周锋
- 作品数：44 被引量：252H指数：7
- 供职机构：南京医科大学基础医学院微生物学系与免疫学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金南京医科大学科技发展基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 巢式聚合酶链反应检测人疱疹病毒在人群中的感染情况被引量：2
- 2015年
- 目的调查人群中人疱疹病毒(HHV),包括人巨细胞病毒(HCMV)、EB病毒(EBV)、HHV-6和HHV-7的感染情况。方法收集55例南京市无偿献血者的外周血标本,提取全血DNA,巢氏PCR扩增HCMV、EBV、HHV-6和HHV-7特异性序列,1%琼脂糖凝胶电泳鉴定。结果 55例献血者中EBV、HCMV、HHV-6和HHV-7的阳性感染率分别为50.9%、5.5%、49.1%和21.8%,并且存在多种病毒混合感染。结论 HHV筛查对临床相关疾病的诊治具有十分重要的意义,应引起医务工作者的重视。
- 李明月沈曦月周帅罗笛巢嘉婧冯纯姚堃冯东举周锋李凌云
- 关键词：人疱疹病毒巢式聚合酶链反应
- 人类疱疹病毒7型糖蛋白gB、gH、gL、gO介导细胞融合(英文)
- 2007年
- 人类疱疹病毒 7 型(HHV-7)的感染依赖于包膜糖蛋白在病毒生命周期的多个阶段发挥功能. 这些蛋白质可以介导病毒吸附,病毒包膜和宿主细胞膜融合以及病毒在细胞间的接触传播. 将表达 HHV-7 糖蛋白的 293T 细胞与 HHV-7 易感的SupT1 细胞共培养,检测虫荧光素酶报告基因的表达,以鉴定介导膜融合的 HHV-7 糖蛋白. 研究发现,HHV-7 糖蛋白 gB、gH、gL、gO 能介导 293T 细胞与 SupT1 细胞的融合,且融合可被抗 CD4 单抗所抑制. 结果表明,糖蛋白 gB、gH、gL、gO对于 HHV-7 引发的膜融合是必需的,其中某个蛋白质或所形成的蛋白质复合物可能是 CD4 的配体.
- 徐建姚堃窦洁秦健许文嵘陈云尹全章周锋
- 关键词：人类疱疹病毒7型糖蛋白膜融合
- 人疱疹病毒6型特异性CD4^+ T细胞的初步克隆被引量：2
- 2008年
- 目的克隆人疱疹病毒6型(HHV-6)特异性CD4+ T细胞,并分析其基本特征。方法采用微孔有限稀释法克隆HHV-6特异性CD4+ T细胞;3H-TdR掺入法细胞增殖试验筛选HHV-6特异性CD4+ T细胞克隆;流式细胞仪(FACS)分析HHV-6特异性CD4+ T细胞克隆的表面标志,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HHV-6特异性CD4+ T细胞克隆的细胞因子分泌水平。结果获得的细胞克隆中有4株以HHV-6感染细胞裂解物特异的方式增殖,并且其增殖水平与HHV-6感染细胞裂解物呈剂量依赖性;细胞克隆表面标志为CD3+CD4+;W-2和W-4细胞克隆的细胞因子分泌以白细胞介素10(IL-10)为主,W-1细胞克隆的细胞因子分泌以IL-10及γ干扰素(IFN-γ)为主,W-3细胞克隆的细胞因子分泌以IFN-γ为主。结论初步建立HHV-6特异性CD4+ T细胞克隆,并分析其表面标志和细胞因子分泌水平,为HHV-6特异性Treg细胞的克隆、筛选及其功能的研究奠定基础。
- 王芳姚堃冯冬举周锋尹全章
- 关键词：人类疱疹病毒6型克隆CD4^+T细胞
- 热毒宁抗呼吸道合胞病毒(RSV,Long株)作用体外实验研究被引量：105
- 2007年
- 目的:研究中草药热毒宁注射液对呼吸道合胞病毒(RSV,Long株)的抑制作用。方法:以病毒唑为阳性对照药,采用细胞培养技术,观察不同药物浓度及不同给药方式下RSV攻击后各组Hep-2细胞的病变效应(CPE),在此基础上采用MTT比色法,测定各组细胞的病毒抑制率。以CPE法计算药物的半数中毒浓度TC50,分别以CPE法及MTT法计算药物的半数有效浓度EC50及治疗指数TI,比较不同药物浓度及不同给药方式下热毒宁对呼吸道合胞病毒(RSV)的抑制作用效果。结果:热毒宁注射液半数中毒浓度TC50为3.972g/L。预防给药方式、细胞外直接灭活及治疗给药方式均有抗RSV作用,其抗RSV的半数有效浓度(EC50)分别为0.428、1.160、1.189g/L,治疗指数TI分别为9.28、3.42和3.34,热毒宁对RSV的抑制作用存在着明显的量效反应关系。结论:热毒宁对RSV有直接灭活作用,对RSV侵入Hep-2细胞有阻断作用,对RSV在Hep-2细胞内增殖有抑制作用,相同浓度下,以预防作用更显著。
- 冯旰珠周锋黄茂姚堃
- 关键词：抗病毒作用细胞病变效应MTT比色
- EB病毒潜伏膜蛋白2A基因重组逆转录病毒载体和稳定表达细胞株的构建及鉴定被引量：2
- 2009年
- 目的:克隆EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白2A(LMP2A)全长基因,并构建含有该目的基因的重组逆转录病毒载体pGEZ-LMP2A,转染真核细胞后获得稳定表达LMP2A的细胞株。方法:采用RT-PCR技术从B95.8细胞中获得EB病毒LMP2A全长基因,克隆到测序载体pMD18-T中,经测序后再亚克隆到逆转录病毒载体pGEZ-Term中,与两辅助病毒载体PHIT456、PHIT60通过Lipofectamine2000共转染包装细胞293T,测定产生的重组逆转录病毒滴度并感染小鼠成纤维细胞L929,经Zeocine筛选后得到稳定的细胞克隆,用RT-PCR和Western blot法检测细胞中LMP2A mRNA和蛋白表达情况。结果:重组逆转录病毒载体pGEZ-LMP2A经测序鉴定正确;转染后上清中病毒的滴度为5×108cfu/L,感染L929细胞后用Zeocine筛选出稳定的细胞克隆;RT-PCR和Westernblot检测结果表明筛选出的细胞克隆能稳定表达EBV-LMP2A。结论:表达EBV-LMP2A细胞株的构建为蛋白制备与纯化奠定了物质基础,也为后续的EBV相关性疾病疫苗的研究提供了新思路。
- 陈云周锋孙倍成刘根焰王冰姚堃
- 关键词：EB病毒LMP2A逆转录病毒
- 人疱疹病毒6B感染对Molt3细胞增殖和细胞周期的影响
- 2014年
- 目的 :研究人疱疹病毒(human herpesvirus,HHV)6B感染T淋巴细胞系Molt3后对其细胞增殖和周期的影响。方法 :HHV-6B感染Molt3细胞后,倒置显微镜观察细胞形态变化,PCR鉴定Molt3细胞中HHV-6 U22基因,间接免疫荧光及Western blot检测HHV-6蛋白表达;MTT检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期变化,荧光定量PCR检测细胞周期相关蛋白m RNA水平变化。结果:HHV-6B感染48 h后,Molt3细胞出现典型细胞病变。PCR检测到感染组细胞中含有HHV-6 U22基因,间接免疫荧光及Western blot均检测到HHV-6蛋白表达。MTT显示HHV-6B能明显抑制Molt3细胞的增殖。HHV-6B感染后Molt3细胞周期发生改变,与对照组相比,感染组细胞G1期增多,S期和G2期减少。实时荧光定量PCR表明HHV-6B感染后cyclin E1m RNA水平降低,p53 m RNA水平升高。结论:HHV-6B能够有效感染Molt3细胞引起典型的细胞病变效应,HHV-6B感染使细胞周期阻滞在G1期从而抑制细胞增殖。
- 周锋冯东举顾斌姚堃李猛王金凤李凌云
- 关键词：细胞增殖细胞周期
- EB病毒LMP2A特异性CTL的体外诱导及分析被引量：2
- 2004年
- 用EBV LMP2A重组痘苗病毒 (rVV LMP2A )转染人树突状细胞 (DC ) ,转染后的DC分别在第 1、 7、 14天刺激相同MHC背景的T细胞 ,在IL 2作用下诱导LMP2A特异性CTL。用LDH释放法检测CTL杀伤活性 ;流式细胞术 (FACS )检测CTL诱导分化过程中CD3+ 、CD4 + 、CD8+ 、CD5 6 + 等细胞的分群变化 ;RT PCR检测细胞分化过程中FasLmRNA表达 ;生物活性法检测功能性细胞因子IFN γ的分泌。结果显示本法诱导的CTL对靶细胞有特异性杀伤活性 ,第 2次和第 3次DC刺激后杀伤活性有所上升 ;在CTL诱导分化的第 7、 14、 2 1天细胞分群以CD4 + 、CD8+ 细胞为主 ;RT PCR证实所诱导的细胞内有FasLmRNA的表达 ;随细胞培养天数的增加IFN γ分泌增加 ,在第 14天达到较高水平。研究表明重组痘苗病毒载体rVV LMP2A转染的DC刺激T细胞可诱导出EBV LMP2A特异性CTL。
- 姚堃许继军丁传林周锋谢芳艺
- 关键词：痘苗病毒载体EB病毒细胞毒性T细胞
- SARS-CoV N基因重组DNA疫苗和腺病毒疫苗在BALB／c小鼠体内诱导N蛋白特异的免疫应答的初步研究
- 严重的急性呼吸道综合征(severe acute respiratory syndrom,SARS)是一种传染性极强的呼吸系统疾病, 2002年11月至2003年7月在我国内地和世界上30多个国家和地区出现流行,引起全世...
- 马春玲姚堃周锋徐建
- 文献传递
- 人类疱疹病毒6A对神经细胞的嗜性及细胞周期的影响
- 2011年
- 目的:研究人类疱疹病毒6A对神经细胞嗜性及细胞周期的影响。方法:HHV-6A GS株感染神经细胞,倒置显微镜观察细胞病变。PCR法鉴定神经细胞中HHV-6A U22基因,实时荧光定量PCR法测定神经细胞中HHV-6A U22基因的相对含量。免疫细胞化学和Western blot检测神经细胞中HHV-6A糖蛋白gB的表达。神经细胞感染HHV-6A后MTT法测定细胞增殖的改变,流式细胞仪检测神经细胞周期的改变。结果:HHV-6A GS株感染5天后,U373细胞形态无明显变化,SK-N-SH和SHG44细胞聚集,折光性降低,细胞发生明显病变。PCR法检测到U373、SK-N-SH和SHG44细胞中均含有HHV-6A U22基因,实时荧光定量PCR法发现随着感染天数的增加,HHV-6A DNA在细胞中含量逐渐降低。免疫细胞化学和Western blot结果显示病毒糖蛋白gB在细胞中表达,其中在U373细胞和SHG44细胞中的表达量高于SK-N-SH细胞。MTT法显示HHV-6A促进U373细胞和SHG44细胞的增殖,抑制SK-N-SH细胞的增殖。流式细胞仪检测细胞周期,结果显示U373和SHG44细胞感染组与对照组相比,G1期细胞百分数减少,S和G2期细胞百分数增多;SK-N-SH细胞G1期细胞百分数增多,而S和G2期细胞百分数减少。结论:HHV-6A感染神经细胞,对神经胶质细胞的嗜性强于神经元细胞。HHV-6A通过改变神经细胞周期进程,促进神经胶质细胞增殖,而抑制神经元细胞增殖。
- 郭丹丹姚堃周锋李凌云茌静王芳顾斌张春
- 关键词：神经细胞细胞嗜性细胞周期
- 人CD4分子cDNA的克隆及序列分析被引量：2
- 2004年
- 目的:克隆人的CD4基因,为进一步研究病毒感染CD4+细胞的分子机制奠定基础。方法:用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出SupT1细胞株的编码CD4蛋白分子全长的基因,克隆至质粒pAS2-1中,并转入大肠杆菌DH5α。通过Amp抗性筛选、PCR及限制性内切酶EcoR I,BamH I双酶切等鉴定重组质粒并测定其中编码CD4片段的核苷酸序列。结果:克隆出编码CD4蛋白分子全长的CDNA,测序结果与文献报道进行同源比较,序列基本一致。结论:本实验成功克隆了编码人CD4蛋白全长的cDNA片段。
- 窦洁姚堃彭光勇陈云周锋丁传林
- 关键词：CD4逆转录-聚合酶链式反应克隆
