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下调CD59的表达可以抑制HeLa细胞增殖并促进其凋亡被引量：5: 2014年; 目的采用RNA干扰与噬菌体肽库展示技术2种方法干预宫颈癌HeLa细胞CD59的表达,以探讨比较2种CD59低表达方式对HeLa细胞增殖与凋亡的影响。方法将10μg/mL的CD59短肽封条作用于HeLa细胞8 h后,联合CD59干扰质粒pSUPER-siCD59稳定转染HeLa细胞系,采用MTT法检测各组细胞增殖率的变化,采用TUNEL染色、annexin V-PE/7-AAD染色结合流式细胞术检测细胞凋亡。结果 CD59短肽封条组与pSUPER-siCD59质粒稳定转染细胞组HeLa细胞增殖明显弱于对照组,TUNEL及流式细胞术检测结果显示2组处理细胞均存在细胞凋亡现象,且短肽封条的效果要好于pSUPER-siCD59质粒。结论下调CD59表达能抑制其细胞增殖并促进其凋亡,且短肽封条效果要优于CD59 RNA干扰质粒。; 高美华李营张蓓王冰梁洁李园园; 关键词：CD59 RNA干扰 HELA细胞增殖凋亡

活化/抑制CD59对T淋巴细胞增殖的影响被引量：4: 2014年; 目的:研究活化/抑制CD59分子对T细胞增殖的影响。方法:Jurkat细胞分别电转入pSUPER-siCD59质粒及用CD59活化抗体刺激。激光共聚焦显微镜下观察细胞的电转情况及CD59分子在细胞膜上的分布及表达;MTT比色法检测细胞的增殖。Western blot检测CD59分子表达及T细胞活化相关蛋白ZAP70磷酸化水平。结果:激光共聚焦显微镜下可见电转染细胞表达绿色荧光,转染效率约为40%。转染pSUPER-siCD59质粒后CD59荧光强度强度降低,CD59分子均匀分布于细胞膜与正常Jurkat细胞分布一致。抗体活化后CD59在细胞膜成簇状分布。抗体活后细胞增殖速率和磷酸化ZAP70的蛋白表达水平均高于正常组(P<0.05),而细胞电转质粒后则恰恰相反。结论:CD59通过与信号转导分子的相互作用促进T细胞活化增殖。; 李园园高美华丛蓓蓓王丽娜王冰张蓓李营梁洁; 关键词：电转染 JURKAT 磷酸化蛋白

T细胞活化连接蛋白脂筏定位功能缺失影响T细胞内CD59信号转导的功能被引量：2: 2013年; 目的用前期构建好的T细胞活化连接蛋白(LAT)-EGFP质粒,基因点突变技术使LAT-EGFP的棕榈酰化位点突变,使LAT-EGFP-M(棕榈酰化位点突变的LAT-EGFP)的细胞膜定位功能缺失,抗体交联CD59后观察T细胞信号活化状态的改变。方法采用电转染的方法转染Jurkat细胞,抗体交联CD59后,共聚焦荧光显微镜下观察LAT分布情况的变化;用噻唑蓝(MTT)比色法检测抗体交联前后各组Jurkat细胞增殖情况差别;应用ELISA检测各组细胞上清中IL-2的变化水平;用Western blot技术检测抗体交联后LAT-EGFP和LAT-EGFP-M的磷酸化程度。结果抗体交联CD59之后,LAT-EGFP-M较LAT-EGFP相比不能定位聚集于CD59所在的脂筏区域,并且转染了突变LAT-EGFP-M质粒的Jurkat细胞增殖速度和IL-2分泌能力低于转染LAT-EGFP质粒、转染空载体EGFP-N3及未转染的细胞。LAT-EGFP-M的磷酸化程度远低于LAT-EGFP。结论棕榈酰化位点缺失的LAT会减弱CD59在T细胞中的信号转导功能。; 秦云高美华王冰张蓓李园园李营梁洁; 关键词：CD59 T淋巴细胞

上下调CD59对宫颈癌细胞增殖活性作用的研究被引量：2: 2013年; 目的探讨上下调CD59锚固蛋白对Hela细胞增殖活性的影响。方法将前期构建的pSUPER-siCD59质粒、pIRES-WT CD59质粒以及增加了CD59W40活性位点(C39W40K41→W39W40W41)的pIRES-MCD59质粒用脂质体转染的方法转染Hela细胞,免疫荧光法倒置荧光显微镜下观察Hela细胞膜上CD59基因表达,并用RT-PCR及Western blot的方法检测各组转染细胞中CD59的表达。采用噻唑蓝(MTT)比色法检测各转染组CD59抗体交联前后Hela细胞增殖活性的变化,比较各组差异。结果转染pSUPER-siCD59质粒组CD59基因与蛋白表达量明显低于正常组,细胞增殖活性降低,而转染pIRES-WT CD59与pIRES-MCD59质粒组则反之。结论下调CD59能抑制Hela细胞增殖活性,上调CD59则能增强其增殖,为宫颈癌的靶向治疗奠定了基础。; 李营高美华张蓓王冰张树超; 关键词：CD59 下调 HELA细胞增殖

常山酮对大鼠肝纤维化的影响及其机制被引量：8: 2013年; 目的探讨常山酮对刀豆蛋白A(Con A)诱导的大鼠肝纤维化的影响及其机制。方法 50只Wistar大鼠随机分成对照组(8只)、模型组(14只)及常山酮低、高剂量(5、10 mg/kg)组(各14只),对照组大鼠每周尾iv磷酸盐缓冲液(PBS)300μL 1次;其余3组大鼠每周尾iv Con A12.5 mg/kg(溶于300μL PBS)1次,连续8周。自造模起在常山酮各组大鼠饲料中添加相应剂量的常山酮,连续给药8周后大鼠称质量,处死。生化分析法检测血清中肝功能指标丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)的水平;ELISA法检测血清肝纤维化指标转化生长因子-β1(TGF-β1)、透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ)的水平;肝组织行HE和Masson胶原染色,进行病理分析并按肝纤维化半定量计分系统(SSS)计分系统进行评分;天狼星红和免疫组化染色观察肝组织Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)的沉积及蛋白表达的变化。结果与模型组大鼠比较,常山酮组大鼠血清中ALT、AST、TP、TGF-β1、HA和PC-Ⅲ水平显著降低(P<0.05、0.01),肝脏病理损伤明显减轻(P<0.05、0.01),肝纤维化评分明显降低(P<0.05、0.01),肝组织中Col Ⅰ沉积及蛋白的表达显著下调(P<0.05、0.01)。结论常山酮能有效减轻ConA致肝纤维化大鼠的肝脏损伤,降低肝纤维化程度,其机制与抑制肝内Col Ⅰ的沉积和蛋白的表达有关。; 梁洁张蓓刘佳宝沈若武张希东高美华李营耿霄周文超王丽王十锦; 关键词：刀豆蛋白A 肝纤维化 COL TGF-Β1 Α-SMA

CD59促进LAT介导的T细胞活化被引量：3: 2014年; 目的:研究CD59分子在LAT(Linker for activated T cells)介导的T系淋巴细胞活化中所起的作用。方法:构建LAT-GFP融合蛋白,以逆转录病毒为载体转染Jurkat细胞,建立稳定转染细胞株(Jurkat-GFP)。分别使用CD59抗体刺激和pSUPER-siCD59干扰质粒(GFP标记)沉默Jurkat-GFP细胞。免疫荧光观察CD59和LAT分子在细胞膜的表达和定位;MTT比色法检测细胞增殖率的变化;Western blot检测LAT活化信号转导通路中相关蛋白分子磷酸化水平。结果:荧光显微镜下可见Jurkat-GFP细胞绿色荧光表达于细胞膜,转染干扰质粒后细胞膜和细胞质均有绿色荧光表达。激光共聚焦显微镜下可见CD59抗体刺激前CD59和LAT分子均匀分布于细胞膜,且转染干扰质粒的Jurkat-GFP细胞CD59表达量下降。CD59抗体刺激后CD59分子和LAT分子点状聚集共定位于细胞膜。MTT结果表明相对于正常Jurkat-GFP细胞,抗体活化后细胞增殖速率明显升高(P>0.05),而电转干扰质粒后细胞生长减慢。Western blot结果表明,CD59抗体刺激后细胞ZAP-70、LCK、PLC-r总蛋白表达无明显差异(P>0.05),而磷酸化蛋白表达显著增高(P<0.05)。结论:抗体活化后细胞膜上CD59和LAT分子聚集并共定位于细胞膜,且细胞信号转导通路下游分子磷酸化水平增高,进一步证实CD59分子经抗体活化后可促进LAT介导的T细胞信号转导。; 高美华李园园王丽娜丛蓓蓓王冰张蓓李营梁洁; 关键词：CD59 LAT JURKAT 蛋白磷酸化

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李营

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