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郑少鹏: 作品数：34 被引量：101H指数：6; 供职机构：首都医科大学更多>>; 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金北京市教委科技发展计划更多>>; 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>

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豚鼠内耳椭圆囊斑体外原代培养: 2005年; 目的探讨豚鼠内耳椭圆囊斑体外正常培养状态及其在体外用氨基糖苷类抗生素庆大霉素后的毒性损伤特征,以期建立前庭外周器官体外实验模型。方法豚鼠被随机分成三组:①正常未培养对照组;②正常原代培养组,利用体外组织培养方法对豚鼠内耳椭圆囊斑进行正常原代培养;③庆大霉素损伤原代培养组。正常原代培养组和庆大霉素损伤原代培养组在培养期间每天用相差显微镜观察生长晕,正常培养组在培养的第5天和第10天固定用石蜡包埋切片光镜观察。庆大霉素组在48小时用树脂包埋半薄切片观察。结果正常原代培养组在培养10天过程中,用相差显微镜观察椭圆囊斑在培养第1～4天无明显生长晕,在培养第5天明显从椭圆囊边缘长出。随培养时间延长,生长晕不断扩大,以成纤维细胞为主。庆大霉素损伤原代培养组在培养2天内每天用相差显微镜观察椭圆囊斑未见明显生长晕。正常原代培养至第5和第10天,石蜡包埋切片显示支持细胞和毛细胞存活。庆大霉素组在48小时,用树酯包埋半薄切片观察,感觉上皮层的毛细胞溶解破坏,支持细胞存活。结论椭圆囊斑器官体外培养方法可行,并培养成功,为今后进一步研究椭圆囊斑提供了实验模型。; 孟曦曦郑少鹏刘鋋王珂王元身黄魏宁; 关键词：器官培养

低氧诱导人VEGF基因表达载体的构建及其蛋白表达检测被引量：2: 2011年; 目的以人血管内皮细胞生长因子(hVEGF)基因的低氧反应元件(HRE)作为增强子,构建含HRE的真核表达载体,探讨含HRE不同拷贝数的载体对低氧的反应状态。方法将人工合成的HRE串联后与CMV启动子连接,替换pcDNA3.1的启动子部分,构建成低氧诱导真核表达载体;将hVEGF基因重组到此载体中,转染BHK细胞。用免疫组化染色法检测VEGF的表达,用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测低氧前后细胞hVEGF表达的变化。结果成功构建了含HRE的低氧诱导真核表达载体4HRE-pcDNA-VEGF和6HRE-pcDNA-VEGF。转染细胞后进行低氧培养,VEGF的表达均增高,含6HRE的低氧诱导作用高于4HRE。结论在含HRE的真核表达载体中,低氧时可诱导基因的表达,其拷贝数可影响诱导作用的强度。; 殷爱红武文琦何丽明郑少鹏; 关键词：缺氧诱导因子低氧反应元件血管内皮细胞生长因子

利用重组人α乳清蛋白和油酸大量快速制备高活性的HAMLET肿瘤杀伤复合物被引量：2: 2012年; 目的可致肿瘤细胞死亡的人α乳清蛋白(human alpha-lactalbumin made lethal to tumor cells,HAMLET)是一种可导致多种癌细胞死亡的强效选择性肿瘤杀伤蛋白质-脂酸复合物。为了使HAMLET应用于肿瘤的治疗并对其杀伤机制进行探讨,我们需要建立和优化简便、快速、规模化制备与纯化HAMLET的方法。方法通过构建人α乳清蛋白分泌型细胞MCF-7的cDNA文库,PCR扩增出编码人α乳清蛋白成熟肽段的全长序列,然后克隆入pET30a(+)表达载体质粒,并转化BL21(DE3)宿主大肠杆菌。经过IPTG诱导,表达细菌的裂解,蛋白体外复性,Ni-NTA亲和层析柱纯化等步骤,获得了高纯度的重组人α乳清蛋白的C端His标签融合蛋白。纯化蛋白经EDTA脱钙后,与油酸(oleic acid,OA)在加热条件下制备HAMLET复合物。同时,对HAMLET的理化特性和生物学活性进行检测。结果通过与经典方法制备的牛α乳清蛋白和OA复合物(BAMLET)进行比较,发现我们制备的HAMLET在紫外吸收光谱、疏水性质特征及肿瘤杀伤活力方面与BAMLET活性相符,并且可引起HeLa肿瘤细胞的凋亡样程序性死亡。结论本研究自主制备的HAMLET成本经济、方法简便且具有较好的规模化放大前景,为日后临床应用奠定基础。; 张轶博曾瑞霞牛静郑少鹏贾弘禔丁卫; 关键词：肿瘤细胞程序性死亡

BATF2/SARI通过抑制p53依赖的NF-κB转录活性诱导肿瘤细胞凋亡被引量：14: 2011年; BATF2/SARI是一种新发现的转录因子,具有与BATF和BATF3类似的碱性亮氨酸拉链结构,可抑制AP-1转录因子家族(AP-1 transcription factors)活性,从而发挥抑癌作用.但目前关于BATF2表达调节与功能尚不十分清楚.本研究证明,BATF2通过抑制p53相关的NF-κB活性诱导细胞凋亡.实时定量PCR检测mRNA揭示,BATF2/SARI在p53-野生型的A549、HeLa细胞高水平表达,但在p53-缺失型的H1299细胞表达较低.基因转染结合MTT法、TUNEL法显示,过表达BATF2可诱导凋亡,抑制肿瘤细胞增殖;这种抑制效应与细胞p53表达水平相关.采用含NF-κB或AP-1结合位点的(人工合成)启动子驱动的荧光素酶报告基因活性分析发现,过表达BATF2既可抑制AP-1,又可抑制NF-κB转录活性;抑制NF-κB活性与细胞p53状态有关.RNA干扰敲减A549、HeLa细胞的p53表达可消除过表达外源BATF2引起的NF-κB活性下降.本研究结果提示,BATF2通过抑制NF-κB及AP-1转录活性诱导凋亡,从而抑制细胞增殖;BATF2对NF-κB活性的抑制作用依赖p53.因此,BATF2作为一种抑癌基因产物,其作用机制可能比当前的认识和预期更为复杂.; 路钊郑少鹏牛静贾弘禔丁卫; 关键词：NF-ΚB P53 肿瘤凋亡

体外转基因肌细胞植入帕金森病模型大鼠脑内的研究被引量：6: 1997年; 用6-羟多巴胺单侧损毁脑内多巴胺能系统建立的帕金森病大鼠模型进行基因治疗实验。所用方法为重组带有酪氨酸羟化酶基因的载体——质粒pCMVTH(6.04kb),在体外将此质粒通过脂质体Lipofectin介导转入原代培养的骨骼肌细胞内;经检测证实这些经遗传改造的骨骼肌细胞能表达酪氨酸羟化酶后,再将之植入模型大鼠脑的纹状体内。结果显示,这些表达酪氨酸羟化酶的肌细胞可在大鼠模型脑内长期存活,模型大鼠的运动症状有实质性改善,其纹状体多巴胺水平明显升高。; 徐群渊田竟生张进禄杨慧郑少鹏刘玉军; 关键词：震颤性麻痹基因治疗基因转移

增加腺相关病毒靶向转导效率的重组腺相关病毒及其应用: 本发明公开了增加腺相关病毒靶向转导效率的重组腺相关病毒及其应用。所述重组腺相关病毒含有经过改造的腺相关病毒VP2蛋白以及腺相关病毒原始的VP1蛋白、VP2蛋白和VP3蛋白；其中，所述经过改造的腺相关病毒VP2蛋白是VP2...; 丁卫石文洁郑少鹏牛静吴巍; 文献传递

案例式教学法——医学生物化学课程学习与临床应用的桥梁被引量：7: 2009年; 生物化学课程是高等医学院校一门重要的基础课,但难学难懂且难教。通过案例式教学法在医学生物化学中的应用,激发学生的学习兴趣,加强学生学习生化的主观能动性,为提高教学质量、探讨新的教学模式、深化教学改革,找到一条有效的教学途径。; 文朝阳韩玉英何丽明熊英王雅梅杨晓梅付慧芳郑少鹏贺俊崎; 关键词：案例式教学法医学生物化学教学改革

医学留学生生物化学全英语教学的探索被引量：6: 2010年; 近年来,留学生教育已经逐渐成为我国高等教育的组成部分,保证教学质量是留学生高等教育的重要任务.本文以首都医科大学招收的首届外国留学生为研究对象,从师资、教学计划与内容、教学过程及考核等方面,对留学生的医学生物化学的教学工作进行了分析,针对发现的问题提出了改进的建议,期望有助于促进留学生教学水平的提高.; 程杉余和芬韩玉英油红捷王雅梅文朝阳郑少鹏; 关键词：留学生生物化学医学生

过表达bFGF促进大鼠急性缺血心肌的毛细血管生成被引量：2: 2011年; 研究过表达人碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)在大鼠急性心肌缺血模型中的表达及其对心肌血管再生的影响.将含人bFGF质粒pcDNA/b转染人脐带静脉内皮细胞(HUVEC),进行MTT检测.pcDNA/b转染人肾细胞293细胞系,进行G418稳定筛选,Western印迹检测.建立大鼠急性心肌梗死模型,分别将生理盐水、空质粒pcDNA3.1(+)和pcDNA/b分3点注射于梗死交界处心肌内4周后取材,做常规HE染色和Masson染色,测量各组微血管数量和梗死面积.经免疫组织化学染色鉴定和电镜观察,过表达外源bFGF可以促进HUVEC(细胞)生长;pcDNA/b能在293细胞中高效表达外源bFGF基因.pcDNA/b注射组梗死交界处可见大量新生血管,毛细血管总数明显大于对照组,梗死面积明显小于对照组.pcDNA/b组在梗死交界区有bFGF阳性表达.电镜观察显示,在梗死交界处心肌细胞间有毛细血管增生,分化成2个血管腔.本实验证明,过表达bFGF具有促进大鼠急性缺血心肌的毛细血管生成的作用,为bFGF基因治疗缺血性心肌病的研究提供实验基础.; 王雅梅刘冰孙丽翠祁雅慧司杨闫豫东郑少鹏; 关键词：碱性成纤维细胞生长因子真核表达载体基因过表达

酪氨酸羟化酶基因载体－pCMVTH　质粒的构建及在大鼠骨骼肌内的表达被引量：2: 1995年; 为用转基因方法治疗巴金森氏病大鼠模型，本研究采用分子克隆技术，将合成多巴胺的关键酶－酪氨酸羟化酶（ＴＨ）的基因，克隆进入以巨细胞病毒ＣＭＶ为启动子的载体质粒内，经限制性内切酶定位分析证实该重组的ＤＮＡ质粒的可靠性。携带ＴＨ基因的ＰＣＭＶＴＨ质粒以ＬＩＰＯ－ＦＥＣＴＩＮ介导，在培养的原代骨骼肌细胞中高效表达。本研究为进一步用转基因的细胞植入脑内以治疗巴金森氏病打下一定基础。; 杨慧孙阳田竟生郑少鹏张进禄赵春礼徐群渊; 关键词：酪氨酸羟化酶

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