许翔
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 供职机构：安徽农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划广东省大学生创新实验项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 羊布鲁菌OMP31蛋白基因表达及抗原性分析被引量：3
- 2013年
- 目的构建布鲁菌OMP31蛋白原核表达载体,获得OMP31蛋白。方法 PCR扩增OMP31基因,连接入pET-30a(+)表达载体中,构建pET-30a(+)/OMP31质粒,双酶切鉴定、测序正确后,转化入大肠埃希氏菌BL21(DE3)中,以不同浓度的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,并通过二十烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析;蛋白质免疫印迹(western blot)初步分析其免疫原性。结果成功构建pET-30a(+)/OMP31表达载体,并表达出OMP31蛋白,分子量约为31 kDa,主要以包涵体形式存在;通过复性获得>95%的高纯度可溶性蛋白;以布鲁菌虎红平板阳性血清检测,显示复性后蛋白具有良好的免疫反应性。结论成功表达出带组氨酸(HIS)标签的OMP31融合蛋白,且具有较好的蛋白抗原性。
- 吴静波丘金浪逯光文许翔邱菲黎诚耀王文敬
- 关键词：布鲁菌表达载体构建蛋白表达抗原性
- Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白D的晶体结构解析(英文)
- 2011年
- Ⅱ型单纯疱疹病毒（HSV-2）糖蛋白D（Glycoprotein D,gD）在介导该病毒入侵到宿主细胞中起着关键作用。为了更好地研究gD在病毒侵入过程中的作用机制,利用杆状病毒表达系统表达了gD胞外部分区域（1~285 aa）,通过Ni-NTA亲和层析以及分子排阻层析纯化后,得到的带His标签的分泌型可溶蛋白,用悬滴法对该蛋白进行了晶体筛选,获得了高质量的晶体。晶体生长条件为0.1 mol/L Hepes缓冲液（pH 7.2）,5%（V/V）2-甲基-2,4-戊二醇（MPD）,10%PEG10000,18℃。晶体能够衍射到1.8℃,属于P21空间群,晶胞参数为a=63.6,b=55.4,c=65.3,β=96.3°。该晶体的获得将为进一步研究gD的结构提供了基础,也为gD等同类囊膜蛋白的表达、纯化及结构研究提供了重要的参考。
- 陈竹君逯光文齐建勋许翔张娜严景华王荣富
- 关键词：杆状病毒表达系统纯化
