范志强
- 作品数：10 被引量：20H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院军事兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- Tn5转座子介导表达猪瘟E2蛋白和EGFP重组伪狂犬病毒的构建被引量：2
- 2011年
- 为构建猪瘟重组伪狂犬疫苗,以Tn5转座子为介导,采用体外转座的方法将猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)E2基因和增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluoresce protein,EGFP)的表达盒随机插入伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)基因组中,随后将转座产物转染BHK-21细胞,获得表达E2蛋白和EGFP的病毒库,并对E2蛋白和EGFP在细胞上的表达效果进行PCR鉴定和间接免疫荧光分析。试验结果表明,运用体外转座的方法可以将外源基因插入PRV基因组中,并且外源基因可以在细胞中表达。本研究为重组病毒的研究提供了新思路,并为新型重组猪瘟疫苗的研制进一步奠定了基础。
- 高博范志强韩乃君张念张锦霞王颖白安斌黄红梅扈荣良吴健敏
- 关键词：猪瘟病毒E2基因伪狂犬病毒
- 利用转座子构建病毒活载体重组疫苗的方法
- 本发明公开了一种利用转座子构建病毒活载体重组疫苗的方法，以绿色荧光蛋白为报告基因、分别构建表达狂犬病病毒糖蛋白和猪瘟E2蛋白基因的表达盒，并克隆至转座子穿梭载体，在转座酶的介导作用下，分别与提纯的犬2型腺病毒和疱疹病毒I...
- 扈荣良刘晔范志强张菲张守峰
- 文献传递
- 蚓激酶基因在山羊乳腺中的瞬时表达被引量：4
- 2005年
- 构建了包括山羊β-酪蛋白基因启动子和蚓激酶基因cDNA的乳腺表达载体pβLK.通过直接注射将重组载体DNA导入山羊的乳腺组织,以纤维蛋白平板法测定乳汁中蚓激酶基因表达产物的活性.实验证实蚓激酶基因可以在山羊乳腺中瞬时表达.在进行山羊乳腺的瞬时表达时,适宜的注射剂量为500μg/ml.注射后6～9 h的表达量最高,达到2.0×105U/L,并持续表达至60h.
- 范志强姚汝强张守峰王太一王禄增扈荣良
- 蚓激酶重组逆转录病毒载体pLN-BCP-LK^R的构建及其在山羊乳腺组织中的表达被引量：3
- 2005年
- 目的在山羊奶中表达蚓激酶。方法将含有蚓激酶基因的表达盒插入到逆转录病毒载体pLNCL中获得了蚓激酶重组逆转录病毒载体,转染泌乳期奶山羊乳腺小叶并获得暂时表达。利用脂质体转染PA317包装细胞,G418进行筛选得到阳性细胞克隆,克隆扩大培养后病毒上清感染妊娠期奶山羊乳腺小叶组织,山羊产后采奶纤维蛋白平板溶圈法检测蚓激酶活性。结果产后奶样经纤维蛋白平板溶圈法检测羊奶具有明显纤溶活性。结论蚓激酶基因已经整合到奶山羊乳腺组织并能实现相对稳定的表达。
- 姚伟任文陟张守峰范志强扈荣良涂长春
- 关键词：蚓激酶重组逆转录病毒转染
- 利用转座子构建病毒活载体重组疫苗的方法
- 本发明公开了一种利用转座子构建病毒活载体重组疫苗的方法，以绿色荧光蛋白为报告基因、分别构建表达狂犬病病毒糖蛋白和猪瘟E2蛋白基因的表达盒，并克隆至转座子穿梭载体，在转座酶的介导作用下，分别与提纯的犬2型腺病毒和疱疹病毒I...
- 扈荣良刘晔范志强张菲张守峰
- 蚓激酶基因的人工合成及山羊乳腺表达被引量：7
- 2004年
- 为了实现蚓激酶在真核细胞的高效稳定表达 ,人工合成了全长 849bp ,不含罕用密码子的蚓激酶F Ⅲ 1cDNA序列 ,并以其为目的基因 ,构建以山羊β 酪蛋白启动子为上游调控序列的乳腺组织特异性表达载体pBLK和重组逆转录病毒表达载体pLN bCP LK。质粒pBLK 40 0 μg直接注入稳定泌乳期奶山羊乳腺 ,以纤维蛋白平板溶圈法 (FAPA)检测奶样纤溶活性。结果显示 ,注射后 3～ 60h ,奶样有明显纤溶活性 ,其中 6～ 9h活性最高。脂质体介导质粒pLN bCP LK转染PA31 7细胞系 ,5 0 0mg LG41 8筛选后获得 4株高产毒细胞系 ,产毒滴度达 1× 1 0 4～ 1× 1 0 5CFU ml水平。产毒细胞上清 1 0ml直接注入临产前两周的山羊乳腺 ,隔日以等量再注 1次 ,产羔后其奶样即有明显纤溶活性 ,注后第
- 张守峰扈荣良范志强姚汝强梁慧颖涂长春
- 关键词：蚓激酶纤溶活性LN乳腺表达上游调控序列Β-酪蛋白
- 山羊痘病毒p32基因的克隆、表达及单克隆抗体制备被引量：4
- 2011年
- 本研究旨在表达山羊痘病毒p32蛋白、制备p32蛋白单克隆抗体。通过PCR克隆p32基因,连接到pMD18-T并测序;酶切、连接后将p32基因克隆到pET28a(+)中,将重组质粒转化大肠杆菌Rosseta,在IPTG诱导下成功表达p32蛋白;利用亲和层析法纯化p32蛋白,用纯化蛋白免疫BALB/c小鼠后制备p32蛋白单克隆抗体,获得22株识别重组蛋白的单抗,通过间接免疫荧光鉴定,其中3株能识别病毒的p32蛋白。山羊痘病毒p32蛋白的表达和单克隆抗体的制备为山羊痘病毒抗原、抗体检测提供了生物材料。
- 王永志苏颖米丽娟付云红范志强扈荣良赵玉民
- 关键词：山羊痘病毒P32基因单克隆抗体
- 利用泌乳乳腺鉴定真核基因表达的研究被引量：1
- 2005年
- 为了找到一种新的可用于基因及其表达调控元件鉴定的方法,本试验以蚓激酶(LK)作为目的标志基因,分别构建了在巨细胞病毒(CMV)立即早期启动子、逆转录病毒长末端重复序列(LTR)和beta-酪蛋白启动子调控下的三种真核表达载体pICLK、pLLKSN和pIbLK.制备各重组质粒后,以泌乳期羊乳腺作为支持系统,在处于稳定泌乳阶段分别注射400～800μg重组质粒于山羊乳腺组织中.在注射后不同时间采集奶汁,检测纤溶活性.结果显示,蚓激酶的不同重组质粒在注射到乳腺组织之后迅速得到表达,注射后6～9h蚓激酶表达量达到高峰,并可持续至72h以上;不同表达载体间表达量略有变化,但无显著差异.这些结果表明,利用泌乳乳腺组织表达真核蛋白是鉴定真核基因表达快速有效的手段之一.
- 周雪艳张守峰姚伟任文陟范志强扈荣良
- 关键词：真核基因基因表达蚓激酶
- 一种改进的显微注射用DNA片段的纯化方法
- 2006年
- 目的显微注射用DNA的纯度是影响转基因动物制备成功与否的重要因素,本文建立一种可行的适用于普通实验室的纯化DNA方法,替代普遍使用的试剂盒纯化方法。方法分别使用酚-氯仿多次抽提法及常规的凝胶提取试剂盒纯化含有蚓激酶基因的DNA片段,通过显微注射技术将纯化的DNA片段导入小鼠受精卵的原核,制备转基因小鼠。根据转基因实验的结果对两种方法进行比较。结果使用两种方法纯化DNA均能获得转基因小鼠。在DNA纯度及注射卵的存活率上,两种方法无明显差别;在移植卵的出生率及转基因阳性率上,抽提法优于试剂盒法。结论本实验建立的抽提方法可以替代试剂盒方法纯化显微注射用DNA片段,在降低实验成本、简化实验条件及提高转基因阳性率方面具有优势。
- 范志强扈荣良王太一王禄增姚汝强姚伟
- 关键词：DNA纯化方法显微注射转基因小鼠
- 蚓激酶基因在山羊乳腺中的表达及转基因小鼠的制备
- 蚓激酶(Lumbrokinase)是从蚯蚓中提取的具有纤溶和溶栓活性的多酶组分。1991年由Mihara等首次分离并命名。目前已有多种蚓激酶制剂，其商品名为普恩复、百奥、博洛克及溶栓胶囊等，主要用于缺血性脑病、冠心病和心...
- 范志强
- 关键词：蚓激酶重组逆转录病毒载体基因表达转基因小鼠
