张健
- 作品数：12 被引量：13H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：哈尔滨市科技攻关计划项目国家自然科学基金黑龙江省卫生厅科研项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 血红蛋白β亚基对猪流行性腹泻病毒增殖抑制作用的研究被引量：2
- 2016年
- 本实验室前期蛋白质组学研究结果显示,猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染非洲绿猴肾细胞(Vero-E6)后,导致血红蛋白β亚基(HBB)的表达量升高。为进一步从蛋白水平验证前期的实验结果并研究HBB对PEDV增殖作用的影响,本研究将PEDV感染Vero-E6细胞,感染24 h后经western blot检测结果表明,PEDV感染能够促进HBB的表达。进一步采用RT-PCR从Vero-E6细胞总RNA中扩增HBB基因并将其克隆至真核表达载体pCAGGS中,构建HBB真核表达重组质粒pCAGGS-HBB,并将其转染至Vero-E6细胞。经western blot检测结果表明,HBB在Vero-E6细胞中获得高效表达。在HBB过表达后感染PEDV,经western blot、TCID_(50)及荧光定量PCR检测结果表明,过表达HBB能够显著抑制PEDV的增殖。本研究对于进一步阐明HBB对PEDV增殖作用的影响机制提供了实验依据。
- 徐云飞郭龙军张健时洪艳冯力任慧英王玉娥
- 关键词：猪流行性腹泻病毒病毒增殖
- SDT作用大鼠C6胶质瘤细胞AIF凋亡途径的研究被引量：3
- 2013年
- 为探讨SDT作用大鼠C6胶质瘤细胞产生凋亡是否存在凋亡诱导因子（AIF）的凋亡途径，其凋亡途径为何。本研究培养大鼠C6胶质瘤细胞，采用MTT法测五组细胞（对照组、HMME、超声、SDT、SDT＋Z—VAD．fmk）处理后各时段（6、12、24、48、72h）的抑瘤率；透射电镜观察五组细胞处理后6h的亚细胞结构变化；Westernblot分析五组细胞处理后1、6、12、24h，各时段的AIF变化；免疫荧光细胞化学分析五组细胞处理后6h，AIF的位置变化；DNA电泳分析五组细胞处置后6h的细胞凋亡情况。实验结果表明SDT致大鼠C6胶质瘤细胞凋亡过程中，AIF参与其中。其凋亡途径为，SDT致使线粒体膜通透性增加，位于线粒体膜间隙的AIF从线粒体转位至细胞质中，然后AIF又转位至细胞核周围和细胞核中，致使DNA呈大片段（～50Kbp）断裂，引起大鼠C6胶质瘤细胞凋亡。
- 徐勇刚王智张健王杰傅松滨岳武
- 关键词：C6胶质瘤细胞声动力凋亡凋亡诱导因子
- 表达猪白细胞介素2重组腺病毒的构建
- 2011年
- 为构建表达猪白细胞介素2(IL-2)的复制缺陷型重组腺病毒,本研究提取经刀豆球蛋白A(Con A)刺激体外培养的长白猪外周血淋巴细胞总RNA,利用RT-PCR扩增猪IL-2基因,并克隆于质粒pIRES2-EGFP中,将含有IL-2及EGFP的基因片段亚克隆到腺病毒的穿梭质粒pDC315中,构建重组腺病毒穿梭质粒pDC315-IL-2-EGFP。利用脂质体转染方法将pDC315-IL-2-EGFP和腺病毒骨架质粒pBHGloxΔE1,E3Cre共转染HEK293细胞。根据腺病毒感染后形成的典型细胞病变及EGFP的荧光信号筛选重组腺病毒rAd-IL-2-EGFP。经western blot鉴定,结果表明获得了一株能够表达猪IL-2蛋白的重组腺病毒rAd-IL-2-EGFP。本研究为进一步研究猪IL-2在疫苗免疫中的增强作用及研制新型免疫增强剂奠定了基础。
- 张健陈艳乔传玲杨焕良唐续辛晓光陈化兰
- 关键词：IL-2重组腺病毒基因表达
- 利用真核表达的猪流感病毒NP蛋白制备其特异性的单克隆抗体被引量：4
- 2010年
- 为制备猪流感病毒(SIV)核蛋白(NP)单克隆抗体(MAb),本研究将重组质粒pMD-NP中含有的SIVNP基因亚克隆于pCAGGS真核表达质粒中,获得重组质粒pCAGGS-NP,将其转染293T细胞,通过间接免疫荧光(IFA)和western blot检测表明NP蛋白在293T细胞中获得了表达。将pCAGGS-NP以100μg/只剂量免疫4周龄～5周龄BALB/c小鼠,3次免疫后,利用杂交瘤细胞融合技术获得1株稳定分泌抗SIVNP的MAb杂交瘤细胞株(3D7);该MAb经Ig亚类鉴定为IgM,轻链为κ链,其诱导小鼠产生的腹水ELISA效价为1:105;纯化3D7腹水并对其进行亲和力及抗原结合活性的测定,ELISA曲线图显示亲和力常数为1.02×106M-1,IFA结果显示其可与H1N1、H3N2、H9N2亚型SIV发生特异性反应,具有良好的反应活性。该MAb的制备将为进一步建立猪流感的诊断方法以及分析NP蛋白抗原表位等方面的研究奠定基础。
- 郭利敏乔传玲陈艳杨焕良张健辛晓光陈化兰
- 关键词：猪流感病毒核蛋白基因真核表达单克隆抗体
- 用疫苗防鸡球虫病
- 2014年
- 肉鸡的球虫病可以通过服用抗球虫药物来预防。然而,耐药性球虫几乎可以使抗球虫药物不起任何作用。这是在比利时Tom Serraerens肉鸡养殖场观察到的情况。使用疫苗是他的最后一招。
- 何闪张健张涛Fabian Brockotter
- 关键词：球虫病肉鸡疫苗
- 犊牛脐疝的手术治疗
- 2009年
- 脐疝是幼畜常发，各种家畜均可发生的一种常见病，多见于出生时，或者出生数天或数周。发生原因是脐孔发育不全、没有闭锁，脐部化脓或腹壁发育缺陷等。
- 陈志宇张健李敏
- 关键词：手术治疗脐疝犊牛发育不全幼畜腹壁
- 预防食源性人畜共患病的全球专业技术
- 2014年
- 沙门氏菌是全世界中最常见的食源性人畜共患病,且食用动物是非伤寒(人畜共患病)沙门氏菌感染的贮库。通过减少鸟类内脏器官的定植,防止鸡蛋污染,减少粪便脱落,沙门氏菌疫苗可降低公共健康风险,从而减少环境污染。德国罗曼动物保健有限公司推出的最新产品——AviPro沙门氏菌疫苗通过饮用水安全、方便地进入鸟类体内,并避免了自然路径的沙门氏菌交叉感染,深受消费者信赖。
- 张健毛慧Verena Beckhusen
- 关键词：沙门氏菌
- 抗猪甲型H1N1流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体的制备与特性分析被引量：2
- 2011年
- 本研究旨在制备猪甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)蛋白的特异性单克隆抗体。采用RT-PCR方法扩增猪甲型H1N1流感病毒的HA基因,将其克隆至真核表达载体pCAGGS上,获得重组质粒pCAGGS-HA,转染293T细胞,通过间接免疫荧光(IFA)检测表明HA蛋白在293T细胞中得到表达。将pCAGGS-HA以100μg.只-1剂量免疫5周龄BALB/c小鼠,获得4株稳定分泌抗HA蛋白单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞株,分别命名为11G7、3C10、3G3和2B11。其中11G7诱导小鼠产生的腹水HI效价为14log2,中和效价为1∶8 192,HI试验结果进一步表明11G7只与甲型H1N1流感病毒发生反应,而不与其他H1N1、H1N2、H3N2、H5N1及H9N2亚型流感病毒反应。该MAb的制备将为建立猪甲型H1N1流感病毒与传统亚型SIV的鉴别诊断方法奠定基础。
- 张健陈艳乔传玲杨焕良唐续辛晓光陈化兰
- 关键词：HAMAB
- 犬椎间盘疾病的治疗
- 2009年
- 椎间盘疾病是一种由未知原因引起的椎间盘变形性变化，表现为椎间盘突出或盘组织进入椎管压迫脊髓或脊神经根。如果椎间盘的髓核或纤维环突出到椎管内，脊髓就会受到物理性压迫，引起受压处乃至尾侧的神经障碍，这种病症被称为椎间盘突出症。椎间盘疾病可见于各种品种的犬，腊肠犬发病率最高，京巴犬和贵妇犬次之，德国牧羊犬和杂种犬也会患椎间盘疾病。在所有的椎间盘疾病中椎间盘突出症的发病率最高。
- 张健陈志宇朱明艳
- 关键词：椎间盘疾病贵妇犬椎间盘突出症德国牧羊犬脊神经变形性
- H3N2亚型猪流感病毒核蛋白基因的优化表达及抗原性分析被引量：1
- 2010年
- 根据已获得的猪流感病毒(SIV)分离株A/Swine/Guangdong/9/05(H3N2)NP基因的核苷酸序列设计合成了1对带有特定酶切位点的引物,经RT-PCR扩增NP基因,将其克隆到pMD19-Simple-T载体,鉴定并测序正确后,构建pET32a-NP表达质粒,并转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳分析结果显示,表达的融合蛋白分子质量约为73ku,在25℃条件下主要以可溶性形式存在。将重组NP蛋白纯化后进行Western-blotting和间接免疫荧光试验,结果显示,表达蛋白可分别与H1N1、H3N2及H9N2亚型SIV阳性血清发生特异性反应,表明该蛋白具有良好的反应原性和交叉反应性;用纯化的重组NP蛋白免疫小鼠制备的多克隆血清也可与H1N1、H3N2及H9N2亚型SIV发生特异性反应,进一步证实所表达的重组NP蛋白具有良好的免疫原性。
- 郭利敏乔传玲陈艳杨焕良张健辛晓光陈化兰
- 关键词：猪流感病毒核蛋白基因原核表达抗原性
