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蔡云: 作品数：15 被引量：35H指数：4; 供职机构：第三军医大学西南医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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白血病细胞雄激素受体基因启动子甲基化状态的研究被引量：7: 2007年; 目的检测白血病细胞雄激素受体基因启动子区CpG岛甲基化状态情况,初步探讨雄激素受体基因启动子区甲基化与白血病发病机制的可能联系。方法应用甲基化特异性PCR技术(methylation specific PCR,MSP)检测3种白血病细胞株及15例患者骨髓标本雄激素受体基因甲基化状态。结果白血病细胞株均出现甲基化和非甲基化带,呈部分甲基化状态,而作为对照的正常人白细胞均只出现非甲基化带。15例白血病患者全部检出甲基化状态。结论白血病细胞的雄激素受体基因启动子区存在高甲基化现象,可能为白血病的致病机制分析提供了一个新的方向,提示AR基因启动子CPG岛的甲基化有可能成为白血病的新的参考标记物。; 王刚刘利陈杰辛海明张晓兵蔡云侯露郭乔楠刘泽军; 关键词：白血病雄激素受体基因 DNA甲基化甲基化特异性PCR

人完整p53凋亡刺激蛋白家族抑制成员多克隆抗体的制备及鉴定被引量：5: 2009年; 目的:p53凋亡刺激蛋白(ASPP)家族可调节p53抑癌功能,其抑制成员(iASPP)具有特异性抑制p53诱导细胞凋亡的能力。为了对iASPP进行系统研究,文中报道制备完整的iASPP分子多克隆抗体的方法。方法:在完整iASPP独有的N端选择3个免疫原肽段,制备了3个多克隆抗体。用ELISA检测抗体效价,Western blot比较3个抗体检测内源性抗原的效果,并用体外转录翻译系统制备的完整iASPP蛋白作为对照标准。结果:1号抗体效价>1∶32000,2号和3号抗体效价>1∶16000。Western blot确定100000为完整iASPP蛋白的条带位置。结论:成功地制备了iASPP的多克隆抗体,为深入研究完整iASPP提供了有用的工具。; 蔡云高兴辛海明陈杰扬新刘泽军; 关键词：多克隆抗体免疫印迹

iASPP在p53缺失肿瘤细胞中影响细胞凋亡的机制被引量：1: 2011年; 目的阐明iASPP在p53缺失细胞中影响细胞凋亡的机制。方法将iASPP、干扰iASPP、p63、p73、Bax-Luc和Puma-Luc等转染进H1299细胞中,观察各种情况下对前凋亡基因转录能力的影响;用体外转录/翻译偶联系统、免疫沉淀和Western blot方法研究iASPP与p63和p73在体外的相互作用;用细胞转染、免疫沉淀和Western blot方法研究iASPP与p63和p73在细胞内的相互作用。结果①H1299细胞转入iASPP后前凋亡基因Bax和Puma的转录能力下降,分别只有对照组的0.14倍和0.13倍;②H1299细胞转入iASPP干扰质粒后前凋亡基因Bax和Puma的转录能力增强,分别为对照组的3.58倍和4.14倍;③p63和p73转染H1299细胞后,前凋亡基因Bax和Puma启动子的转录能力增强,分别增加4.67倍和3.03倍(转染p63后)和5.90倍和3.36倍(转染p73后);④iASPP与p63、p73在体外和细胞内存在着相互作用;⑤干扰iASPP后p63和p73的蛋白表达水平不变。结论在p53缺失的H1299细胞中,iASPP是通过抑制p63/p73的转录因子的功能,从而影响前凋亡基因Bax、Puma等的转录活力,进而导致细胞凋亡变化的。; 高兴邱实蔡云顾寿智刘泽军; 关键词：IASPP P63 P73 细胞凋亡报告基因

定点诱变法构建p53基因多态质粒: 2010年; 目的:为了研究p53codon72多态的功能,采用定点诱变法构建人p53基因的多态质粒。方法:设计带有突变碱基的引物,通过PCR扩增引入突变碱基,再将突变后的p53序列插入载体中,经测序确定所扩增的DNA序列,并用体外转录翻译系统制备p53蛋白和i ASPP蛋白,免疫沉淀法检测蛋白相互作用。结果:通过PCR获得的含突变碱基的p53序列经连接后插入真核表达载体pReceiver-M01中,构建了p53多态位点为72Arg的表达质粒pReceiver-M01-p53(Arg72)。测序证明序列正确,表达的p53蛋白能与i ASPP相互作用,具有生物学功能。结论:成功构建了p53多态(72Arg)真核表达载体,为进一步深入研究p53多态的生物学功能奠定了基础。; 邱实蔡云高兴顾寿智刘泽军; 关键词：定点诱变重叠延伸PCR

干扰iASPP基因对转染MCF-7细胞凋亡变化的观察被引量：3: 2008年; 目的:观察iASPP基因干扰RNA转染乳腺癌细胞MCF-7后的干扰效果及细胞凋亡变化。方法:设计特异性siRNA序列,将序列克隆至PGCsilencerTM H1/Neo/GFP质粒中,用脂质体将重组子转染至MCF-7细胞中,用RT-PCR方法检测i ASPP的表达,蛋白质印迹法检测蛋白表达的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡的情况。结果:iASPP干扰质粒转染MCF-7细胞后,iASPP的mRNA表达和蛋白表达减少40%～50%;p53蛋白相对表达量由转染阴性质粒的0.37增加到转染干扰质粒的0.64;细胞凋亡率由原来的17.8%和16.2%分别增加到53.5%和51.3%。结论:抑制内源性i ASPP能有效地恢复乳腺癌细胞MCF-7中p53的抑癌功能,为乳腺癌的治疗提供新的思路。; 侯露蔡云陈杰辛海明高兴卢欣钟山刘泽军; 关键词：乳腺肿瘤肿瘤抑制 RNA干扰细胞凋亡

人Bax启动子荧光素酶报告基因的构建和鉴定被引量：8: 2009年; [目的]克隆人Bax基因的启动子,插入荧光素酶报告基因载体中,并在细胞内检测其活性。[方法]采用PCR技术从人HepG2细胞中扩增出Bax启动子,插入荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中,经测序确定所扩增的DNA序列,并将其转染入H1299细胞中检测其活性。[结果]测序结果表明扩增的Bax启动子序列正确,双报告基因实验检测荧光素酶活力表明构建的报告基因具有启动子活性。[结论]克隆了Bax启动子,成功构建了人Bax启动子报告基因,为p53家族凋亡通路的功能研究提供了必要的实验材料。; 高兴蔡云辛海明张晓兵扬新刘泽军; 关键词：BAX 启动子荧光素酶报告基因

人iASPP全长CDS的分段扩增、克隆及鉴定被引量：4: 2007年; 目的最初报道的iASPP长度为351个氨基酸,但最近发现iASPP的全长应为828个氨基酸,为了探讨全长iASPP的功能,我们采取3分段扩增的策略克隆全长iASPP基因。方法从HL-60细胞中提取总RNA、DNA,RT-PCR分段扩增目的基因,克隆至pMD19-Tsimple载体,测序,并亚克隆至pCDNA3.1载体。结果重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-iASPP经测序,与GenBank上登陆的人iASPP cDNA(gi:60457962)序列完全一致。结论成功构建了iASPP真核表达载体。; 陈杰辛海明蔡云侯露王刚刘利卢欣钟山刘泽军; 关键词：IASPP 克隆 P53

Puma荧光素酶报告基因的构建和鉴定: 2011年; 目的为研究p53家族调控细胞凋亡的机制，构建并鉴定插入人Puma基因的启动子片段的荧光素酶报告基因载体。方法采用PCR技术从人类HepG2细胞中扩增Puma启动子的含p53反应元件的180bpDNA片段，插入荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中。经测序确定所扩增的DNA序列；将其转染人人类肺腺癌141299细胞中，双报告基因实验检测荧光素酶活力。结果测序结果表明扩增的Puma启动子序列正确，活性检测显示构建的报告基因具有启动子活性。结论克隆了含p53反应元件的Puma启动子，成功构建了人类Puma启动子报告基因，为p53家族凋亡通路的功能研究提供了必要的实验材料。; 杨新邱实顾寿智蔡云高兴刘泽军; 关键词：PUMA 启动子荧光素酶报告基因凋亡

ASPP家族中癌基因iASPP的研究进展被引量：4: 2007年; p53是目前公认的肿瘤抑制基因,能诱导细胞周期阻滞或直接诱导细胞凋亡,但其如何作用这两种不同选择的机制尚不清楚,直到p53凋亡刺激蛋白（ASPP）家族的发现,才使这一问题逐渐明了。ASPP是Samuels等在2001年发现一种新的肿瘤抑制基因家族．随后在2003年又宣布发现了ASPP家族的另一个成员iASPP（inhibitory member of the ASPP family），ASPPI和ASPP2与p53结合后能激活p53的抑癌功能，; 蔡云刘泽军; 关键词：IASPP P53 恶性肿瘤细胞凋亡

近日节律调控机制与相关疾病研究进展被引量：1: 2012年; 近日节律是生命体生理及行为变量遵循内源性的以接近1个太阳日的周期进行循环的生物过程,人体近日节律调控机制及其相关疾病研究已成为当前生物医学新兴领域和研究热点。过去二十年间,以生物钟基因及其相互作用环路为核心的一系列机制研究不断取得新的进展,初步形成了近日节律的分子模型,近年来,生物钟基因在染色体重塑、转录翻译调控、转录后修饰等多个层次的调控模式得到深入的研究。同时,近日节律失控与肿瘤、代谢紊乱等临床疾病的相关性及其影响机的转化研究日益增多,形成了新兴的时间医学。本文谨就近年来近日节律分子机制及其疾病相关研究的概况和最新进展做一总结。; 陈图南蔡云王晖胡志安; 关键词：近日节律生物钟基因分子机制

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