- 抗幽门螺杆菌rHpaA鸡蛋黄抗体的研制被引量：2
- 2006年
- 目的:采用基因工程技术表达重组幽门螺杆菌黏附素rHpaA,以此蛋白为抗原制备抗rHpaA的高特异性鸡蛋黄抗体。方法:诱导重组质粒pQE30-HpaA在大肠杆菌中大量表达rHpaA蛋白,用rHpaA免疫鸡,以水稀释法联合盐析法提取纯化IgY,采用Bradford法测定含量,SDS-PAGE电泳分析纯度,Western blot鉴定抗原特异性,ELISA测定效价和巴氏消毒后的活性。结果:IgY提纯后含量为24·6mg/ml,纯度约为90%,Western blot显示在相对分子量30000处出现单一条带,ELISA效价为1∶12800,巴氏消毒后未见效价损失。结论:成功获得了高浓度、高纯度、高效价、耐巴氏消毒的特异性IgY,为进一步制备预防幽门螺杆菌感染的特异性IgY制剂奠定了基础。
- 黄进杨致邦黄伟毛小琴邓颖叶翠莲
- 关键词：蛋黄抗体幽门螺杆菌黏附素
- 幽门螺杆菌VacA-HpaA融合蛋白的表达及其免疫学特性
- 2006年
- 目的构建H.pylori细胞空泡毒素VacA与黏附素HpaA融合基因的原核表达载体,诱导其表达融合蛋白,并检测表达产物的抗原性与免疫原性。方法用PCR从pQE30-VacA质粒扩增出VacA基因,克隆至pTrc99A-HpaA载体中,与HpaA基因融合后,插入原核表达载体pQE30中,再将pQE30-VacA-HpaA转化入大肠杆菌DH5α,诱导表达并提纯融合蛋白,SDS-PAGE检测融合蛋白的表达,Bradford法检测融合蛋白含量,Western blot鉴定特异性。将融合蛋白免疫家兔,得到多克隆抗血清,用双向免疫扩散和ELISA检测免疫原性。结果SDS-PAGE显示融合蛋白相对分子质量约为65000,表达量在35%以上,主要以包涵体形式表达,蛋白含量为0·72mg/ml,具有良好的VacA和HpaA抗原性与免疫原性。结论VacA-HpaA融合蛋白已成功表达,且具有良好的免疫原性,为进一步研究制备H.pylori疫苗创造了条件。
- 叶翠莲杨致邦黄进邓颖刘淼吴利先
- 关键词：幽门螺杆菌细胞空泡毒素黏附素融合蛋白
- HpaA IgY抑制小鼠胃内幽门螺杆菌的定植被引量：10
- 2008年
- 目的在构建基因工程菌pQE30-HpaA-DH5α的基础上,制备HpaA重组蛋白,以此为抗原,制备抗HpaA的蛋黄抗体(HpaA IgY)。通过小鼠口服试验,验证HpaA IgY阻止H.pylori在胃内定植的作用,为研制预防H.pylori感染的制剂奠定基础。方法大量诱导工程菌pQE30-HpaA-DH5α,获得重组蛋白HpaA,免疫产蛋立克体鸡,以水稀释法联合硫酸铵沉淀法提纯IgY,SDS-PAGE分析纯度,Bradford法测定浓度,Western blot鉴定对相应抗原的特异性,ELISA法检测效价。建立H.pylori感染Balb/c小鼠的动物模型,预防组在小鼠灌喂H.pylori菌液前灌喂不同剂量的HpaA IgY。组织学检查和细菌培养观察H.pylori定植。结果提纯后的HpaAIgY纯度为90%,浓度为24.6mg/mL,Western blotting证实有良好抗原结合特异性,ELISA效价为1∶12800。阳性对照组H.pylori的感染率为70.4%,12周后的感染率为88.9%。预防组的感染率明显低于阳性对照组,随IgY剂量的增加,感染率降低。IgY的剂量为6mg/mL时,能达到预防效果。结论成功制备出高纯度、高浓度、高效价的特异性HpaA IgY,在小鼠体内能阻止H.pylori的定植,有望进一步开发成为预防H.pylori感染的制剂。
- 黄进秦思栋杨致邦黄伟邓颖叶翠莲
- 关键词：幽门螺杆菌黏附素蛋黄抗体
- 幽门螺杆菌napA-ctxB融合蛋白的基因克隆与表达被引量：3
- 2007年
- 目的克隆、表达幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白napA与霍乱毒素B亚单位ctxB融合基因napA-ctxB(nctB),为制备预防H.pylori感染的疫苗奠定基础。方法用PCR方法扩增ctxB目的基因片段,克隆至pQE30-napA质粒的napA基因上游,构建含双基因的表达质粒pQE30-napA-ctxB(pQE30-nctB),经测序分析确认后转化E.coliDH5α,经IPTG诱导表达融合蛋白NCTB,融合蛋白NCTB经镍离子柱纯化。结果PCR扩增出807bp的目的基因片段nctB。工程菌pQE30-nctB-DH5α经IPTG诱导后,SDS-PAGE显示有新生的蛋白表达条带,Mr为30000,与预期的一致,约占菌体总蛋白的27%,重组蛋白用Ni2+-NTA树脂提纯,纯化后的蛋白质经SDS-PAGE分析可见单一条带,图象软件分析表明纯度可达94%以上。Westernblot显示重组蛋白质有良好的抗原性。结论构建含双基因的表达质粒pQE30-nctB成功,并在大肠杆菌DH5α中高效的表达。
- 邓颖杨致邦王勇黄进张绍兰叶翠莲
- 关键词：幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白霍乱毒素B亚单位
- 幽门螺杆菌重组NapA蛋黄抗体的制备和体内外研究
- 第一部分：幽门螺杆菌NapA-CtxB融合蛋白的基因克隆与表达目的：采用基因工程技术克隆、表达幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,H．pylori)中性粒细胞激活蛋白NapA与霍乱毒素B亚单位ctxB融合基...
- 邓颖
- 关键词：幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白霍乱毒素B亚单位
- 文献传递
- 抗重组幽门螺杆菌VacA单克隆抗体的制备被引量：1
- 2009年
- 目的制备抗重组幽门螺杆菌致细胞空泡毒素抗原(VacA)的单克隆抗体(mAb)。方法用基因工程菌pQE30-v-DH5α大量表达重组蛋白VacA,经Ni2+-NTA树脂纯化后,Western blot鉴定抗原性,免疫家兔后ELISA法检测血清VacA抗体鉴定其免疫原性。用重组VacA免疫Balb/c小鼠。取免疫鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞融合,HAT选择性培养和间接ELISA进行筛选,并检测所分泌抗体的效价和分析Ig类别。结果获得4株能稳定分泌VacA mAb的杂交瘤细胞,能分泌IgG2b、IgM和IgG1 3类抗体,轻链均为κ型。其中,IgG1 mAb经Western blot鉴定能与重组VacA发生特异性反应。结论应用纯化的重组VacA,成功获得了能稳定分泌幽门螺杆菌VacA单克隆抗体的杂交瘤细胞,并制备了单克隆抗体。为进一步研制检测VacA的试剂盒及探讨VacA的致病机制奠定了基础。
- 张绍兰杨致邦毛小琴田一玲黄进邓颖
- 关键词：幽门螺杆菌单克隆抗体酶联免疫吸附试验
- 幽门螺杆菌重组中性粒细胞激活蛋白蛋黄抗体的制备被引量：6
- 2007年
- 目的:制备高效价的抗Nap蛋黄抗体(IgY).方法:大量诱导、培养重组菌pQE30-NapA-DH5α获得重组蛋白Nap,经Ni2+-NTA树脂纯化后,Bradford法测定蛋白浓度.用纯化的Nap蛋白免疫鸡,水稀释结合氯仿有机沉淀法提取IgY.ELISA法测定抗体产生的时间-效价变化.将效价高的Nap-IgY用硫酸铵沉淀法纯化浓缩,间接ELISA法检测效价,Bradford法测定蛋白含量.Western blot检测制备的Nap-IgY的抗体活性.结果:Nap重组蛋白主要以包涵体形式表达,蛋白含量为0.37g/L.免疫鸡的蛋黄提取物可与Nap发生特异性反应,IgY效价随免疫时间增加而升高,在110d达最高效价.经纯化浓缩后,Nap-IgY的效价为1∶12800,蛋白浓度为23.67g/L.结论:成功制备了高浓度、高效价的Nap特异性IgY.
- 邓颖杨致邦黄伟林珊珊黄进叶翠莲
- 关键词：幽门螺杆菌重组蛋白中性粒细胞激活蛋白蛋黄抗体
- miRNA-142-5p靶向调节ADAMTS1基因参与肺动脉高压的机制研究
- 背景与目的： 肺动脉高压（Pulmonary arterial hypertension，PAH），它指的是肺动脉压力的增高，导致肺小动脉的收缩，血管重塑和伴有血栓形成的为特征的临床一系列疾病的统称，包括了病理生理和血...
- 邓颖
- 关键词：肺动脉高压细胞增殖细胞周期野百合碱
- 融合蛋白质在微生物疫苗制备中的研究进展被引量：1
- 2005年
- 融合蛋白质是利用重组DNA技术将两个或两个以上不同基因的编码序列克隆在一起,表达出一个单一的多肽。这种新型的融合蛋白质在蛋白质工程中,特别是在疫苗的研究和开发上发挥了重要的作用。本文就融合蛋白质在微生物疫苗制备中的研究进展进行综述。
- 邓颖杨致邦
- 关键词：重组融合蛋白质类疫苗微生物
- 基于TCGA及GEO数据库的子宫内膜癌预后生物标志物研究
- 目的:子宫内膜癌（endometrial cancer,EC）是女性生殖系统最常见的三大恶性肿瘤之一,并且其发病率及死亡率正在逐年增加。本次课题目的是筛选子宫内膜癌预后标志物并探讨其对于子宫内膜癌的预后价值。方法:在GE...
- 邓颖
- 关键词：子宫内膜癌生物标志物
