马磊
- 作品数：4 被引量：15H指数：2
- 供职机构：中国人民解放军总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 中国人常见GJB2基因突变表达载体的构建及鉴定被引量：6
- 2009年
- 目的:构建中国人常见GJB2基因突变235de1C、299-300delAT和176de116bp与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的融合蛋白表达载体,寻找体外研究GJB2基因缺失突变致聋机制的有效途径。方法:用体外定点突变法构建235de1C、299-300delAT和176de116bp突变全序列与EGFP表达载体,以此为模板PCR扩增突变有效表达序列,将PCR产物连接到pMD19-T载体中,EcoRI/BamHI双酶切克隆载体,测序鉴定序列正确性后,将酶切产物插入pEGFP-N1载体中,脂质体转染HEK293细胞,荧光显微镜观察表达的融合蛋白。结果:GJB2基因突变235de1C、299-300delAT和176de116bp在HEK293细胞中高效表达,表达主要位于细胞质中。结论:成功构建了中国人常见GJB2基因突变235de1C、299-300delAT和176de116bp与EGFP的融合蛋白表达载体,为进一步研究其致聋机制奠定了基础。
- 张延平张元丁李丽娜马磊孙玉蕊张宗霖刘金伟邓惠严祝威
- 关键词：突变绿色荧光蛋白
- 慢性咽炎患者咽分泌物中幽门螺杆菌的超高倍显微镜检测结果被引量：9
- 2009年
- 目的探讨超高倍显微镜检测慢性咽炎患者咽部分泌物中幽门螺杆菌(HP)的分布情况。方法对慢性咽炎患者295例和正常对照30例,采用咽拭子均匀涂片,超高倍显微镜下观察,放大20 000倍,根据观察需要选择暗视野相差视野进行活体观察,由一名专业人员进行结果判定。卡方检验评价两组HP阳性率的差异。结果慢性咽炎患者中229例咽部分泌物中检测到幽门螺旋杆菌(77.63%,229/295),66例未发现HP(22.37%,66/295);正常对照组中,30例咽部分泌物中2例检测到幽门螺旋杆菌(6.67%,2/30),其余28例(93.33%,28/30)幽门螺旋杆菌阴性,经卡方检验χ2=6.670,P<0.05。结论幽门螺旋菌可能是慢性咽炎患者咽部一种被忽视的致病菌,超高倍显微镜有可能成为筛查咽部分泌物中幽门螺旋菌的一种新方法,幽门螺旋菌感染与喉咽反流的关系还需要进行进一步研究证实。
- 李丽娜张延平刘金伟马磊张宗霖邓惠严罗晓培王亚英周凤书
- 关键词：显微镜幽门螺旋杆菌咽炎
- 中国人常见GJB2基因突变片段TA克隆载体构建
- 2009年
- 目的应用TA克隆技术构建含中国人常见GJB2基因突变片段的载体，为构建突变绿色荧光蛋白融合载体提供基础。方法首先利用定点诱变法在体外构建235delC．299-300delAT和176del16bp绿色荧光蛋白非融合载体，以此为模板利用PCR扩增突变基因片段，然后将PCR扩增产物克隆到TA载体上，用限制性内切酶法和测序法鉴定重组质粒序列正确性。结果用限制性内切酶法和测序方法证实扩增片段为目的片段。结论成功地构建了235delC、299-300delAT和176del16bp突变基因片段TA克隆载体，为构建突变绿色荧光蛋白融合载体、进一步研究突变致聋机制奠定了基础。
- 张元丁张延平李丽娜马磊孙玉蕊张宗霖刘金伟邓惠严祝威
- 关键词：突变
- 中国人常见非综合征性聋杂合子发病机制的实验研究
- 2009年
- 目的构建人野生型CX30红色荧光表达载体，将Cx26野生型和突变型分别与CX30共同转染HEK293细胞，为揭示Cx26--235delC的杂合突变患者的发病机制提供实验依据。方法构建pCx30--IREs2-DsRed—Express真核表达载体，将pcx30—IREs2-DsRed—ExPress分别与pCx26--EGFP或pCx26--235deIC--EGFP以1：1的比例用脂质体法转染HEK293细胞，转染48h后在激光共聚焦显微镜下观察结果，计算同时表达红色和绿色的细胞阳性率，卡方检验比较两组阳性率的差异。结果pCx30--IRES2--DsRed--Express与pCx26--EGFP共同转染HEK293细胞后，同时出现红色和绿色荧光的细胞占全部转染阳性细胞的27．32％（91／333）。pCx30—IRES2--DsRed--Express与pCx26--c235deIC--EGFP共同转染HEK293细胞后，同时表达红色与绿色信号的细胞占全部阳性细胞的2．19％（4／183），明显低于两种野生型质粒共同转染的阳性率，经卡方检验两者差异具有显著性意义（x2=52．89，P〈0．01）。结论Cx26发生C．235deIC突变后，丧失了与野生型Cx30形成异型性缝隙连掇gapjunctions，GJs）的能力，使异型性GJs的总数显著下降，导致耳蜗失去了重要的细胞间联系通道，推测可能与部分c．235delC杂合子耳聋的发生有关。
- 张延平李丽娜张宗霖孙玉蕊马磊王戈佟明望毕欣欣
- 关键词：突变杂合子耳聋
