张绍兰
- 作品数：7 被引量：32H指数：4
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- 幽门螺杆菌重组VacA蛋黄抗体的体外活性被引量：9
- 2006年
- 目的:制备幽门螺杆菌(Helicobacter pylon)重组VacA的鸡蛋黄抗体IgY(VacA-IgY),了解其理化特性和生物学活性,评价其抗H pylori感染的作用．方法:以纯化的重组VacA免疫产蛋鸡,水稀释法提取蛋黄抗体(VacA-IgY),硫酸铵沉淀法纯化IgY．将一定浓度的VacA-IgY在不同温度的水浴中维持一定时间,评价其耐热性;在不同 pH的Tris-HCI中孵育一定时间,评价其耐酸性;加入胃蛋白酶并作用一定时间后,评价其对酶消化的耐受作用．以上评价均采用ELISA 法测定抗体效价变化．采用Hela细胞体外培养 MTT法分析VacA-IgY对H pylori细胞毒活性的中和作用．结果:本实验制备的VacA-IgY在70℃水浴 15 min后活性保持约50％;在pH≥5时,抗体活性几乎无改变,pH<5时,抗体活性下降较快,pH2．0左右,抗体活性几乎丧失;pH4．0时, 60 kU／L胃蛋白酶作用1 h,抗体活性几乎无变化,2 h后活性仍保持50％以上．VacA-IgY能浓度依赖性地中和H pylori菌体蛋白的Hela细胞毒活性．20 mg／L超声提取物即可降低1／2的 Hela细胞增殖能力,80-320 mg／L的VacA-IgY 能完全中和H pylori菌体蛋白的Hela细胞毒活性(P<0．01)．结论:成功制备了重组VacA的IgY,且具有较好的耐热性、耐胃酶消化和一定的耐酸性; 在其体外具有中和H pylori细胞毒活性的作用．
- 毛小琴杨致邦张绍兰田一玲黄进
- 关键词：幽门螺杆菌细胞空泡毒素蛋黄活性
- 幽门螺杆菌重组VacA单克隆抗体的制备及初步应用
- 研 究 目 的 : 通 过 细 胞 工 程 的 方 法 制 备 重 组 幽 门 螺 杆 菌/(Helicobacter pylori,H.pylori/)细胞空泡毒素抗原/(vacuolating cytotoxin a...
- 张绍兰
- 关键词：幽门螺杆菌细胞空泡毒素单克隆抗体酶联免疫吸附试验
- 文献传递
- 抗幽门螺杆菌粘附素HpaA卵黄抗体的制备被引量：7
- 2006年
- 目的研制高效价特异性的抗幽门螺杆菌黏附素鸡卵黄抗体免疫球蛋白抗体。方法用纯化重组幽门螺杆菌黏附素(Helicobacter pyloriadhesin A,rHpaA)抗原免疫22周龄罗曼鸡,母鸡免疫应答后,在卵黄中产生抗幽门螺杆菌黏附素抗体;经硫酸铵法初步纯化浓缩后;以间接ELISA鉴定抗体效价及免疫学活性;采用Bradford法测定蛋白含量;并用SDS-PAGE法测定分子量及鉴定抗体纯度。结果母鸡初次免疫第10d即有抗体产生,初次免疫后75d左右抗体效价超过1∶10000;最高可达为1∶12800。卵黄抗体经硫酸铵法纯化后,用SDS-PAGE分析,出现两条蛋白带,纯度达95%以上。其含量为10.56mg/ml蛋黄。结论本研究首次研制并鉴定抗黏附素卵黄抗体,开拓了我国预防幽门螺杆菌感染的新领域,分析了抗体在产蛋期卵黄液中表达的进度,为今后该抗体的持续、高质量诱导奠定基础。有望获得高效价、高产量的抗黏附素的IgY抗体(IgY-HpaA),为制备口服制剂开辟了广阔前景。
- 张绍兰杨致邦毛小琴
- 关键词：幽门螺杆菌黏附素罗曼鸡
- 幽门螺杆菌napA-ctxB融合蛋白的基因克隆与表达被引量：3
- 2007年
- 目的克隆、表达幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白napA与霍乱毒素B亚单位ctxB融合基因napA-ctxB(nctB),为制备预防H.pylori感染的疫苗奠定基础。方法用PCR方法扩增ctxB目的基因片段,克隆至pQE30-napA质粒的napA基因上游,构建含双基因的表达质粒pQE30-napA-ctxB(pQE30-nctB),经测序分析确认后转化E.coliDH5α,经IPTG诱导表达融合蛋白NCTB,融合蛋白NCTB经镍离子柱纯化。结果PCR扩增出807bp的目的基因片段nctB。工程菌pQE30-nctB-DH5α经IPTG诱导后,SDS-PAGE显示有新生的蛋白表达条带,Mr为30000,与预期的一致,约占菌体总蛋白的27%,重组蛋白用Ni2+-NTA树脂提纯,纯化后的蛋白质经SDS-PAGE分析可见单一条带,图象软件分析表明纯度可达94%以上。Westernblot显示重组蛋白质有良好的抗原性。结论构建含双基因的表达质粒pQE30-nctB成功,并在大肠杆菌DH5α中高效的表达。
- 邓颖杨致邦王勇黄进张绍兰叶翠莲
- 关键词：幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白霍乱毒素B亚单位
- 抗重组幽门螺杆菌VacA单克隆抗体的制备被引量：1
- 2009年
- 目的制备抗重组幽门螺杆菌致细胞空泡毒素抗原(VacA)的单克隆抗体(mAb)。方法用基因工程菌pQE30-v-DH5α大量表达重组蛋白VacA,经Ni2+-NTA树脂纯化后,Western blot鉴定抗原性,免疫家兔后ELISA法检测血清VacA抗体鉴定其免疫原性。用重组VacA免疫Balb/c小鼠。取免疫鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞融合,HAT选择性培养和间接ELISA进行筛选,并检测所分泌抗体的效价和分析Ig类别。结果获得4株能稳定分泌VacA mAb的杂交瘤细胞,能分泌IgG2b、IgM和IgG1 3类抗体,轻链均为κ型。其中,IgG1 mAb经Western blot鉴定能与重组VacA发生特异性反应。结论应用纯化的重组VacA,成功获得了能稳定分泌幽门螺杆菌VacA单克隆抗体的杂交瘤细胞,并制备了单克隆抗体。为进一步研制检测VacA的试剂盒及探讨VacA的致病机制奠定了基础。
- 张绍兰杨致邦毛小琴田一玲黄进邓颖
- 关键词：幽门螺杆菌单克隆抗体酶联免疫吸附试验
- 初乳SIgA研究进展被引量：13
- 2004年
- 分泌型免疫球蛋白A(secretory immunoglobulin A,SIgA)是粘膜免疫最重要的执行者,是外分泌液中存在的一种最主要的抗体。SIgA在粘膜免疫中通过免疫清除、免疫屏障及中和作用等将病原微生物排出体外,达到保护机体的目的。本文就初乳中SIgA近年来的研究进展作了综述。
- 张绍兰杨致邦
- 关键词：分泌型免疫球蛋白A初乳SIGA粘膜免疫免疫清除免疫屏障
- 幽门螺杆菌重组VacA-HpaA IgY的制备被引量：4
- 2006年
- 目的:采用基因工程技术大量表达、提纯幽门螺杆菌(H pylori)细胞空泡毒素毒性片段,和黏附素片段的融合蛋白,以此为抗原,制备高效价的抗VacA-HpaA蛋黄抗体(IgY)．方法:大量培养重组菌pQE30-VacA-HpaA- DH5α,诱导表达获得融合蛋白VacA—HpaA, Ni2+-NTA树脂纯化．将纯化的重组蛋白免疫鸡,水稀释法提取IgY,硫酸铵沉淀法纯化浓缩VacA—HpaA IgY．ELISA法测定抗体产生的时间-效价变化,SDS—PAGE分析纯度, Bradford法测定蛋白含量,Western blot检测其分别对VacA和HpaA抗原的特异性,ELISA法检测效价．结果:重组蛋白主要以包涵体形式表达,免疫鸡后提取的IgY可与该蛋白发生免疫反应, IgY效价总体上随免疫时间增加而升高．经纯化、浓缩后,获得纯度为60％左右,效价为1: 12 800的VacA-HpaA IgY,蛋白浓度为22 g／L, Westem blot显示在Mr27 000和Mr30 000处分别有相应条带,ELISA检测与VacA和HpaA反应的效价分别为1:3200和1:6400(P<0．01)．结论:成功制备了高浓度、高效价的抗重组VacA-HpaA的特异性IgY．
- 叶翠莲杨致邦黄伟毛小琴张绍兰黄进
