魏晓丽
- 作品数：27 被引量：170H指数：8
- 供职机构：中国科学院遗传与发育生物学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程医药卫生更多>>
- 转基因水稻潮霉素标记基因PCR检测方法的建立及其在基因水平转移研究中的应用被引量：3
- 2006年
- 为建立用于基因水平转移研究,尤其是DNA经加工和消化后稳定性研究的针对转基因水稻潮霉素标记基因hpt(hygromycinphos photransferase)的定性和实时定量PCR体系,设计针对hpt的上游通用引物多个片段定性PCR扩增体系,以植物叶绿体基因rbcl为内对照,PCR扩增产物经测序验证。将定性PCR中最小片段(236bp)连接到质粒载体pUC18pMDT载体上,提取质粒经验证后做外标。应用TaqMan—MGB荧光探针和引物,建立定量的外标校正曲线法,并评价方法的精密度。建立的定性PCR体系能稳定扩增出236bp～910bp不同大小的5个hpt片段,并经测序验证。实时定量PCR的线性范围为105～10拷贝(R2=0.998),最低能检出10拷贝,重复性好。本研究已成功建立了用于转基因水稻标记基因hpt基因水平转移研究的定性和定量PCR系统。
- 沈立明吴永宁周萍萍张建中魏晓丽
- 关键词：基因基因水平转移聚合酶链反应
- 新的水稻谷蛋白α-1亚基缺失突变体(英文)被引量：4
- 2001年
- 从水稻受精卵ＭＮＵ处理后代中获得４个谷蛋白α－１亚基缺失突变品系。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＩＥＦ分析表明这些突变体在共同缺失１条ｐＩ６．８２多肽的同时，或形成新的多肽，或其他多肽表现量增加，这些突变体是由结构基因控制的。ＩＥＦ分析同时显示２条多肽ＰＩ６．８２和ＰＩ８．５８源自同一条谷蛋白前驱体。这４个突变体对于改良水稻谷蛋白品质、研究谷蛋白生物合成遗传调控机制以及揭示谷蛋白基因功能是不可多得的研究材料。
- 曲乐庆魏晓丽佐藤光熊丸敏博小川雅广贾旭
- 关键词：水稻等电聚焦电泳
- 一种优化的获得无选择标记转基因植物的化学诱导删除表达载体及其应用
- 本发明公开了一种获得无选择标记转基因植物的化学诱导删除表达载体及其应用。本发明创造性的将其载体系统中整个诱导删除系统和选择标记基因表达框置于两个loxP/FRT删除位点之间；同时在删除位点外还引入了两个同向排列的MAR序...
- 朱祯刘哲铭戴艳张磊魏晓丽
- 文献传递
- 大白菜转修饰豇豆胰蛋白酶抑制剂基因获得抗虫植株被引量：43
- 2002年
- 以大白菜 3d苗龄带柄子叶为外植体 ,经根癌农杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens)介导 ,将修饰的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 (sck)导入大白菜自交系‘GP 1 1’和杂交种‘中白 4号’ ,并获得了卡那霉素抗性植株。PCR检测和Southernblot杂交证实 ,sck基因已整合进大白菜基因组中 ;豇豆胰蛋白酶抑制剂活性检测表明 ,大部分转基因植株都对牛胰蛋白酶有一定的抑制活性 ,对照未转化植株抑制活性很低。室内离体叶片饲虫和田间自然抗虫性鉴定进一步证明 ,转基因植株对菜青虫 (PierisrapaeL.)具有一定抗性。
- 杨广东朱祯李燕娥朱祝军肖桂芳魏晓丽
- 关键词：大白菜豇豆胰蛋白酶抑制剂根癌农杆菌
- 利用双T-DNA载体系统培育无选择标记转基因烟草(英文)被引量：8
- 2003年
- 建立了一种利用双T-DNA载体培育无选择标记转基因植物的方法.通过体外重组构建了双T-DNA双元载体pDLBRBbarm.载体中,选择标记nptⅡ基因和另一代表外源基因的bar基因分别位于2个独立的T-DNA.利用农杆菌介导转化烟草(Nicotiana tabacum L.),在获得的转化植株中,同时整合有nptⅡ基因和bar基因的频率为59.2%.对4个同时整合有nptⅡ和bar基因植株自交获得的T1代株系进行检测分析,发现在3个T1代株系2个T-DNA可以发生分离,其中约19.5%的转基因T1代植株中只存在bar基因而不带选择标记nptⅡ.这一结果说明双T-DNA载体系统能有效地用于培育无选择标记的转基因植物.研究还利用位于2个不同载体上的nptⅡ基因与 bar基因通过农杆菌介导共转化烟草,获得共转化植株的频率为20.0%～47.4%,低于使用双T-DNA转化的共转化频率.
- 周红艳周红艳陈松彪李旭刚肖桂芳魏晓丽
- 关键词：转基因烟草无选择标记农杆菌介导
- 不同加工条件下转基因大米潮霉素标记基因(hpt)稳定性研究被引量：14
- 2006年
- 目的从DNA稳定性的角度,探讨转基因大米潮霉素标记基因hpt向食品或消化道微生物转移发生水平转移的可能性。方法利用针对hpt不同大小片段的PCR扩增体系,对hpt在转基因大米加工食品中的稳定性进行研究。结果建立的PCR体系能稳定扩增出hpt236bp-910bp不同大小的5个片段。利用这一PCR体系对s86转基因大米不同加工食品的检测显示,加工米饭、粥大于500bp的片段已降解,爆米花和锅巴大于236bp的hpt片段已降解。对照M86大米加工米饭和粥仅能扩出植物叶绿体基因rbcl片段,爆米花、锅巴及空白对照所有扩增均为阴性。结论hpt在转基因大米加工食品中均已不同程度的发生了降解,不同加工方式对hpt片段降解影响显著,在加工后hpt以较大或完整片段向食品或消化道微生物转移的可能性减小。
- 沈立明吴永宁张建中周萍萍魏晓丽朱祯
- 关键词：转基因大米DNA降解食品加工基因水平转移
- 有效去除农杆菌和籼稻转化系统优化被引量：19
- 2003年
- 为了提高根农杆菌籼稻转化效率 ,将修饰的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因sck和潮霉素磷酸转移酶基因hpt分别置于紧密相连的 2个T -DNA上 ,构建载体 pCDMARUSCK -HPT ,电激法将表达载体转化农杆菌LBA4 40 4获得工程菌。比较了提门叮和国产噻孢霉素对工程菌LBA4 40 4的抑制效果 ,试验得出提门叮在 5 0 0mg/L以内比噻孢霉素能更有效地去除水稻细胞中的农杆菌 ,而且低浓度条件下 (2 5 0mg/L)就能有效地抑制工程菌LBA4 40 4 ,并且有利于水稻转化细胞成功地再生植株。确立了工程菌LBA4 40 4菌液浓度OD值 0 8,浸染时间 5min为明恢 86合适的转化参数。在此基础上 ,采用优化的农杆菌介导法转化杂交籼稻优良恢复系明恢 86 ,获得转基因植株 12 7个克隆 ,转化效率 4 5 %。
- 曾千春李旭刚马炳田陈松彪徐鸿林孟昆魏晓丽朱祯
- 关键词：籼稻农杆菌介导豇豆胰蛋白酶抑制剂基因
- 水稻EPSP合酶第一内含子增强外源基因的表达被引量：14
- 2003年
- 分离并克隆了水稻5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合酶基因的第一内含子(EPI)。序列分析表明,EPI长704bp,GC含量为36.2％。为进一步研究EPI序列在转基因植物中对外源基因表达水平的影响,将EPI序列插入CaMV35S启动子和报导基因β-葡糖醛酸酶(β-glucuronidase,GUS)基因(gus)之间。采用基因枪法转化烟草叶片,gus基因瞬时表达表明,EPI序列的存在可以使GUS的表达水平提高。利用农杆菌法转化烟草,获得了gus基因稳定表达的植株。GUS活性检测表明EPI内含子的存在可以显著提高GUS基因的表达(P<0.01)。Northern blot分析表明,在转录水平上gus基因在含EPI内含子的转基因植株中的表达高于不含EPIgus基因的表达,并且成熟的gus mRNA中EPI被正确剪取掉了,表明是一种非转译的内含子。GUS定量检测表明,EPI存在可以使GUS的平均表达水平提高3倍,最高单株可提高6倍。
- 徐军望冯德江宋贵生魏晓丽陈蕾伍晓丽李旭刚朱祯
- 关键词：水稻EPSP合酶第一内含子
- 表达抑制昆虫保幼激素甲基转移酶基因的dsRNA的重组杆状病毒
- 本发明公开了一种表达抑制昆虫保幼激素甲基转移酶基因（HaJHAMT基因）的dsRNA的重组杆状病毒及其在制备杀虫剂中的应用。本发明提供了一种RNA分子，为如下（a）或（b）：（a）序列表的序列7所示的RNA分子；（b）与...
- 朱祯王晓芳戴艳魏晓丽张磊
- 文献传递
- 昆虫促前胸腺激素基因及其在植物抗虫方面的应用
- 本发明公开了一种昆虫促前胸腺激素基因在植物抗虫方面的应用。本发明提供了一种用于表达可以抑制昆虫促前胸腺激素的发卡RNA的DNA分子。本发明所提供的DNA分子的结构为SEQ<Sub>正向</Sub>‑X‑SEQ<Sub>反...
- 朱祯王晓芳魏晓丽戴艳
- 文献传递
