陈新宏
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：南方医科大学公共卫生与热带医学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 用FRET技术研究TRPC1和Akt在细胞迁移中的相互作用
- 2013年
- 目的利用荧光共振能量转移(FRET)技术研究在细胞迁移过程中瞬时受体电位阳离子通道1(TRPC1)和蛋白激酶B(PKB/Akt)的相互作用。方法构建质粒pECFP-C1-TRPC1和pEYFP-C1-Akt,并转染非洲绿猴肾细胞(cos-7 cell),用激光共聚焦显微镜观察表皮生长因子(EGF)激活cos-7细胞前后的荧光蛋白表达和分布情况,并利用FRET检测EGF刺激cos-7细胞前后的TRPC1和Akt分子间的能量转移效率(E)和相互作用距离(R)。结果在EGF激活的cos-7细胞中,TRPC1和Akt蛋白有共定位现象;分别表达融合荧光蛋白后用EGF激活cos-7细胞,可见TRPC1由胞质转位到胞膜及近膜区,Akt未发生变化;共表达融合荧光蛋白后用EGF激活cos-7细胞,TRPC1和Akt由胞质转位到胞膜及近膜区,并共定位在细胞移动方向的前极;FRET检测结果显示其能量转移效率为40%,两个分子间的作用距离为5 nm。结论在EGF激活cos-7细胞迁移过程中,TRPC1和Akt发生了FRET,表明TRPC1和Akt之间有相互作用。
- 陈新宏蔡春青曾宏强杨心怡孟晓静
- 关键词：荧光共振能量转移AKT细胞迁移
- TRPM7对dHL-60细胞极性化的影响
- 2013年
- 目的探讨瞬时受体电位M7(transient receptor potential melastatin 7,TRPM7)对dHL-60细胞极性化的影响及可能的分子机制。方法通过siRNA技术下调dHL-60细胞TRPM7蛋白表达,分为转染无义干扰片段的对照组和TRPM7干扰组,用Zigmond小室观察细胞极性化的变化,采用Western blot检测TRPM7和磷酸化AKT的表达,并用细胞免疫荧光方法观察磷酸化AKT的定位情况。结果与转染无义干扰片段的对照组相比,转染TRPM7靶向siRNA的dHL-60细胞中,TRPM7蛋白表达水平明显降低(P<0.05);干扰TRPM7后dHL-60细胞的极性化率与对照组相比显著增加(P<0.05);磷酸化AKT表达明显上调,并从细胞质转向了细胞膜,呈极性分布在细胞质膜上,而总AKT的表达则无明显变化。AKT的特异性抑制剂Triciribine可使dHL-60细胞在fMLP刺激下的磷酸化AKT的极性分布消失。结论 TRPM7通过AKT信号通路调控细胞极性相关分子,进而影响dHL-60细胞的极性化能力。
- 吴娴波邹文英蔡春青陈新宏邹飞孟晓静
- 关键词：极性化AKT
