陈为一
- 作品数：6 被引量：22H指数：3
- 供职机构：潍坊医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山东省优秀中青年科学家科研奖励基金山东省高等学校科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- BMK1表达对胶质瘤细胞U87侵袭能力影响机制探讨被引量：1
- 2014年
- 目的探讨大丝裂原活化蛋白激酶1(big mitogen-activated protein kinase 1,BMK1)表达对U87细胞侵袭能力的影响及作用机制。方法应用siRNA干扰技术转染U87细胞株,并采用蛋白质印迹法检测U87细胞中BMK1表达及转染后BMK1表达情况。体外癌细胞侵袭实验检测U87细胞转染后侵袭能力变化。BMK1下降后,蛋白质印迹法检测间叶细胞特异性标记蛋白N-cadherin、T-cadherin、Vimentin和转录因子Snail、Slug、Twist1、Zeb1的表达。结果蛋白质印迹法检测结果显示,U87细胞中BMK1相对表达量为1.0±0.21,SCR/U87细胞中BMK1相对表达量为1.1±0.18,SiBMK1/U细胞中BMK1相对表达量为0.45±0.12,差异有统计学意义,F=12.129,P=0.008。体外癌细胞侵袭实验显示,SiBMK1/U87实验组穿透Matrigel膜基质的细胞数为106±18,SCR/U87对照组为61±15,U87对照组为62±14,差异有统计学意义,F=7.977,P=0.020;U87对照组与SCR/U87对照组差异无统计学意义,P=0.941;而SiBMK1/U87实验组穿透基膜的细胞数明显多于U87对照组(P=0.014)和SCR/U87对照组(P=0.013),差异有统计学意义。蛋白质印迹法结果显示,SCR/U87和SiBMK1/U87细胞中N-cadherin相对表达量分别为1.0±0.13和3.8±0.31,t=-14.427,P<0.001;Vimentin相对表达量分别为1.5±0.16和3.9±0.22,t=-15.281,P<0.001;T-cadherin相对表达量分别为4.5±0.12和1.3±0.14,t=30.059,P<0.001。SCR/U87和SiBMK1/U87细胞中Twist1蛋白相对表达量分别为0.75±0.14和2.3±0.22,t=-10.295,P=0.001,差异有统计学意义。表明BMK1表达影响Twist1的表达。结论 BMK1与U87细胞侵袭性显著相关,其侵袭性的调控是通过间叶转化(mesenchymal transition,MT)实现的。
- 齐岳亮陈为一李小龙陈萍萍李洪利刘晓丽张宝刚
- 关键词：U87细胞SIRNA干扰
- 靶向阻断Snail逆转非小细胞肺癌多药耐药的研究被引量：4
- 2014年
- 目的:探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)上皮-间质转化(epithelialmesenchymal transition,EMT)与多药耐药(multidrug resistance,MDR)基因的相互关系,为临床肺癌治疗提供实验和理论依据。方法:采用免疫组织化学SP法检测52例肺癌组织中Snail、P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、肺耐药蛋白(lung resistance p rotein,LRP)的表达并分析它们的相关性。用RNA干扰技术稳定敲除肺腺癌细胞系A549中的Snail,采用Western blot法检测稳定转染后Snail蛋白的表达情况。Snail下降后,Western blot法检测P-gp、LRP蛋白表达情况。结果:Snail、P-gp、LRP在NSCLC组织中的表达率分别是73.1%、53.8%、51.9%,P-gp及LRP的蛋白表达与Snail的表达呈正相关。采用RNA干扰的方法成功敲除肺腺癌细胞系A549中Snail基因;A549细胞中Snail基因被敲除后耐药相关蛋白P-gp和LRP的表达明显降低。结论:在NSCLC中,Snail蛋白的表达与耐药相关基因的表达呈正相关;阻断肺癌细胞系A549细胞中的Snail能有效逆转肺癌的多药耐药特性。
- 张丽娜刘菲孙磊田慧玲陈为一李洪利张宝刚尹崇高郭文君
- 关键词：SNAIL上皮一间质转化LRP
- PTTG1影响胶质瘤细胞侵袭力机制的研究被引量：7
- 2014年
- 背景与目的:研究证实垂体肿瘤转化基因1(pituitary tumor transforming gene 1,PTTG1)的表达情况与各类肿瘤细胞的恶性程度有关,但是其在胶质瘤中的作用尚不清楚。本研究旨在探讨PTTG1在恶性胶质瘤侵袭中的作用及其临床意义。方法:应用蛋白质印迹法(Western blot)检测PTTG1蛋白在不同胶质瘤细胞系中的表达;采用小RNA质粒干扰技术抑制U87细胞中PTTG1蛋白的表达,应用Western blot技术检测转染的效率;通过体外侵袭实验检测转染后细胞侵袭力的变化;采用Western blot技术检测经过表皮细胞生长因子(epithelial growth factor,EGF)刺激后敲除PTTG1的细胞组(siPTTG1/U87)与转染空载的细胞组(Scr/U87)中Akt、ARK5磷酸化的情况。结果:PTTG1蛋白在各恶性胶质瘤细胞系中均高表达;敲除PTTG1后U87细胞的侵袭力明显下降;对Scr/U87细胞进行EGF刺激5 min后,Akt、ARK5的磷酸化情况显著增强,而无论有无EGF的刺激,siPTTG1/U87中Akt、ARK5的磷酸化情况都没有明显改变。结论:在恶性胶质瘤细胞中,PTTG1蛋白呈高表达状态并且与侵袭性显著相关,其对侵袭性的调控可能是通过Akt-ARK5通路实现的。
- 陈为一李小龙齐岳亮李洪利尹崇高刘晓丽张宝刚郭文君
- 关键词：胶质瘤SIRNA
- 下调Raptor表达对乳腺癌细胞侵袭能力影响及其机制探讨被引量：2
- 2014年
- 目的研究Raptor对乳腺癌细胞侵袭能力的作用及其机制。方法采用小RNA干扰技术,向MDA-MB-231细胞转染Raptor小RNA干扰质粒,并通过蛋白质印迹法检测转染细胞Raptor的表达水平以鉴定转染效果。癌细胞体外侵袭实验观察使用RNAi降低Raptor表达后MDA-MB-231细胞侵袭能力的变化。再进行蛋白质印迹实验检测细胞中ARK5的磷酸化情况和基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)与基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达。收集潍坊医学院附属医院病理科2008-01-15-2012-12-31 52例乳腺癌和8例癌旁组织,使用免疫组织化学染色检测Raptor的表达水平。结果转染成功的SiRaptor/MDA-MB-231细胞Raptor蛋白条带灰度值为529.22±81.58,明显低于MDA-MB-231组的1 345.63±215.05(F=37.799,P=0.004)和SCR/MDA-MB-231组的1 349.15±85.13,F=145.082,P<0.001。体外侵袭实验发现,实验组穿透Matrivgel基质膜的细胞数为40.00±3.61,少于对照组细胞的82.33±10.50,t=6.602,P=0.003。EGF刺激后实验组细胞中ARK5蛋白的磷酸化水平为224.72±30.14,较对照组(852.46±88.93)低,F=134.083,P<0.001;MMP-2蛋白的表达为604.32±177.06,较对照组(1 051.72±116.54)低,F=13.365,P=0.022;MMP-9蛋白的表达为347.85±84.80,较对照组(924.46±108.61)低,F=52.535,P=0.002。乳腺癌组织Raptor的表达与淋巴结转移存在相关性,χ2=9.094,P<0.001。结论 Raptor可能通过磷酸化ARK5以增加MMP-2和MMP-9的表达,从而与乳腺癌细胞的侵袭相关。
- 李小龙齐岳亮陈为一孙磊田红艳张宝刚刘雨清
- 关键词：RAPTOR乳腺肿瘤雷帕霉素靶蛋白
- PTTG1影响胶质瘤细胞侵袭力机制的研究
- 目的:神经胶质细胞瘤是一种预示着不良预后的实体肿瘤。这种不良的预后由早期诊断的困难性和胶质瘤的高侵袭性导致。PTTG1被认为与肿瘤细胞的恶性程度和不良预后有关。但是,PTTG1是否与胶质瘤的高侵袭性有关尚未见报道。本研究...
- 陈为一
- 关键词：胶质瘤PTTG1SIRNA
- 文献传递
- Gab2在人骨肉瘤细胞U2-OS中的表达及意义被引量：8
- 2015年
- 目的:探讨Grb2协同结合蛋白2(Gab2)在人骨肉瘤细胞系中的表达及其与人骨肉瘤细胞侵袭转移的关系。方法:应用小RNA干扰技术,将合成的小RNA干扰质粒转染给人骨肉瘤U2-OS细胞,采用Western blotting和RT-PCR法检测转染后Gab2的蛋白和mRNA表达水平;体外细胞趋化运动实验和侵袭实验检测细胞的迁移和侵袭能力。结果:Gab2在人骨肉瘤U2-OS细胞系中高表达,且转染Gab2 siRNA后的细胞(Si Gab2/U2-OS)中Gab2蛋白及mRNA的表达水平低于转染scramble siRNA细胞(Scr/U2-OS)和U2-OS;趋化运动实验发现在10μg/L表皮生长因子(EGF)的诱导下Si Gab2/U2-OS细胞的迁移能力较U2-OS和Scr/U2-OS细胞明显下降,差异有统计学意义(P<0.01);Si Gab2/U2-OS细胞侵袭并穿透Matrigel膜基质的细胞数量均比Scr/U2-OS细胞和U2-OS细胞少,Si Gab2/U2-OS细胞的体外侵袭能力显著降低(P<0.01)。结论:利用siRNA干扰技术降低Gab2的表达对人骨肉瘤U2-OS细胞的迁移和侵袭能力有明显的抑制作用。
- 平勇邸平山李卫兵李凤梅陈为一陈萍萍
- 关键词：小干扰RNA细胞侵袭
