贾效伟
- 作品数：28 被引量：50H指数：4
- 供职机构：中国疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划北京市教委资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 铜蓝蛋白/PTEN 在石英致组蛋白修饰改变中的作用被引量：1
- 2014年
- 目的探讨铜蓝蛋白(Cp)在石英诱导的人胚肺成纤维细胞(HELF)组蛋白修饰改变中的作用以及人第十号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN)在其中的影响。方法不同浓度的石英(50、100、200μg/ml)和不同浓度的Cp(10、20、30μg/ml)作用HELF细胞24 h,用蛋白免疫印迹(Western Blot)实验检测蛋白质赖氨酸乙酰化(acety-lys)水平以及组蛋白H2B、H3、H4乙酰化和H3甲基化水平。200μg/ml石英作用于HELF细胞和转染PTEN shRNA的HELF细胞(PT)1 h后,加入30μg/ml Cp作用24 h,用Western blot检测acety-lys水平,组蛋白H2B、H3、H4乙酰化和H3甲基化水平。结果石英暴露可诱导蛋白质acety-lys水平的增高,组蛋白H2B(lys5/12)、H3(lys9/14)、H4(lys12)乙酰化水平增加,组蛋白H3的2位精氨酸的甲基化水平降低。Cp可以逆转石英暴露所致的蛋白质acety-lys水平的增加,组蛋白H3、H4赖氨酸乙酰化水平的增加和组蛋白H3甲基化水平的减少。抑制PTEN的水平后,观察不到Cp对上述现象的逆转。结论 Cp可以逆转石英暴露诱导的组蛋白乙酰化和甲基化改变,PTEN参与了Cp对石英诱导的组蛋白修饰作用的改变。
- 张夏男李跃纲贾效伟刘秉慈叶萌
- 关键词：石英PTEN组蛋白修饰铜蓝蛋白
- DNA依赖性蛋白激酶在石英诱导的细胞周期蛋白E和细胞周期蛋白依赖激酶2蛋白表达及细胞周期改变中的作用被引量：3
- 2011年
- 目的 探讨DNA依赖性蛋白激酶（DNA dependent protein kinase,DNA-PK）在石英诱导的人胚肺成纤维细胞（HELF）中细胞周期蛋白E（CyclinE）、细胞周期蛋白依赖激酶2（CDK2）蛋白表达及细胞周期改变中的作用.方法 200μg/ml石英处理阴性对照细胞（H-NC）及采用RNAi技术分别抑制DNA-PKcs和Ku80蛋白表达的细胞系（H-PKcs和H-Ku80）0、3、6、12、24 h,采用流式细胞术检测石英刺激24 h不同细胞系的细胞周期变化情况,免疫印迹（Western blot）技术检测不同细胞系各时间点CyclinE、CDK2蛋白的表达水平,并用Image-Pro plus 6.0软件对条带光强度进行半定量分析.结果 石英刺激H-NC,G1期细胞所占比例从83.53%±2.24%下降到69.11%±3.12%;石英刺激H-Ku80,石英诱导的G1期细胞的比例进一步减少,从85.16%±3.73%下降到59.92%±3.31%;石英刺激H-PKcs,G1期细胞比例也显示进一步减少,从75.06%±2.23%下降到58.32%±1.35%,差异均有统计学意义（P＜0.05）.石英刺激H-NC,CyclinE和CDK2蛋白表达随时间延长有增高趋势,并在12 h达峰值;石英刺激H-Ku80,H-PKcs和CyclinE蛋白表达水平在各时间点均低于H-NC,差异有统计学意义（P＜0.05）,CDK2蛋白的表达水平变化不明显.结论 DNA-PK参与石英诱导的细胞周期改变,对CyclinE的表达呈正性调节作用.
- 刘海峰张凤梅刘秉慈贾效伟叶萌
- 关键词：石英细胞周期细胞周期蛋白E
- 维生素C逆转苯并(a)芘致细胞周期改变的E2F通路被引量：1
- 2006年
- 目的探讨转录因子E2F1和E2F4在维生素c逆转苯并（a）芘引起人胚肺成纤维细胞（HELF）细胞周期改变中的作用，及其与细胞周期蛋白D1（cyclin D1）、细胞周期蛋白依赖激酶4（CDK4）的上下游关系。方法接种细胞到培养瓶，待生长至70％一80％时，维生素c预处理细胞1h后，用苯并（a）芘刺激细胞24h，运用流式细胞术测定细胞周期时相分布，用免疫印迹法检测蛋白含节，用Gel-Pro 3．0软件对条带光强度进行分析，脂质体转染法建立稳定转染反义cyclin D1或反义CDK4的HELF系，应用反义技术证明通路的上下游关系。结果苯并（a）芘诱导HELF中cyclin D1、CDK4、E2F1和E2F4的蛋白表达升高，并伴随s期细胞百分率从（33．5±3．2）％上升至（41．1±0。2）％。维生素C可降低苯并（a）芘诱导的HELFS期细胞百分率至（33.2±0．6）％，并抑制苯并（a）芘诱导的HELF上述蛋白的表达。反义cyclin D1和反义CDK4均可抑制苯并（a）芘诱导的HELF上述蛋白的表达，反义cyclinD1可使苯并（a）芘诱导的HELFS期细胞百分率降低至（31．2±1．3）％。维生素C联合反义cyclinD1与单独反义cyclinD1相比，可进一步降低苯并（a）葩诱导的HELF上述蛋白的表达，且能够抑制苯并（a）芘诱导的HELF的s期细胞百分率，使其从（41．1±0．2）％下降为（34．0±0．3）％。维生素c联合反义CDK4可降低苯并（a）芘诱导的HELF的s期细胞百分率，使其从（41．1±0．2）％下降为（33．7±1．5）％，而且与单独反义CDK4相比，可进一步降低苯并（a）芘诱导的HELF的s期细胞百分率。结论维生素C可能通过cyclinD1-CDK4／E2F-1／4通路逆转苯并（a）芘引起的细胞周期改变。
- 高艾刘秉慈沈福海杜宏举黄传书贾效伟尤宝荣叶萌
- 关键词：抗坏血酸细胞周期蛋白D1
- 石英致MAPK／cyclinD1-CDK4信号转导通路的活化被引量：4
- 2007年
- 目的 探讨石英诱导的人胚肺成纤维细胞（HELF）中丝裂素活化蛋白激酶（MAPK）／细胞周期蛋白和细胞周期蛋白依赖激酶（cyclinD1-CDK4）信号转导通路的活化。方法 两种处理方式：（1）石英刺激细胞2h后，收获细胞；（2）石英长时间（2个月）作用于细胞，使细胞具有部分转化细胞的特征（S-HELF），检测信号蛋白因子和细胞周期的变化。分别采用Westernblot、免疫细胞化学和流式细胞术方法检测细胞内信号蛋白和细胞周期的改变。选用特异化学抑制剂或分子抑制剂抑制上游激酶，检测下游激酶的变化。结果 HELF暴露于石英粉尘2h后，可以导致MAPK家族中ERK1/2、p38和JNK1／2 3个亚家族的磷酸化水平升高。在SHELF中，只有细胞外调节蛋白激酶（ERK）和C4un氨基末端激酶[JNK1（p46）]较未处理的HELF磷酸化水平增高。而JNK2（p54）的磷酸化水平没有变化，p38的磷酸化水平反而下降。cyclinD1和CDK4蛋白在SHELF中较HELF中表达增多。抑制ERK和JNK活化或者抑制核转录因子活化蛋白1（AP-1）的活化后，S-HELF中cyclin D1和CDK4蛋白过表达得到控制。而抑制p38的活性不能改变cyclinD1和CDK4蛋白过表达。结论 石英刺激HELF2h后可诱导ERK、JNK和p38的活化，而SHELF中ERK、JNK活化，p38没有被活化。SHELF中，cyclinD1和CDK4蛋白质过表达与ERK、JNK和AP-1活化有关。
- 沈福海范雪云刘秉慈贾效伟高艾尤宝荣叶萌杜宏举黄传书史香林
- 关键词：石英丝裂素活化蛋白激酶细胞周期蛋白类细胞周期蛋白质依赖激酶类
- 苯并(a)芘通过活化蛋白-1非依赖性通路诱导细胞中p53蛋白过表达及高磷酸化被引量：2
- 2008年
- 目的探讨苯并(a)芘[B(a)P]诱导的人胚肺成纤维细胞(HELF)中p53蛋白、p53磷酸化水平及亚细胞分布和活化蛋白-1(AP-1)活性的改变,以及p53与AP-1的上下游关系。方法转染p53小干扰RNAp53 siRNA质粒(p53-H)、载体CMV的HELF细胞(HELF/CMV)和转染AP-1荧光报告质粒的HELF细胞(AP-H)无血清培养48h后,加入2μmol/L B(a)P作用24h,用Western blot及免疫荧光法检测细胞中p53蛋白及p53磷酸化的改变,利用细胞核、细胞浆分离技术观察其亚细胞定位,用荧光检测法检测AP-1的相对活性。用AP-1的化学抑制剂curcumin抑制其活性,用p53的化学抑制剂pifithrin-α(PFT)抑制其表达,观察了二者的上下游关系。结果2μmol/L B(a)P作用24h后细胞内p53蛋白及p53蛋白20位丝氨酸磷酸化水平增加,并且主要分布在细胞核内;AP-1的活性增加。抑制AP-1活性后,对B(a)P诱导的p53蛋白含量增加没有明显的影响;抑制p53表达后,对B(a)P诱导的AP-1活性的增加没有明显影响。结论B(a)P通过AP-1非依赖的信号通路引起人胚肺成纤维细胞p53蛋白含量的增加。
- 叶萌刘秉慈贾效伟高艾焦石张凤梅
- 关键词：苯并(A)芘P53活化蛋白-1人胚肺成纤维细胞
- 铜蓝蛋白/PTEN在石英致组蛋白修饰改变中的作用
- 铜蓝蛋白(Cp)是一种急性反应蛋白,在矽肺机制研究中受到了广泛的关注.本研究以人胚肺成纤维细胞(HELF)为实验模型,围绕组蛋白修饰这一中心,探讨Cp在石英诱导的HELF中在组蛋白修饰改变中的作用以及PTEN在其中的影响...
- 张夏男李跃纲贾效伟刘秉慈叶萌
- 关键词：矽肺铜蓝蛋白遗传修饰
- 磷脂酰肌醇-3激酶在石英诱导的DNA双链断裂修复中的作用被引量：1
- 2010年
- 目的 探讨磷脂酰肌醇-3激酶（phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K）在石英致人胚肺成纤维细胞（HELF）DNA双链断裂修复中的作用.方法 用200μg/ml的石英刺激HELF和用显性失活突变体抑制P13K功能的HELF（DN-Δp85）不同时间.免疫印迹法检测磷酸化H2AX（γH2AX）的水平以及DNA依赖性蛋白激酶（DNA-dependent protein kinase,DNA-PK）的组成成分Ku70、Ku8和DNA-PKcs的蛋白水平,并用Image-Pro plus 6.0软件对条带光强度进行半定量分析.中性彗星试验检测DNA双链断裂损伤,用彗尾DNA百分含量值观察DNA双链断裂损伤程度变化,并计算DNA修复能力.结果 γH2AX的水平在石英刺激3 h明显增高,12 h达峰值,24 h下降.与HELF相比,石英诱导的DN-Δp85细胞γH2AX水平增高受到抑制.石英刺激HELF和DN-ΔP85细胞12 h组Ku70、Ku80和DNA-PKcs的蛋白水平（0.58±0.09、0.95±0.21、0.55±0.06,0.37±0.14、0.55±0.17、0.52±0.07）均高于相应的无石英刺激组（0.26±0.10、0.69±0.26、0.43±0.11,0.11±0.07、0.27±0.14、0.39±0.07）,差异有统计学意义（P〈0.05）.与石英刺激HELF 12 h组比较,石英刺激DN-ΔP85 12 h组的Ku70、Ku80蛋白水平增高受到抑制,差异均有统计学意义（P〈0.05）.石英刺激的HELF12 h组和DN-Δp85 12h组的彗尾DNA百分含量分别为9.78±1.15和11.79±4.90,明显高于同细胞系的无石英刺激组（2.40±0.69,3.31±1.35）,差异有统计学意义（P〈0.05）;与石英刺激HELF 12 h组相比,石英刺激HELF细胞24 h组彗尾DNA百分含量明显降低（4.19±0.47）,差异有统计学意义（P〈0.05）.石英刺激DN-Δp85 24 h组的彗尾DNA百分含量为（7.58±4.32）,明显高于无石英刺激DN-Δp85组和石英刺激HELF 24 h组,差异有统计学意义（P〈0.05）.HELF的DNA修复能力为75.74%,DN-Δp85的DNA修复能力为49.64%.结论 石英可诱导DNA双链断裂损伤,PI3K与DNA损伤修复有关,通过调节Ku70和Ku80的水平,可促进石英诱导的DNA双链断裂损伤的修复.
- 刘海峰张凤梅刘秉慈贾效伟叶萌
- 关键词：石英DNA损伤彗星试验DNA修复
- 苯并（a）芘通过活化蛋白-1-细胞周期蛋白D1／E2F-1信号通路引起细胞周期的改变被引量：1
- 2008年
- 目的探讨活化蛋白-1（activated protein-1，AP-1）在苯并（a）芘[benzo（a）pyrene，S（a）P]引起的人胚肺成纤维细胞（HELF）周期改变中的作用以及AP．1与细胞周期蛋白D1（cyclinD1）、细胞周期蛋白依赖激酶4（CDK4）和E2F-1／4的上下游关系。方法转染AP-1荧光报告质粒的HELF细胞（AP-H）无血清培养48h后，加入2μmol／LB（a）P作用24h，用荧光检测法检测AP-1的相对活性。用AP-1的化学抑制剂姜黄素（curcumin）抑制其活性，观察它与cyclin D1／CDK4和E2F-1／4的上下游关系。采用流式细胞仪检测细胞周期的变化，用Western blot检测细胞中cyclin D1、CDK4和E2F-1／4蛋白水平的改变。结果2μmol／LB（a）P作用24h后，G1期细胞比例由（71±2）％减少为（48±3）％，差异有统计学意义（P〈0．05）；AP-1的活性增加；cyclin D1／E2F-1的蛋白含量增加；CDK4／E2F-4的蛋白水平没有明显改变。抑制AP-1活性后，B（a）P诱导的细胞周期的改变被逆转，B（a）P诱导的cyclin D1／E2F-1蛋白含量的增加被抑制，CDK4／E2F-4蛋白含量没有明显改变。结论S（a）P通过AP-1引起HELF周期的改变。AP-1是cyclin D1／E2F-1的上游信号分子，但对CDK4／E2F-4的表达不具有调节作用。
- 叶萌刘秉慈贾效伟高艾焦石张凤梅
- 关键词：苯并(A)芘细胞周期蛋白D1转录因子细胞周期
- 全反式视黄酸阻断苯并(a)芘致成纤维细胞周期改变的通路被引量：2
- 2005年
- 目的观察全反式视黄酸(ATRA)逆转苯并(a)芘诱导的人胚肺成纤维细胞(HELF)细胞周期紊乱过程中细胞周期素D1(cyclinD1)、细胞周期素依赖性激酶K4(CDK4)、转录因子E2F1和E2F4的作用。方法用0.1μmol/LATRA预处理细胞后,再用2μmol/L苯并(a)芘作用细胞,用Westernblotting方法测定其蛋白表达水平;建立稳定转染了反义cyclinD1质粒和反义CDK4质粒的细胞系,应用反义技术证明上下游关系;用流式细胞技术测定细胞周期。结果2μmol/L苯并(a)芘作用于HELF24h后,cyclinD1、E2F1蛋白表达水平明显增高,CDK4和E2F4蛋白表达水平无明显变化;用0.1μmol/LATRA预处理24h后,cyclinD1、E2F1蛋白表达水平明显下降;与相同作用的对照组相比,苯并(a)芘刺激反义cyclinD1或反义CDK4细胞后E2F1表达增加的幅度明显降低;与相同作用的对照组相比ATRA预处理的反义cyclinD1或反义CDK4细胞中,苯并(a)芘诱导的E2F1过表达水平降低的幅度明显降低;流式细胞术测定结果显示,苯并(a)芘诱导细胞从G1期进入S期,ATRA通过聚积G1期细胞而阻滞苯并(a)芘诱导的细胞周期进程。结论ATRA通过cyclinD1/E2F1途径阻断苯并(a)芘诱导的HELF的细胞周期改变。
- 贾效伟刘秉慈史香林高艾尤宝荣叶萌沈福海杜宏举
- 关键词：全反式视黄酸苯并(A)芘转录因子细胞周期细胞周期素依赖性激酶苯并(A)芘全反式视黄酸转录因子E2F-1阻断BLOTTING
- ERK和JNK/AP-1通路参与石英诱导的细胞周期改变被引量：8
- 2008年
- 目的探讨在石英刺激的人胚肺成纤维细胞（human embryo lung fibroblasts，HELF）中转录因子活化蛋白-1（activator protein-1，AP-1）的活性改变，以及丝裂原活化蛋白激酶（mitogen activated protein kinase，MAPK）／AP-1通路在石英诱导的细胞周期改变中的作用。方法用200μg／ml石英处理HELF细胞；用免疫荧光法检测细胞外调节蛋白激酶（extracellular signal-regulated protein kinase，ERK）和c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase，JNK）蛋白磷酸化水平及细胞分布；运用AP-1荧光素酶报告基因技术检测AP-1荧光素酶活力；用MAPK显性失活突变体（dominant negative mutant,DN）（DNERK2、DN-JNK1和DN-p38）证明通路的上下游关系；用流式细胞术检测细胞周期变化。结果用200μg／ml石英分别处理转染AP-1报告基因的细胞（HELF-AP-1）6、12、24h，结果显示，AP-1活性随着时间变化而发生变化，6h活性增强，12h活性达峰值，24h活性略有降低；用200μg／ml石英分别处理细胞1和2h，结果显示，ERK和JNK在石英刺激1h后，磷酸化水平升高，主要集中于胞浆，2h后磷酸化水平进一步升高，并主要集中于胞核；200μg／ml石英处理细胞24h，G1期细胞所占比例从（63．80±9．57）％下降到（32.23±7.22）％，S期细胞所占比例从（35．17±10．33）％升高到（66．00±8．07）％；AP-1化学抑制剂姜黄素（20μmol／L）可明显减弱石英引起的G1期细胞比例减少和S期细胞比例增加；DN-ERK和DN-JNK的过表达均可明显降低石英诱导的AP-1活性增强，DN-p38的过表达对石英诱导的AP-1活性增强无明显影响。结论200μg／ml石英可诱导AP-1活性增强，并通过ERK、JNK／AP-1通路诱导细胞周期改变。
- 贾效伟刘秉慈史香林高艾叶萌张凤梅刘海峰焦石
- 关键词：石英细胞周期信号传递转录因子AP-1
