王小花
- 作品数：13 被引量：35H指数：3
- 供职机构：牡丹江医学院基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省自然科学基金黑龙江省教育厅科学技术研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程生物学更多>>
- TGF-β1和TGF-βⅡ型受体酵母表达载体构建被引量：3
- 2017年
- 目的克隆人转化生长因子β1(TGF-β1)和4个受体基因片段,构建酵母表达载体,为应用酵母双杂交筛选与TGF-β1相互作用的TβRⅡ区域提供技术支持。方法提取人血液中RNA,逆转录转为c DNA,PCR扩增TGF-β1和4个受体(TβRⅡ-A、TβRⅡ-B、TβRⅡ-C、TβRⅡ-D)基因片段,双酶切后,分别插入酵母双杂交表达载体p GBKT7和p GADT7;经过PCR扩增、双酶切和DNA测序鉴定后,构建质粒p GBKT7-TGF-β1和p GADT7-TβRⅡ-A、p GADT7-TβRⅡ-B、p GADT7-TβRⅡ-C和p GADT7-TβRⅡ-D。结果成功扩增TGF-β1基因(1 200 bp)和TβRⅡ-A(453bp)、TβRⅡ-B(366 bp)、TβRⅡ-C(276 bp)和TβRⅡ-D(165 bp)基因片段,经PCR、双酶切和DNA测序鉴定插入到酵母双杂交载体序列正确。结论成功构建p GBKT7-TGF-β1和p GADT7-TβRⅡ-A、p GADT7-TβRⅡ-B、p GADT7-TβRⅡC和p GADT7-TβRⅡ-D酵母双杂交表达载体。
- 左魁阳陈梦茜韩瑞杰王小花孟娜娜金秀东刘海峰
- 关键词：质粒构建酵母双杂交
- 红花注射液对人肝癌HepG-2细胞AKT表达的影响被引量：6
- 2014年
- 目的探讨红花注射液对肝癌HepG-2细胞增殖的影响及分子机制。方法应用红花注射液(0、50、150、250 g/L)处理HepG-2细胞,经AnnexinⅤ-FITC/PI双染荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学改变,实时荧光定量PCR检测AKT mRNA表达,蛋白质印迹(Western blot)检测AKT、p-AKT蛋白表达。结果 50、150、250g/L的红花注射液作用于HepG-2细胞48 h后,荧光显微镜下呈现典型的凋亡细胞形态;细胞内AKT mRNA表达水平显著降低,AKT、p-AKT蛋白表达水平也显著下调,且变化趋势均呈一定的剂量依赖关系。结论红花注射液可能通过抑制AKT信号通路,阻碍肝癌HepG-2细胞的增殖及诱导凋亡。
- 李福娟唐小云桂金秋王小花李玉婷张涛石学魁
- 关键词：红花注射液细胞增殖细胞凋亡AKT
- 抗纤维化基因工程药物研究现状被引量：1
- 2016年
- 纤维化是导致器官功能慢性衰竭的主要原因,严重危害人类健康。目前临床上仍缺乏可有效逆转纤维化的药物。近年来,随着对纤维化发生机制认识的深入及分子生物技术的不断发展,基因工程药物在抗纤维化治疗中日益发挥重要作用。
- 韩瑞杰王小花张哲李桂芹刘海峰
- 关键词：抗纤维化
- SUMO修饰IFNγ信号转导域偶联截短型TGF-β II型受体的融合蛋白可溶性表达条件优化
- 2023年
- 目的优化小分子泛素相关修饰物(SUMO)修饰IFNγ信号转导域偶联截短型TGF-βII型受体的融合蛋白SUMO-BiPPB-mIFNγ-tTRβⅡ可溶性表达的条件。方法将已转化重组质粒pET28a/SUMO-BiPPB-mIFNγ-tTRβⅡ的大肠杆菌Rosetta(DE3)在不同异丙基-β-D-硫代半乳糖苷浓度(0.1、0.3、0.6和1 mmol/L IPTG)、不同诱导温度(37℃、16℃和20℃)和时间(6 h、16 h和20 h)条件下进行诱导,SDS-PAGE分析SUMO-BiPPB-mIFNγ-tTRβⅡ的表达情况。结果在20℃、IPTG为0.6 mmol/L诱导20 h时,重组蛋白SUMO-BiPPB-mIFNγ-tTRβⅡ可溶性表达量最高,约占上清中总蛋白的20.24%。结论获得SUMO-BiPPB-mIFNγ-tTRβⅡ可溶性表达最佳条件,为进一步制备生物活性的蛋白和后续功能研究奠定基础。
- 董溢馨王小花刘海峰
- 关键词：融合蛋白可溶性表达
- 截短型转化生长因子βⅡ型受体对急性肝损伤小鼠炎症因子表达的影响
- 2021年
- 目的探讨截短型转化生长因子βII型受体(tTβRII)对四氯化碳(CCl_(4))诱导C57BL/6J小鼠急性肝损伤炎症因子表达的影响。方法将20只C57BL/6J小鼠随机分为空白对照组、模型组、模型对照组和tTβRII处理组,每组5只。空白对照组小鼠腹腔注射200μL纯橄榄油,每天1次,共4 d;其余三组小鼠均腹腔注射200μL 40%的CCl_(4)/橄榄油混合液,1次/d,共4 d,同时模型对照组和tTβRII处理组小鼠分别在第3天和第4天尾静脉注射PBS和目的蛋白tTβRII(60μg)。最后一次注射24 h后麻醉处死小鼠并取出肝组织,苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织病理学变化;实时荧光定量PCR检测肝组织中炎症细胞因子TNF-α和IL-1βmRNA的表达;免疫组化染色检测肝组织中TNF-α和IL-1β蛋白的表达。结果(1)HE染色结果表明,与空白对照组相比,模型组中肝小叶排列紊乱,肝细胞发生变性坏死,经tTβRII处理后,肝小叶排列趋于规则且肝细胞形态趋于完整。(2)实时荧光定量PCR表明,与空白对照组相比,模型组中TNF-α和IL-1βmRNA表达均显著增加(F=202.322,P=5.5664E-8;F=72.595,P=0.000002),而与模型组相比,tTβRII处理组中TNF-α和IL-1βmRNA表达均显著下降(F=202.322,P=0.000001;F=72.595,P=0.007624)。(3)免疫组化染色表明,与空白对照组相比,模型组中TNF-α和IL-1β蛋白表达均上调,而与模型组相比,tTβRII处理组中TNF-α和IL-1β蛋白表达均下调。结论目的蛋白tTβRII对CCl_(4)诱导的急性肝损伤具有一定的保护作用,其作用可能是通过影响炎症因子表达实现的。
- 黄珍王小花初彦辉刘海峰
- 关键词：四氯化碳肝损伤炎症因子
- 鱼鳞胶原蛋白对免疫低下小鼠皮肤伤口愈合的影响被引量：14
- 2014年
- 目的探索鱼鳞胶原蛋白对大鼠成纤维细胞增殖、免疫低下小鼠皮肤伤口愈合的影响。方法通过水提法提取鱼鳞胶原蛋白,利用环磷酰胺诱导小鼠免疫低下模型,MTT法检测鱼鳞胶原蛋白对成纤维细胞增殖的影响,实时定量荧光PCR(real time PCR),酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA),流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测免疫低下小鼠伤口处血小板衍生因子(platelet derived growth factor,PDGF)、转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGFβ)mRNA表达、合成及M2型巨噬细胞含量。结果鱼鳞胶原蛋白促进了成纤维细胞增殖,并呈一定的剂量依赖关系,当浓度达到40 mg/L时,增殖率可达38.65%。鱼鳞胶原蛋白0.5 mg组及1 mg组明显促进了免疫低下小鼠伤口愈合。治疗第15天,鱼鳞胶原蛋白1 mg组愈合率可达96.34%;鱼鳞胶原蛋白1 mg组明显促进了伤口处PDGF、TGFβmRNA表达及合成,并且增加了伤口处M2型巨噬细胞含量。结论水提法提取的鱼鳞胶原蛋白具有良好的相容性,可促进免疫低下小鼠伤口愈合,具有潜在的临床应用价值。
- 朱伟张晓莉刘洋王小花李玉婷张子薇李敬超高美尼
- 关键词：鱼鳞胶原蛋白免疫低下伤口愈合
- 截短型人转化生长因子βⅡ型受体胞外域的表达及活性分析
- 2018年
- 目的构建截短型人转化生长因子βⅡ型受体胞外域(thTβRⅡ)原核表达载体,诱导表达纯化thTβRⅡ蛋白,并分析其生物学活性。方法以本实验室前期构建的TβRⅡ全长基因片段(p GEX-4T1-TβRⅡ)为模版,常规PCR扩增出带有Nde I和Bam HI酶切位点的thTβRⅡ目的基因,并插入原核表达载体p ET28a,命名为p ET28a-thTβRⅡ。将经过PCR、双酶切和DNA测序正确的p ET28a-thTβRⅡ转化至大肠杆菌Rossta诱导表达,用Ni^(2+)亲和层析纯化获得高纯度thTβRⅡ目的蛋白,经SDS-PAGE进行纯度分析,MTT法观察其对转化生长因子-β1(TGF-β1)活化的人肝星状细胞LX-2增殖活性的影响,real-time RT-PCR及Western blot检测其对TGF-β1、纤连蛋白(FN)mRNA及FN、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达的影响。结果 p ET28a-thTβRⅡ原核表达载体构建成功,宿主菌Rossta/p ET28a-thTβRⅡ在37℃经0.8mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导5 h获得目的蛋白thTβRⅡ的大量表达,目的蛋白主要以包涵体的形式存在,通过Ni^(2+)亲和层析成功获得高纯度thTβRⅡ,SDS-PAGE鉴定分子量约为18.0 kD,MTT显示150μg/mL的重组蛋白thTβRⅡ能明显抑制活化的人肝星状细胞LX-2增殖,real-time RT-PCR及Western blot显示200μg/mL的重组蛋白thTβRⅡ其能显著减少TGFβ1、FNmRNA;FN、α-SMA蛋白的表达。结论成功构建thTβRⅡ原核表达载体,诱导表达纯化并获得高纯度重组蛋白thTβRⅡ,其能抑制活化的LX-2细胞增殖并具有抗纤维化作用,为进一步体内外功能研究打下基础。
- 韩瑞杰王小花左魁阳初彦辉李桂芹刘海峰
- 关键词：包涵体纯化
- 肝纤维化治疗的研究进展被引量：3
- 2019年
- 纤维化(Fibrosis)在许多器官中皆可发生,最主要病理变化是器官和组织的纤维结缔组织增多,实质细胞与功能细胞减少,逐渐发展会使器官组织的结构和功能发生改变,甚至出现功能丧失与衰竭,严重威胁人类健康和生命。目前能够有效治疗纤维化地方式与方法仍在不断研究中。随着科学技术的提高,治疗纤维化有了很大的提高,目前医学认为肝纤维化经过治疗是可以得到改善的,现在临床上对肝纤维化的治疗主要从控制病因、减少细胞外基质的形成、减少或抑制肝星状细胞活化、促进纤维组织降解等几方面入手,本文主要从中药、西药、细胞学和基因治疗等方面对纤维化治疗进行综述,为肝纤维化的治疗提供有效依据。
- 黄珍王小花刘海峰
- 关键词：肝纤维化细胞外基质肝星状细胞
- 一种新型的截短型转化生长因子βⅡ型受体在大肠杆菌中的表达及活性鉴定被引量：2
- 2009年
- 克隆人源的截短型转化生长因子βⅡ型受体(tTGF-βRⅡ),成功构建高效稳定的大肠杆菌表达菌株。采用PCR技术扩增得到目的基因tTGF-βRⅡ,插入原核表达载体pGEX4T3的相应位点,并在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高可溶性表达的重组蛋白,重组蛋白GST-tTGF-βRⅡ经Glutathione-Sepharose4B亲和层析纯化后,再经凝血酶酶切,然后经Glutathione-Sepharose4B纯化获得目的蛋白tTGF-βRⅡ,SDS-PAGE分析表明:可以通过Glutathione-Sepharose4B亲和层析纯化得到GST-tTGF-βRⅡ,其分子量约37.0kDa,和目的蛋白tTGF-βRⅡ,分子量为11.0kDa。Western blot结果显示GST-tTGF-βRⅡ和tTGF-βRⅡ为特异性蛋白。运用基因工程的方法获得tTGF-βRⅡ目的蛋白,对瘢痕成纤维细胞增殖具有很好的抑制作用。
- 初彦辉刘海峰王小花张羽飞武艳袁晓环
- TGF-β1诱导乳腺癌细胞上皮-间充质转化中相关miRNAs筛选被引量：3
- 2017年
- 目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)诱导乳腺癌细胞MCF-7上皮-间充质转化(epithelialmesenchymal transition,EMT)的最佳浓度以及miRNAs在其中的差异表达。方法:不同浓度的TGF-β1作用于MCF-7细胞48h,光学显微镜下观察MCF-7细胞形态学的变化,同时Real-time PCR检测MCF-7细胞中上皮和间充质标志物表达变化;进一步利用Real-time PCR对通过生物信息学挑选的差异表达的miRNAs进行验证。结果:10ng/ml的TGF-β1作用MCF-7细胞48h后,能诱导MCF-7细胞发生EMT转化,同时筛选出与EMT密切相关的4个miRNAs(miR-16,miR-196a,miR-196b和miR-21)。结论:miR-16、miR-196a、miR-196b和miR-21在TGF-β1诱导的EMT细胞模型中表达上调,发现这4个miRNAs与TGF-β1诱导的EMT密切相关。
- 王小花宋爽韩瑞杰左魁阳李桂芹初彦辉刘海峰
- 关键词：TGF-Β1MIRNAS上皮-间充质转化乳腺癌
