李计尚
- 作品数：7 被引量：38H指数：3
- 供职机构：四川农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：长江学者和创新团队发展计划四川省教育厅青年基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 牦牛SPAG11基因克隆与生物信息学分析被引量：1
- 2016年
- 【目的】克隆牦牛(Bos grunniens)精子相关抗原11(Sperm-Associated Antigen 11,SPAG11)基因,并了解其分子结构特征,为进一步研究牦牛SPAG11生物学功能奠定基础。【方法】从牦牛睾丸中提取总RNA,RTPCR扩增并克隆SPAG11C、SPAG11 D和SPAG11E基因,测序后进行生物信息学分析。【结果】克隆出牦牛SPAG11基因3个亚型:SPAG11C、SPAG11 D和SPAG11E,序列大小分别是351,408和261bp,分别编码117,129和80个氨基酸,其中SPAG11 D和SPAG11E序列包含1个完整开放阅读框(ORF),SPAG11C序列包含部分ORF。牦牛SPAG11C、SPAG11 D和SPAG11E核苷酸序列与黄牛(Bos taurus)相应序列相似性最高,而与黄牛β-防御素1相似性较低(<50%)。3个蛋白亚型均具有β-防御素家族基本特性,生物信息学分析显示其均含有磷酸化位点。【结论】成功克隆牦牛SPAG11C、SPAG11 D和SPAG11E基因,明确了其编码蛋白的分子结构特征。
- 徐绮嫔王寒李计尚周金伟张于沈留红余树民彭广能曹随忠
- 关键词：牦牛Β-防御素生物信息学
- 奶牛S100A12蛋白多克隆抗血清的制备被引量：2
- 2012年
- 为研究奶牛S100A12蛋白功能提供一种灵敏、高效的免疫学检测试剂,将纯化好的S100A12蛋白分别与弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂乳化制备成抗原,免疫新西兰大白兔制备S100A12多克隆抗血清,应用琼脂双扩散法、间接ELISA法和Western blot方法检测该抗体的效价及其特异性。结果表明,所制备的S100A12抗血清经琼扩法和间接ELISA法检测效价分别达到1∶8和1∶409 600,同时免疫印迹法证实该抗体能与S100A12蛋白特异性结合。本试验成功获得了特异性强、效价高的S100A12多克隆抗体,为进一步深入研究S100A12基因功能提供了有力工具。
- 崔亚飞姚学萍雍康李计尚余树民曹随忠
- 关键词：奶牛多克隆抗体
- TLRs基因在牦牛雄性生殖器官中表达情况的检测被引量：7
- 2014年
- 为了解Toll样受体（TLRs）基因在牦牛生殖系统中的表达情况，应用半定量RT—PCR技术检测了TLRs基因mRNA在雄性牦牛生殖组织中的表达水平。结果显示，TLR1mRNA和TLR3～TLR9mRNA在睾丸、附睾、输精管和阴茎中均相对高表达；TLR2mRNA在睾丸、附睾头、附睾体和阴茎中相对高表达，在附睾尾和输精管中相对低表达；TLR10mRNA在睾丸、附睾头、附睾体和阴茎中相对低表达，在附睾尾和输精管中不表达。结果表明，TLRsmRNA在雄性牦牛生殖组织中均有不同程度的表达，提示它在牦牛生殖过程中可能发挥一定的作用。
- 曹随忠李计尚张于廖纯颖沈留红余树民姚学萍
- 关键词：牦牛
- 牦牛SPAG11、TLRs、NODs基因克隆、序列分析及其在雄性生殖器官中的表达检测
- 精子相关抗原11(Sperm associated Antigen11, SPAG11)基因主要在哺乳动物雄性生殖系统中表达,具有β-防御素的抗菌活性及其独特的生殖功能,如促进精子的成熟和获得、提高精子活力和穿过透明带等...
- 李计尚
- 关键词：牦牛
- 文献传递
- NOD1和NOD2基因在牦牛雄性生殖器官中的表达检测
- 2014年
- 为了解NOD1和NOD2基因在牦牛生殖系统中的表达情况,从脾脏组织总RNA中RT-PCR扩增牦牛NOD1和NOD2基因,半定量RT-PCR分析NOD1和NOD2 mRNA在牦牛雄性生殖组织的表达水平。结果显示,NOD1在脾脏、睾丸、附睾头、附睾体、附睾尾、输精管和阴茎中均相对低表达,而NOD2在脾脏、睾丸、附睾头、附睾体、附睾尾、输精管和阴茎中均相对高表达。结果表明,NOD1和NOD2在牦牛雄性生殖组织中广泛表达,提示其在牦牛生殖过程中可能发挥一定的作用。
- 余树民李计尚张于廖纯颖姚学萍沈留红曹随忠
- 关键词：牦牛NOD2基因
- 黄芪多糖对泌乳期奶牛抗氧化能力的影响被引量：25
- 2014年
- 本实验旨在研究黄芪多糖对泌乳期荷斯坦奶牛抗氧化能力的影响。试验选取年龄、胎次和体重接近的泌乳期荷斯坦奶牛35头,随机分为5组(每组7头),各组每天分别在精料中添加0、5、10、50、100 g黄芪多糖,连续饲喂14 d。分别在第0、14和24 d采血测定血清总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量。结果显示:在日粮中添加适量的黄芪多糖显著提高(P<0.05)泌乳期奶牛血清总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,同时显著降低(P<0.05)血清中丙二醛(MDA)的含量。结果表明,日粮中添加黄芪多糖有提高泌乳期奶牛抗氧化能力的作用,适宜添加剂量在10 g^50 g/头·d。
- 申义君周金伟王斌李计尚沈留红余树民曹随忠
- 关键词：黄芪多糖奶牛泌乳期抗氧化
- SPAG11基因在雄性牦牛生殖器官中表达的检测被引量：4
- 2014年
- 为了检测精子相关抗原11(sperm-associated antigen 11,SPAG11)基因在雄性牦牛生殖器官中的表达谱并分析其组织表达特性,从牦牛附睾头总RNA中RT-PCR扩增SPAG11基因(SPAG11C、D、E、U、V和W),半定量RT-PCR分析SPAG11mRNA在牦牛生殖器官中的表达水平。采用合成的SPAG11E多肽制备牦牛SPAG11E多克隆抗体,免疫组织化学检测SPAG11E蛋白在睾丸和附睾中的表达及定位情况。结果显示,SPAG11C、U、V和W基因在睾丸和附睾相对低表达,而SPAG11D和E基因相对高表达;SPAG11C和U基因在输精管相对低表达,而SPAG11E相对高表达;除SPAG11D在卵巢相对低表达外,SPAG11基因在其他雌性生殖器官均不表达。免疫组织化学结果显示,SPAG11E蛋白在睾丸的精子细胞和附睾内壁精子头部表达。结果表明,SPAG11基因的表达具有组织特异性,提示它在牦牛睾丸和附睾中可能发挥重要的免疫功能和生殖功能。
- 余树民李计尚张于廖纯颖沈留红姚学萍曹随忠
- 关键词：牦牛睾丸附睾
