叶翠莲
- 作品数：12 被引量：25H指数：4
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- 幽门螺杆菌重组VacA蛋黄抗体的制备被引量：2
- 2006年
- 目的研制高效价、高特异性的抗细胞空泡毒素VacA的鸡蛋黄抗体(IgY),为研制幽门螺杆菌(H.pylori)治疗性抗体奠定基础。方法用纯化的重组细胞空泡毒素抗原免疫22周龄洛曼产蛋母鸡,取免后所产鸡蛋,将蛋黄稀释、离心,收集上清,加硫酸铵沉淀。以ELISA间接法检测抗体效价,Bradford法检测蛋白含量,SDS-PAGE法检测相对分子质量及纯度。结果母鸡初次免疫后76d,抗体效价达到1∶6400,最高可达1∶12800。蛋黄抗体经纯化浓缩后,用SDS-PAGE分析,出现2条蛋白带,纯度可达80%以上,其含量为25·66mg/ml。结论已成功制备了抗重组细胞空泡毒素的特异性蛋黄抗体。
- 毛小琴杨致邦黄伟张绍兰田一玲叶翠莲
- 关键词：幽门螺杆菌细胞空泡毒素蛋黄抗体
- 幽门螺杆菌融合蛋白VacA-HpaA卵黄抗体的制备及体外试验
- 第一部分幽门螺杆菌融合蛋白VacA—HpaA
卵黄抗体的制备
目的：采用基因工程技术大量表达幽门螺杆菌(Helicobacterpylori，H．pylori)细胞空泡毒素(vacuolatingcy...
- 叶翠莲
- 关键词：幽门螺杆菌空泡毒素细胞空泡毒素卵黄抗体
- 文献传递
- 融合蛋白VacA-HpaA卵黄抗体的体外研究被引量：4
- 2008年
- 目的:研究VacA-HpaA融合蛋白的鸡卵黄抗体(IgY)的理化特性和生物学活性,为制备集预防与治疗为一体的抗H.pylori感染的制剂奠定基础。方法:以纯化的VacA-HpaA融合蛋白免疫产蛋鸡,水稀释法获取蛋黄抗体(VacA-HpaAIgY)。(1)用硫酸铵沉淀法纯化IgY后,用SDS-PAGE分析其纯度,Bradford法测定蛋白含量。(2)用间接ELISA法检测该IgY的耐热性、耐酸性及其对酶消化的耐受作用。(3)采用Western blot分析IgY的特异性并检测其效价。(4)用MTT法检测不同浓度VacA-HpaAIgY对细胞毒活性的中和作用。(5)用扫描电镜观察VacA-HpaA IgY对AGS细胞粘附的中和作用。结果:(1)该IgY纯度为60%,蛋白浓度为22g/L;(2)具有一定的耐热性、耐酸性和耐胃蛋白酶能力;(3)Western blot分析显示IgY的特异性,在相对分子量约27000和30000处出现在相应的条带;(4)该IgY对VacA细胞毒活性有中和作用,且具有量效性和时效性;(5)IgY可阻止H.pylori菌体蛋白的粘附作用。结论:该IgY具有良好的理化和生物学特性,可用于制备抗H.pylori感染的防治制剂。
- 叶翠莲杨致邦张吉黄进
- 关键词：IGY细胞空泡毒素粘附素体外试验
- 抗幽门螺杆菌rHpaA鸡蛋黄抗体的研制被引量：2
- 2006年
- 目的:采用基因工程技术表达重组幽门螺杆菌黏附素rHpaA,以此蛋白为抗原制备抗rHpaA的高特异性鸡蛋黄抗体。方法:诱导重组质粒pQE30-HpaA在大肠杆菌中大量表达rHpaA蛋白,用rHpaA免疫鸡,以水稀释法联合盐析法提取纯化IgY,采用Bradford法测定含量,SDS-PAGE电泳分析纯度,Western blot鉴定抗原特异性,ELISA测定效价和巴氏消毒后的活性。结果:IgY提纯后含量为24·6mg/ml,纯度约为90%,Western blot显示在相对分子量30000处出现单一条带,ELISA效价为1∶12800,巴氏消毒后未见效价损失。结论:成功获得了高浓度、高纯度、高效价、耐巴氏消毒的特异性IgY,为进一步制备预防幽门螺杆菌感染的特异性IgY制剂奠定了基础。
- 黄进杨致邦黄伟毛小琴邓颖叶翠莲
- 关键词：蛋黄抗体幽门螺杆菌黏附素
- 幽门螺杆菌VacA-HpaA融合蛋白的表达及其免疫学特性
- 2006年
- 目的构建H.pylori细胞空泡毒素VacA与黏附素HpaA融合基因的原核表达载体,诱导其表达融合蛋白,并检测表达产物的抗原性与免疫原性。方法用PCR从pQE30-VacA质粒扩增出VacA基因,克隆至pTrc99A-HpaA载体中,与HpaA基因融合后,插入原核表达载体pQE30中,再将pQE30-VacA-HpaA转化入大肠杆菌DH5α,诱导表达并提纯融合蛋白,SDS-PAGE检测融合蛋白的表达,Bradford法检测融合蛋白含量,Western blot鉴定特异性。将融合蛋白免疫家兔,得到多克隆抗血清,用双向免疫扩散和ELISA检测免疫原性。结果SDS-PAGE显示融合蛋白相对分子质量约为65000,表达量在35%以上,主要以包涵体形式表达,蛋白含量为0·72mg/ml,具有良好的VacA和HpaA抗原性与免疫原性。结论VacA-HpaA融合蛋白已成功表达,且具有良好的免疫原性,为进一步研究制备H.pylori疫苗创造了条件。
- 叶翠莲杨致邦黄进邓颖刘淼吴利先
- 关键词：幽门螺杆菌细胞空泡毒素黏附素融合蛋白
- HpaA IgY抑制小鼠胃内幽门螺杆菌的定植被引量：10
- 2008年
- 目的在构建基因工程菌pQE30-HpaA-DH5α的基础上,制备HpaA重组蛋白,以此为抗原,制备抗HpaA的蛋黄抗体(HpaA IgY)。通过小鼠口服试验,验证HpaA IgY阻止H.pylori在胃内定植的作用,为研制预防H.pylori感染的制剂奠定基础。方法大量诱导工程菌pQE30-HpaA-DH5α,获得重组蛋白HpaA,免疫产蛋立克体鸡,以水稀释法联合硫酸铵沉淀法提纯IgY,SDS-PAGE分析纯度,Bradford法测定浓度,Western blot鉴定对相应抗原的特异性,ELISA法检测效价。建立H.pylori感染Balb/c小鼠的动物模型,预防组在小鼠灌喂H.pylori菌液前灌喂不同剂量的HpaA IgY。组织学检查和细菌培养观察H.pylori定植。结果提纯后的HpaAIgY纯度为90%,浓度为24.6mg/mL,Western blotting证实有良好抗原结合特异性,ELISA效价为1∶12800。阳性对照组H.pylori的感染率为70.4%,12周后的感染率为88.9%。预防组的感染率明显低于阳性对照组,随IgY剂量的增加,感染率降低。IgY的剂量为6mg/mL时,能达到预防效果。结论成功制备出高纯度、高浓度、高效价的特异性HpaA IgY,在小鼠体内能阻止H.pylori的定植,有望进一步开发成为预防H.pylori感染的制剂。
- 黄进秦思栋杨致邦黄伟邓颖叶翠莲
- 关键词：幽门螺杆菌黏附素蛋黄抗体
- 幽门螺杆菌napA-ctxB融合蛋白的基因克隆与表达被引量：3
- 2007年
- 目的克隆、表达幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白napA与霍乱毒素B亚单位ctxB融合基因napA-ctxB(nctB),为制备预防H.pylori感染的疫苗奠定基础。方法用PCR方法扩增ctxB目的基因片段,克隆至pQE30-napA质粒的napA基因上游,构建含双基因的表达质粒pQE30-napA-ctxB(pQE30-nctB),经测序分析确认后转化E.coliDH5α,经IPTG诱导表达融合蛋白NCTB,融合蛋白NCTB经镍离子柱纯化。结果PCR扩增出807bp的目的基因片段nctB。工程菌pQE30-nctB-DH5α经IPTG诱导后,SDS-PAGE显示有新生的蛋白表达条带,Mr为30000,与预期的一致,约占菌体总蛋白的27%,重组蛋白用Ni2+-NTA树脂提纯,纯化后的蛋白质经SDS-PAGE分析可见单一条带,图象软件分析表明纯度可达94%以上。Westernblot显示重组蛋白质有良好的抗原性。结论构建含双基因的表达质粒pQE30-nctB成功,并在大肠杆菌DH5α中高效的表达。
- 邓颖杨致邦王勇黄进张绍兰叶翠莲
- 关键词：幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白霍乱毒素B亚单位
- 幽门螺杆菌VacA毒素诱导凋亡
- 2009年
- 研究了天然VacA细胞空泡毒素蛋白诱导细胞空泡和凋亡的生物学活性.培养空泡毒素阳性的Hp菌株,超声碎菌后提取上清,用SDS—PAGE分析上清中目的条带,测定其蛋白含量,用电镜观察VacA致Hela细胞空泡样变,然后用MTT法检测Hela细胞的生长曲线后,分别用MTT法分析VacA对Hela细胞的生长抑制作用,以及用TUNEL法和流式细胞技术检测VacA蛋白致凋亡的细胞毒活性.实验结果表明,在PAGE上可见相应VacA蛋白条带,电镜下天然VacA毒素致Hela细胞空泡化明显,因此VacA毒素可以抑制Hela细胞的生长,并且诱导其凋亡;在倒置显微镜下观察可见细胞空泡、脱落,胞浆浓缩,胞核皱缩、碎裂,呈现圆形固缩状态.MTT法数据示H.pylori Va-cA蛋白具有浓度依赖性地致细胞毒活性,光镜下可见TUNEL法中可显示棕黄色凋亡细胞,因此证明幽门螺杆菌VacA蛋白有明显的诱导Hela细胞凋亡的作用.
- 叶翠莲蔡家利尹传龙谢敏姜和
- 关键词：幽门螺杆菌细胞空泡毒素凋亡
- 幽门螺杆菌体内试验的研究现状
- 2005年
- 幽门螺杆菌(Hp)体内试验是研究Hp致病机制与免疫机制,验证致病因子的依据,并用于临床药品、疫苗与治疗方案的探索,它包括动物体内和人体内试验,常用于该试验的动物有猪、小鼠、蒙古沙鼠、大鼠、狗、猴等。本文就幽门螺杆菌体内试验的类型、方法、特点等方面对该领域现状作了综述。
- 叶翠莲杨致邦
- 关键词：螺杆菌动物体内免疫机制致病机制致病因子
- 钩端螺旋体外膜蛋白血清学诊断价值和CTB-OmpL1疫苗免疫保护作用评价
- 背景与目的: 以问号钩端螺旋体为代表的致病性钩端螺旋体广泛分布于热带、亚热带和温带地区，引起的人兽共患病称为钩端螺旋体病，简称钩体病。该病是我国重点防控的传染病之一，目前常用诊断钩体病的方法和应用的疫苗存在各自的缺点。...
- 叶翠莲
- 关键词：钩端螺旋体外膜蛋白血清学诊断免疫保护
