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结肠弯曲菌Real-time PCR检测方法的建立被引量：8: 2012年; 目的建立结肠弯曲菌实时PCR检测方法并评价该方法的可行性。方法BLAST与Vector NTI Suite 6.0筛选出结肠弯曲菌的特异基因ceuE作为检测靶基因,Primer 5.0和Oligo6.0设计引物和探针,优化实时PCR反应体系并评价其最低检测限、特异性、可重复性。结果与结论在结肠弯曲菌的ceuE特异基因上设计引物和探针,经优化了的实时PCR反应体系最低检测限为5.62CFU,特异度为100%,变异系数为0.15%～1.30%,本研究为结肠弯曲菌的快速检测提供了一种参考方法。; 乔博许学斌顾一心刘国栋赵飞何利华张建中张茂俊; 关键词：实时PCR

标本运输状态对幽门螺杆菌检出率的影响被引量：8: 2011年; 目的比较胃黏膜标本运输状态对幽门螺杆菌（Hp）检出率的影响,为Hp分离前胃黏膜标本的保存、运输方法的选择提供科学依据。方法随机抽取快速尿素酶检测阳性胃黏膜标本72份,分别保存于含有20%甘油的脑心浸液中。根据标本到达实验室的状态分为3组：完全溶解液体状态组（20份）,部分冻融状态组（32份）和冰冻状态组（20份）。所有标本都来源于13C呼气试验（13C UBT）阳性患者。标本经研磨后接种于哥伦比亚和Karmali 5%脱纤维羊血琼脂培养基,置37℃微需氧环境（5.0%O2,10.0%CO2,85.0%N2）培养3~11 d。挑取单菌落,进行革兰染色检查及生化和PCR鉴定,比较3组标本Hp检出率差异。结果冰冻状态组标本Hp检出率95.0%（19/20）,完全溶解液体状态组Hp检出率为15.0%（3/20）,部分溶解状态组Hp检出阳性率59.4%（19/32）,三组Hp检出率差异有统计学意义（P〈0.05）。结论冻融胃黏膜标本Hp检出率显著降低。; 何利华刘国栋李芳乔博张建中; 关键词：胃黏膜标本冻融幽门螺杆菌检出率

检测结肠弯曲菌的引物、探针及方法和试剂盒: 本发明提供了用于检测结肠弯曲菌的实时荧光定量PCR引物和探针，其序列分别如SEQ ID NO2，SEQ ID NO3和SEQ ID NO4所示。本发明还提供了使用上述引物和探针进行荧光定量PCR检测结肠弯曲菌的方法及其检...; 张茂俊张建中乔博顾一心何利华; 文献传递

检测结肠弯曲菌的引物、探针及方法和试剂盒: 本发明提供了用于检测结肠弯曲菌的实时荧光定量PCR引物和探针，其序列分别如SEQ ID NO2，SEQ ID NO3和SEQ ID NO4所示。本发明还提供了使用上述引物和探针进行荧光定量PCR检测结肠弯曲菌的方法及其检...; 张茂俊张建中乔博顾一心何利华

幽门螺杆菌作用后AGS细胞内钙离子的动态变化研究被引量：2: 2010年; 背景幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染与胃癌发生密切相关,但致病机制尚未清晰。细胞毒素相关蛋白A(CagA)是Ⅰ型Hp的主要毒力因子,在Hp诱导的疾病特别是胃癌的发展中起重要作用。前期的研究发现,Hp作用后人胃腺癌上皮细胞(AGS)的钙离子相关蛋白钙网织蛋白CRT以及钙离子结合蛋白CALNUC磷酸化程度发生改变,提示Hp可能会影响AGS细胞的钙稳态,通过钙离子通路影响细胞的增殖或凋亡。目的研究Hp作用于人胃腺癌上皮细胞后,AGS细胞内钙离子的时序性变化,以及CagA对AGS细胞内钙离子的影响,进一步揭示Hp的致病机制。方法采用钙离子荧光标记示踪法,AGS细胞以Fluo-3/AM荧光指示剂负载,特异性地活体标记AGS内的钙离子,采用激光共聚焦显微镜观察分析Hp26695及其CagA缺失株(Hp26695△CagA)分别作用于AGS细胞1h、2h、3h、4h、5h、6h后,AGS细胞内钙离子的变化情况。结果幽门螺杆菌与AGS细胞相互作用1h,胞内Ca2+部分流失,5h胞内Ca2+大量流失。1～6h内,Hp26695与Hp26695△CagA作用的AGS细胞荧光强度没有显著差异。结论Hp作用会导致AGS细胞内Ca2+剥夺,且与CagA的存在无明显关联性。; 肖迪陶晓霞孟凡亮王海滨乔博何利华李培京张建中; 关键词：幽门螺杆菌荧光标记

检测空肠弯曲菌的引物、探针及方法和试剂盒: 本发明提供了用于检测空肠弯曲菌的实时荧光定量PCR引物和探针以及使用其进行定量检测的方法，引物和探针的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.2，SEQ ID NO.3，SEQ ID NO.4。本发明还提供了检测空肠弯曲菌的...; 张茂俊张建中乔博何利华顾一心; 文献传递

检测空肠弯曲菌的引物、探针及方法和试剂盒: 本发明提供了用于检测空肠弯曲菌的实时荧光定量PCR引物和探针以及使用其进行定量检测的方法，引物和探针的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.2，SEQ ID NO.3，SEQ ID NO.4。本发明还提供了检测空肠弯曲菌的...; 张茂俊张建中乔博何利华顾一心

空肠弯曲菌外膜蛋白rOMP18的克隆表达及抗原性分析被引量：2: 2011年; 目的构建空肠弯曲菌omp18基因的重组表达质粒、克隆表达rOMP18重组蛋白、对表达产物进行鉴定并评价其抗原性。方法 PCR扩增空肠弯曲菌的omp18基因片段,将其连接到表达载体pET32a(+)中并转化至大肠杆菌(E.co-liBL21(DE3)),诱导表达后SDS-PAGE分析其表达产物并纯化目的蛋白。应用空肠弯曲菌感染免疫血清,利用Western-blot方法分析其抗原性。结果与结论单、双酶鉴定结果显示已成功构建rOMP18的重组表达载体pET32a-omp18,IPTG诱导表达产物的相对分子质量与理论相符34kD(HIS16kD)。Western-blot检测结果表明重组蛋白rOMP18具有抗原性,为空肠弯曲菌感染的特异抗体的检测提供候选抗原。; 乔博孟凡亮顾一心何利华张姝肖迪刘国栋曹芳芳张建中张茂俊; 关键词：空肠弯曲菌克隆抗原性

荧光定量PCR方法在空肠弯曲菌检测中的应用: 2010年; 空肠弯曲菌是引起人类食源性疾病的主要病原菌之一。快速、特异检测方法的建立对于该病原菌感染的诊断及鉴别诊断具有重要意义。荧光定量PCR方法作为一种快速诊断方法已经广泛应用于空肠弯曲菌的检测及鉴定。本文从荧光定量PCR方法在空肠弯曲菌病原检测中的建立、发展以及应用等方面进行综述。; 乔博张茂俊; 关键词：空肠弯曲菌荧光定量PCR

空肠弯曲菌AhpC蛋白的克隆表达及抗原性分析被引量：1: 2011年; 目的构建空肠弯曲菌烷基过氧化氢还原酶(ahpC)基因的原核表达系统,克隆表达AhpC蛋白,用Western blot以及ELISA方法检测表达蛋白的抗原性,为筛选空肠弯曲菌感染后特异性抗体检测试剂的制备奠定基础。方法用PCR方法从中国分离菌株ICDCCJ07001的染色体DNA中扩增出ahpC基因,将目的基因插入表达载体pGEX-4T-1后转化入大肠杆菌E.coliBL21(DE3),IPTG诱导重组质粒pGEX-ahpC的表达。SDS-PAGE分析表达产物,采用GST标签亲和层析柱纯化表达蛋白。应用兔免疫血清、临床感染者血清以及健康无感染者血清,利用Western blot以及ELISA的方法分析AhpC蛋白的抗原性并初步评价其在ELISA检测方法中的应用。结果 PCR扩增及双酶切鉴定证实重组质粒构建成功。重组表达蛋白经飞行质谱鉴定为空肠弯曲菌AhpC蛋白,Western blot及ELISA检测结果显示AhpC具有特异抗原性。结论成功构建了ahpC重组表达载体pGEX-4T-1/ahpC,并在大肠杆菌中高效表达。空肠弯曲菌AhpC蛋白具有抗原性,可以作为空肠弯曲菌感染后血清抗体检测的特异抗原。; 曹芳芳孟凡亮乔博张茂俊张建中; 关键词：空肠弯曲菌克隆表达 AHPC 抗原性

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