区的重组表达菌株筛选和发酵优化被引量：1: 2016年; 目的:CgkX是来自Pseudoalteromonas sp.QY203的一种高活性、高稳定性的κ-卡拉胶酶,本文旨在构建CgkX催化结构域(CgkX-CM)重组表达菌株,并对发酵条件进行优化,提高CgkX-CM的产量。方法:在分析κ-卡拉胶酶CgkX-CM基因序列的基础上,构建多种CgkX-CM表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行重组表达,通过酶活测定筛选其中产量最高的表达菌株,并优化发酵起始pH、诱导温度、IPTG浓度、装液量以及甘氨酸浓度等因素。结果:构建了5种重组表达菌株,其中E.coli BL21(DE3)/p ET22b-CgkX-CM酶产量是其他重组菌株的7.4-11.6倍。确定了该菌株最佳发酵条件为:培养基含1 g·L^(-1)甘氨酸(起始pH 7.5),装液量为75 m L,0.1 mmol·L^(-1) IPTG 20℃诱导28 h,酶产量是优化前的7.3倍。结论:经过重组表达载体筛选和发酵优化,CgkX-CM产量大幅度提高,为今后比较CgkX全长及其催化区域的酶学性质,确定C端Big_2结构域对CgkX的作用奠定了基础。; 张兰苏平安杨雪梅于文功韩峰; 关键词：催化结构域发酵优化

海洋弧菌QY103褐藻胶裂解酶的研究: 褐藻胶是由β-D-甘露糖醛酸和α-L-古罗糖醛酸两种糖单元通过1，4糖苷键聚合而成的线性大分子，主要存在于海带、马尾藻、巨藻等褐藻的细胞壁和细胞间质。另外，假单胞菌属、固氮菌属等细菌也可以产生胞外褐藻胶，但在β-D-甘露...; 韩峰; 关键词：海洋弧菌褐藻胶裂解酶; 文献传递

褐藻胶裂解酶产生菌Vibro sp.QY102的发酵条件优化被引量：17: 2007年; 对海洋来源的Vibro sp.QY102的产褐藻胶裂解酶的发酵条件进行研究。结果表明,该菌株最适液体培养基成分为(w/v):0.5%褐藻酸钠;0.4%蛋白胨;0.3%KH2PO4;0.7%K2HPO4.3H2O;2%NaCl;0.01%MgSO4.7H2O,pH=6.0。按3%的接种量接入培养基,30℃150 r/min振荡培养120 h,产酶达到10.2 U/mL,为优化前的4.5倍。Mg2+是该菌株产酶所必需的,这在其他褐藻胶裂解酶生产菌株中未见报道。该菌株产酶发酵条件的研究,为褐藻胶裂解酶的大规模制备及应用奠定了基础。; 傅晓妍李京宝韩峰路新枝于文功; 关键词：褐藻胶裂解酶弧菌发酵条件

参加生药学实验课程教学评估的体会: 2023年; 生药学是药学专业核心课程之一,实验教学在生药学课程中占有重要地位。通过实验教学,不仅培养学生的科学思维能力、实践操作能力以及严谨扎实的科研态度,学生还掌握了生药鉴定的基本方法,初步具备了鉴别生药的能力。2022年秋季学期笔者参加了学校组织的生药学实验课程教学评估工作,教学质量和效果得到了评估专家和学生的一致好评,本文总结了教学评估中的经验。; 李海花刘婵娟刘婵娟韩峰韩峰郝杰杰刘红兵李春霞; 关键词：教学评估教学质量

一种β－琼胶酶基因aga及其制备方法和应用: 本发明的β－琼胶酶基因agaA是编码假别单胞菌CY24的β－琼胶酶的基因，用其生产的重组β－琼胶酶温度和pH稳定性好，活性高，能降解琼脂糖，降解产物主要为聚合度2－6的新琼寡糖，因此可以用于新琼寡糖的制备以及从琼脂糖凝胶...; 褚艳韩峰李京宝路新枝; 文献传递

一种β－琼胶酶基因agaB及其制备方法和应用: 一种β-琼胶酶基因agaB，其特征在于它是编码假别单胞菌CY24的β-琼胶酶的基因。本发明的β-琼胶酶基因agaB编码的β-琼胶酶能够特异性地降解琼胶产生聚合度为8-14的新琼寡糖，每种主要新琼寡糖在降解产物中的含量大于...; 于文功马翠萍路新枝韩峰褚艳石超; 文献传递

海洋细菌QY202产κ-卡拉胶酶的分离纯化和性质研究被引量：5: 2010年; 为获得高效降解卡拉胶菌株,从青岛太平角海域采集的角叉菜表面分离到1株高产κ-卡拉胶酶的海洋交替假单胞菌（Pseudoalteromonas sp.）QY202,经硫酸铵沉淀、脱盐、DEAE阴离子交换层析等步骤从该菌株发酵液上清中分离纯化得到1种专一性降解κ-卡拉胶的κ-卡拉胶酶,并研究了该酶的基本酶学性质。结果表明该酶被纯化了23.1倍,回收率为43.9%,分子量大小为33.2 kDa。酶的最适反应温度为40℃,最适反应pH为8.0,在0-40℃,pH=7.0-8.0之间酶活力较稳定。酶对底物κ-卡拉胶的米氏常数Km值为1.6 mg/mL。Na^＋、K^＋对酶活有促进作用,而Hg^2＋、Cu^2＋强烈抑制酶的活性。酶解κ-卡拉胶的主产物为硫酸新κ-卡拉二糖和硫酸新κ-卡拉四糖。; 段高飞苏贝韩峰于文功; 关键词：交替假单胞菌分离纯化

海洋弧菌QY105中褐藻胶寡糖酶OalA的基因克隆、重组表达与性质研究被引量：2: 2016年; 目的褐藻胶寡糖酶可将褐藻胶多糖和寡糖降解为单糖,但现有的褐藻胶寡糖酶数量极少且活力较差。本文旨在从海洋弧菌QY105中克隆寡糖酶OalA的编码基因,重组表达并研究其酶学性质。方法利用简并PCR和SiteFinding-PCR从海洋弧菌QY105中克隆得到褐藻胶寡糖酶OalA的编码基因,在大肠杆菌中进行重组表达,对重组酶进行分离纯化及酶学性质研究。结果褐藻胶寡糖酶OalA基因全长2082bp,编码1条含有693个氨基酸残基的多肽链,理论分子量为79.17kDa,理论等电点为4.98,属于多糖裂解酶第15家族(PL^(-1)5)。重组OalA比活力为9.2U·mg^(-1),最适温度30℃,在10℃的酶活力达到最高酶活的45%,最适pH7.6,在低于30℃和pH6~10范围内稳定,偏好降解polyM。结论OalA具有低温酶的特点,且对polyM具有偏好性,可用于褐藻胶单糖制备、PL^(-1)5家族结构与功能相互关系研究等领域。; 王莹张兰王亚楚艺于文功韩峰; 关键词：褐藻胶弧菌

褐藻胶裂合酶的制备方法及其应用: 一种褐藻胶裂合酶的制备方法，其特征是配制培养基，灭菌，冷却后，以弧菌进行接种，然后恒温摇床振荡发酵培养，将所得发酵液除菌，对上清液超滤浓缩；所述的弧菌为Vibrio sp.QY101。本发明的优点是：发酵时间短，产量高，...; 于文功宋凯韩峰路新枝宫倩红; 文献传递

一种新的褐藻胶裂合酶及其制备方法和应用: 一种褐藻胶裂合酶的制备方法，包括配制培养基，灭菌后接入弧菌，然后在恒温摇床振荡发酵，其特征是将所得发酵液除菌后用微孔滤膜过滤，对上清液进行压滤浓缩至干，再用疏水层析除去与产品结合的褐藻胶。优点是本发明中的褐藻胶裂合酶活力...; 于文功李京宝韩峰路新枝宫倩红; 文献传递

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韩峰