茌静
- 作品数：5 被引量：8H指数：2
- 供职机构：南京医科大学基础医学院微生物学系与免疫学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金南京医科大学科技发展基金江苏省医学重点人才培养基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人类疱疹病毒6A对神经细胞的嗜性及细胞周期的影响
- 2011年
- 目的:研究人类疱疹病毒6A对神经细胞嗜性及细胞周期的影响。方法:HHV-6A GS株感染神经细胞,倒置显微镜观察细胞病变。PCR法鉴定神经细胞中HHV-6A U22基因,实时荧光定量PCR法测定神经细胞中HHV-6A U22基因的相对含量。免疫细胞化学和Western blot检测神经细胞中HHV-6A糖蛋白gB的表达。神经细胞感染HHV-6A后MTT法测定细胞增殖的改变,流式细胞仪检测神经细胞周期的改变。结果:HHV-6A GS株感染5天后,U373细胞形态无明显变化,SK-N-SH和SHG44细胞聚集,折光性降低,细胞发生明显病变。PCR法检测到U373、SK-N-SH和SHG44细胞中均含有HHV-6A U22基因,实时荧光定量PCR法发现随着感染天数的增加,HHV-6A DNA在细胞中含量逐渐降低。免疫细胞化学和Western blot结果显示病毒糖蛋白gB在细胞中表达,其中在U373细胞和SHG44细胞中的表达量高于SK-N-SH细胞。MTT法显示HHV-6A促进U373细胞和SHG44细胞的增殖,抑制SK-N-SH细胞的增殖。流式细胞仪检测细胞周期,结果显示U373和SHG44细胞感染组与对照组相比,G1期细胞百分数减少,S和G2期细胞百分数增多;SK-N-SH细胞G1期细胞百分数增多,而S和G2期细胞百分数减少。结论:HHV-6A感染神经细胞,对神经胶质细胞的嗜性强于神经元细胞。HHV-6A通过改变神经细胞周期进程,促进神经胶质细胞增殖,而抑制神经元细胞增殖。
- 郭丹丹姚堃周锋李凌云茌静王芳顾斌张春
- 关键词：神经细胞细胞嗜性细胞周期
- 抗人类疱疹病毒6型南京分离株E5单克隆抗体的制备与鉴定被引量：4
- 2008年
- 目的:制备并鉴定人疱疹病毒6型(HHV-6)单克隆抗体。方法:用纯化的HHV-6南京分离株E5免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,经间接ELISA法筛选,间接免疫荧光法、免疫印迹实验等方法鉴定单抗。并采用套式PCR法和ELISA法,在口腔癌中进行了初步的应用。结果:获得了一株分泌抗HHV-6单克隆抗体的杂交瘤细胞系,命名为JA9。单克隆抗体亚类鉴定表明:其为IgG1亚类,轻链为κ。用间接ELISA法检测细胞上清单抗效价为1∶500;单抗腹水滴度为1∶8.0×104。免疫印迹实验结果表明:JA9单抗腹水与约75kuHHV-6E5病毒蛋白结合。口腔癌患者唾液的HHV-6阳性检测率结果分别是:套式PCR法60%,ELISA法40%。结论:成功制备并鉴定一株抗HHV-6南京分离株E5单克隆抗体,为HHV-6进一步的基础研究及临床快速诊断提供可能。
- 姜兰兰姚堃尹全章茌静周锋卢士强刘英霞
- 关键词：人类疱疹病毒6型单克隆抗体BALB/C小鼠
- 人类疱疹病毒6型感染U251细胞及其生物学功能的研究被引量：2
- 2010年
- 目的:研究人类疱疹病毒6型(HHV-6)感染人星形胶质瘤细胞U251,及感染后对其生物学功能的影响。方法:HHV-6感染U251细胞建立HHV-6体外感染模型,倒置显微镜观察细胞病变。PCR法检测HHV-6u22基因。间接免疫荧光(IFA)检测HHV-6即刻早期蛋白(IE1)和晚期蛋白(gB)的表达。MTT法检测U251感染HHV-6后细胞增殖的改变。流式细胞术(FCM)检测U251细胞周期改变。结果:在感染3天后U251出现典型细胞病变,细胞肿胀增大数倍,透亮,呈多形性。PCR检测到HHV-6u22基因。IFA检测到HHV-6IE1蛋白和gB蛋白的表达。MTT法显示HHV-6能增强U251细胞的增殖能力。FCM检测表明,HHV-6感染后U251细胞周期发生改变,感染组和对照组相比,前者G1期的细胞减少,S期和G2期细胞增多。结论:HHV-6能感染U251细胞引起细胞病变,促进细胞的增殖,使细胞周期发生改变。本研究结果提示人类疱疹病毒6型可能参与人神经胶质瘤的发生、发展,对其机制尚不清楚。
- 郭一迪姚堃周锋李凌云茌静刘根焰陈云
- 关键词：人类疱疹病毒6型细胞周期
- 人疱疹病毒6型感染与神经胶质瘤关系的初步研究被引量：3
- 2012年
- 目的:研究人疱疹病毒6型(human herpesvirus-6,HHV-6)感染与神经胶质瘤的关系。方法:巢式PCR法检测40例神经胶质瘤样本和13例正常脑组织样本中HHV-6、人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)、HHV-7 DNA序列。免疫组化染色法检测神经胶质瘤样本和正常脑组织样本中HHV-6、HCMV、HHV-7抗原的表达。结果:巢式PCR法检测结果显示,神经胶质瘤组织HHV-6 DNA阳性率为42.5%,正常脑组织HHV-6 DNA阳性率为7.7%(P=0.020),神经胶质瘤组织HCMV、HHV-7DNA阳性率分别为20.0%和5.0%,正常脑组织未检测到HCMV和HHV-7 DNA(P值分别为0.087和0.566)。进一步用免疫组化染色法检测HHV-6早期抗原p41的表达,神经胶质瘤组织阳性率为27.5%,正常脑组织未见阳性表达(P=0.030)。同时检测HHV-6晚期抗原gp116/64/54的表达,神经胶质瘤组织阳性率为32.5%,正常脑组织未见阳性表达(P=0.014)。用HCMV pp65抗体进行免疫组化染色后发现其在神经胶质瘤中阳性率为12.5%,正常脑组织未见阳性表达(P=0.229)。HHV-7 pp85抗原在神经胶质瘤样本和正常脑组织样本中均未检出阳性表达。结论:根据PCR和免疫组化的检测结果,HHV-6感染在神经胶质瘤和正常脑组织中具有显著性差异,HHV-6感染在神经胶质瘤的病因和发展过程中起了一定作用。
- 张春茌静顾斌郭丹丹张国锋周锋魏栋姚堃胡卫星
- 关键词：人疱疹病毒6型神经胶质瘤巢式PCR免疫组化
- 甲型流感病毒FM1非结构蛋白(NS1)在大肠杆菌表达及其ELISA检测方法建立被引量：1
- 2009年
- 目的:构建流感病毒FM1非结构蛋白NS1全长基因表达载体在大肠杆菌(E.coli)中表达,并将表达蛋白用于病毒感染和疫苗免疫小鼠的血清检测。方法:提取流感病毒鸡胚尿囊液RNA,RT-PCR扩增NS1全长基因,克隆到pET28a,转化E.coliBL21感受态细胞,经酶切鉴定及序列分析,筛选出阳性重组质粒pET28-NS1。异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白,表达蛋白在变性条件下经镍柱亲和层析纯化,并用Western blot法检测其抗原活性。以纯化的NS1蛋白为抗原建立了检测NS1抗体的ELISA(NS1-ELISA)方法分别对7、15和30天灭活疫苗免疫和病毒感染小鼠血清进行检测。统计分析各组吸光度(A)差异,并以灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值等指标对NS1-ELISA进行方法学评价。结果:重组质粒经PCR及酶切鉴定为阳性,核酸序列分析正确。SDS-PAGE和Western blot结果显示表达重组蛋白分子质量约为26ku。NS1-ELISA法在第15～30天,感染组血清吸光度明显高于疫苗免疫组。结论:成功获得了NS1重组基因表达蛋白,建立的NS1-ELISA法可用于病毒感染和疫苗免疫血清的鉴别检测。
- 卢士强周锋姜兰兰茌静冯东举姚堃
- 关键词：NS1原核表达ELISA
