冯德江
- 作品数：18 被引量：143H指数：8
- 供职机构：中国科学院遗传与发育生物学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家转基因植物研究与产业化专项更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 水稻EPSP合酶第一内含子增强外源基因的表达被引量：14
- 2003年
- 分离并克隆了水稻5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合酶基因的第一内含子(EPI)。序列分析表明,EPI长704bp,GC含量为36.2％。为进一步研究EPI序列在转基因植物中对外源基因表达水平的影响,将EPI序列插入CaMV35S启动子和报导基因β-葡糖醛酸酶(β-glucuronidase,GUS)基因(gus)之间。采用基因枪法转化烟草叶片,gus基因瞬时表达表明,EPI序列的存在可以使GUS的表达水平提高。利用农杆菌法转化烟草,获得了gus基因稳定表达的植株。GUS活性检测表明EPI内含子的存在可以显著提高GUS基因的表达(P<0.01)。Northern blot分析表明,在转录水平上gus基因在含EPI内含子的转基因植株中的表达高于不含EPIgus基因的表达,并且成熟的gus mRNA中EPI被正确剪取掉了,表明是一种非转译的内含子。GUS定量检测表明,EPI存在可以使GUS的平均表达水平提高3倍,最高单株可提高6倍。
- 徐军望冯德江宋贵生魏晓丽陈蕾伍晓丽李旭刚朱祯
- 关键词：水稻EPSP合酶第一内含子
- 烟草tga1a基因的表达对外源基因在植物中表达的影响被引量：1
- 2002年
- 烟草DNA结合蛋白TGA1a可特异地作用于CaMV35S增强子的激活序列as-1（-83～-63）,并表现为转录激活功能.为了研究tga1a基因的表达对外源基因在植物中表达的影响,将它置于维管束特异性启动子rolC下游,并与CaMV35S启动子控制的报道基因串联成一种反式调控系统,构建了植物表达载体,同时,以CaMV35S和rolC分别控制的报道基因构建植物表达载体为阳性对照.通过农杆菌介导方法转化烟草和分子鉴定,证明报道基因存在于转化烟草基因组中,分别测定了不同转基因单株的GUS活性,结果表明:rolC控制下的tga1a的表达显著增强了CaMV35S控制下的报道基因表达,其GUS活性明显高于CaMV35S或rolC单独调控报道基因的转化植株,单株的最高GUS活性达到两个阳性对照的10倍以上.组织化学定位证实该串联系统使GUS蛋白主要集中在维管束组织.这一研究结果为提高外源基因在转基因植株中的表达水平和外源基因的组织特异性表达创立了一个新模式.
- 路子显常团结李旭刚徐军望李慧芬陈宛新冯德江肖桂芳朱祯
- 关键词：外源基因DNA结合蛋白植物转化报道基因植物基因工程
- 利用PCR对PVX外壳蛋白基因进行同义密码子修饰
- 2003年
- 利用聚合酶链式反应 (PolymeraseChainReaction ,PCR)与限制性内切酶相结合的方法 ,设计 4条含有限制性酶切位点和相应突变的引物。以马铃薯X病毒 (PotatoVirusX ,PVX)外壳蛋白cp基因为模板 ,扩增出相应的片段 ,相应酶切后通过三片段连接构建到克隆载体pBlueKS(+/ - )上。随机挑选重组子测序表明 ,利用三片段拼接成功地在PVX外壳蛋白基因的不同部位产生了突变。实验结果说明利用三片段接可以大大提高筛选得到突变子的效率 ,从而节省人力、物力和时间。
- 冯德江徐军望路子显陈蕾徐鸿林李旭刚朱祯
- 关键词：PCRPVX外壳蛋白基因马铃薯X病毒
- 修饰的cry1Ac基因导入籼稻明恢81获得抗虫纯合系被引量：23
- 2002年
- 采用细胞内定位技术对cry1Ac基因进行修饰 ,其表达产物定位于内质网及衍生自内质网的蛋白体。通过基因枪法成功地将经过修饰的cry1Ac基因导入到优良杂交籼稻恢复系明恢 81中。对潮霉素抗性植株的PCR和Southern检测及ELISA分析证实 ,修饰的cry1Ac基因已整合到受体水稻品种中并得以表达 ,自交加代结合潮霉素筛选于T2 代获得转基因纯合系。抗虫性测试表明 ,部分转基因纯合系高抗二化螟 (Chilosuppressalis)。
- 曾千春吴茜周开达冯德江王锋苏军IAltosaar朱祯
- 关键词：基因导入籼稻抗虫基因转基因水稻基因枪法
- 水稻乙酰乳酸合成酶基因的克隆和功能分析被引量：15
- 2007年
- 乙酰乳酸合成酶(ALS)是植物和微生物中亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸合成途径的一个关键酶,该基因在植物抗除草剂基因工程中具有重要的应用价值。利用生物信息学分析,自水稻中分离了ALS基因的cDNA和基因组DNA序列。序列分析表明,ALS基因没有内含子,GC碱基含量高并不对称分布。软件预测ALS基因是单拷贝基因位于第4号染色体上,Southern杂交验证了此结果。构建ALS基因的植物表达载体并转化烟草,转基因烟草通过PCR-Southern验证。EXACT-RT-PCR结果表明,水稻ALS基因在转基因烟草的叶片和根部均有转录发生。利用甲嘧磺隆进行除草剂抗性测试,和对照烟草相比转基因烟草除草剂抗性高达50mg.L-1。
- 宋贵生冯德江魏晓丽唐家斌朱祯
- 关键词：抗除草剂
- 病毒诱导的PVX cp转基因沉默及其DNA甲基化被引量：1
- 2004年
- 利用PCR方法获得了马铃薯X病毒(PVX)外壳蛋白(CP)基因(cp)，并将其构建到植物表达载体中，利用农杆菌介导的叶盘法转化烟草(Nicotiana tabacum L.)。Northern杂交及Run on实验表明有3株转基因烟草发生了转录后基因沉默。发生沉默的cp基因的甲基化分析结果表明，发生转录后基因沉默的cp基因发生了不同程度的甲基化，说明DNA甲基化并没有完全抑制cp基因的转录。利用PVX病毒对外壳蛋白正常表达的转基因烟草进行接毒，Northern杂交检测结果表明，病毒诱导cp发生了基因沉默。进一步的Run on结果表明，转基因烟草中cp基因在沉默前后转录速率并没有发生变化，说明病毒诱导的沉默是一种转录后沉默。对cp基因沉默前后的甲基化分析表明，病毒的侵染导致了cp基因甲基化程度的增加。
- 冯德江刘翔宋贵生徐鸿林魏晓丽徐军望朱祯
- 关键词：马铃薯X病毒外壳蛋白DNA甲基化基因沉默
- 转修饰cry1 Ac基因籼稻明恢81经花药培养获得抗虫DH系被引量：16
- 2002年
- 对基因枪法获得的明恢 81转修饰的cry1Ac基因当代植株进行花药培养 ,共接种花药 2 6 0 0枚 ,获得 83份花培植株 ,其中双倍体植株 43份 ,单倍体植株 40份。PCR结果表明含有cry1Ac基因的植株 5 5份 ,花培植株群体中转基因与非转基因植株的比值为 2∶1(5 5 2 8)。进一步结合Southernblot和ELISA分析 ,于花培植株当代筛选到转基因纯合株系 36份。外源蛋白表达量上 ,花药来源于同一克隆的DH系的不同植株之间基本一致 ,最高的Cry1Ac含量达 0 2 5 %。田间抗虫性试验表明 ,经花药培养纯合获得的部分转基因纯合系植株对二化螟 (Chilosuppressalis)表现出高抗 ,而且主要农艺性状保持不变。以上结果表明水稻花药培养可以加速转基因的纯合与育种利用。
- 曾千春吴茜冯德江周开达刘翔朱祯
- 关键词：籼稻花药培养转基因水稻生物检测二化螟
- cp基因的修饰引起转基因的沉默及其介导的PVX抗性被引量：8
- 2003年
- 将马铃薯X病毒(potato virus X,PVX)外壳蛋白(coat protein,CP)基因(cp)编码序列中植物偏爱密码子替换成稀有同义密码子,并将此修饰的外壳蛋白基因(cpm)及未修饰外壳蛋白基因(cp)分别置于CaMV 35S启动子后,构建植物表达载体,并用农杆菌介导转化烟草。Northern杂交及Run on实验结果表明,转cpm基因烟草比转cp基因烟草发生转录后基因沉默(PTGS)的频率明显增高(从6.25％增至35％),并且对人工接种的PVX病毒抗性显著提高。以上结果表明,基因中密码子的替换可以明显提高转基因植株的病毒抗性。
- 冯德江刘翔孟昆廖立力魏晓丽徐鸿林朱祯
- 关键词：CP基因马铃薯X病毒外壳蛋白病毒抗性植物病毒
- DNA甲基化对转基因表达的影响被引量：16
- 2001年
- DNA甲基化在调节真核生物基因表达过程中起着十分重要的作用. 在植物转基因研究中, 外源DNA甲基化往往易导致外源目的基因失活. 利用农杆菌介导将?-葡糖醛酸酶基因(uidA)导入烟草, 发现外源uidA基因在部分转基因植株中发生了基因失活现象. Northern杂交实验证实, 基因失活的植株内检测不到外源uidA基因的转录产物, 同时伴随着基因上游启动子区域的DNA甲基化现象. 上述实验结果提示, 转基因失活很可能是由于启动子区域甲基化引起的.
- 李旭刚朱祯冯德江常团结刘翔
- 关键词：DNA甲基化基因失活基因工程基因表达植物分子生物学
- 水稻EPSP合酶基因的克隆、结构分析和定位被引量：6
- 2002年
- 5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸（EPSP）合酶是芳香族氨基酸合成途径中的一个关键酶,该基因在植物抗除草剂基因工程中具有重要的应用价值.根据水稻EPSP合酶基因的EST序列设计探针,在水稻TAC基因组文库中筛选到16个阳性克隆.对阳性克隆E11进行亚克隆,由此获得了由3661核苷酸组成的水稻EPSP合酶基因全序列.序列分析和同源性比较揭示,该基因由8个外显子和7个内含子组成.以窄叶青8号/京系17组合构建的DH群体和分子图谱将水稻EPSP合酶基因定位于水稻第6条染色体的上端.
- 徐军望冯德江李旭刚常团结朱祯
- 关键词：EPSP合酶基因分离DNA序列染色体定位
