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结核杆菌HSP65佐剂DNA疫苗对实验感染小鼠的预防作用: 21世纪结核病的预防与治疗性疫苗的研制工作依然迫在眉睫.热休克蛋白HSP65是结核感染时的一种重要优势抗原,为此我们构建了结核杆菌HSP65 DNA疫苗,并以IL-2和当归多糖(ASP)作为佐剂共同免疫小鼠,观察小鼠感染...; 居巍刘君炎肖凌刘胜武屈雪菊; 关键词：结核杆菌 DNA疫苗 HSP65 结核病; 文献传递

结核杆菌Hsp65与EGFP融合基因的构建及树突状细胞疫苗的制备: 研制开发有效的新型抗结核疫苗，是当前结核病研究的主要目标。树突状细胞/(DC/)表面具有高密度的抗原递呈分子和共刺激分子，能刺激初始型/(na/(?/)ve/)T细胞大量活化增殖。分枝杆菌Hsp65蛋白/(热休克蛋白/)...; 肖凌; 关键词：结核杆菌 HSP65 增强型绿色荧光蛋白树突状细胞; 文献传递网络资源链接

结核杆菌HSP65佐剂DNA疫苗的免疫保护效力: HSP65是结核感染时的一种主要优势抗原,我们构建了结核杆菌HSP65 DNA疫苗,并以IL—2和当归多糖(ASP)作为佐剂免疫小鼠,然后用结核杆菌进行攻击,观察小鼠的半数死亡时间与其肺、肝、脾的病理变化,肺脏的抗酸染色...; 居巍刘君炎肖凌刘胜武屈雪菊; 文献传递

结核杆菌Hsp65与EGFP融合基因的构建及DC疫苗的制备被引量：9: 2005年; 目的: 构建结核杆菌H37Rv株Hsp65与增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)的融合基因pEGHsp65, 并以其转染小鼠的树突状细胞 (DC), 制备抗结核的DC疫苗。方法: 采用PCR技术, 从培养的结核杆菌H37Rv株中抽提Hsp65基因,克隆到含有EGFP基因的质粒pEGFP- C1中, 构建pEGHsp65融合基因。以其转染Hela细胞, 在共聚焦激光扫描荧光显微镜下观测不同时间荧光表达的强弱, 并用RT- PCR检测Hsp65mRNA的表达。以pEGHsp65融合基因转染小鼠骨髓细胞经GM- CSF和IL -4诱导分化的DC, 用MTT比色法检测DC疫苗刺激未致敏脾细胞的增殖。结果: 用EcoRⅠ和BglⅡ双酶切鉴定证实, H37Rv株Hsp65DNA已插入重组表达载体pEG -FP- C1中。将融合基因转染入Hela细胞, 48h转染率最高;用RT- PCR在mRNA水平上可检测到Hsp65mRNA的表达。用MTT比色法检测表明, 融合基因转染的DC能激活并引起未致敏的脾细胞增殖。结论: 成功地构建pEGHsp65融合基因和以其制备的DC疫苗, 为进一步观察其治疗结核病的效应奠定了基础。; 肖凌魏雅稚夏飞刘胜武; 关键词：结核杆菌 HSP65 增强型绿色荧光蛋白树突状细胞

抗结核DC疫苗的初步研究: 2005年; 目的:研制抗结核的新型疫苗(DC疫苗)。方法:无菌分离C57BL/6小鼠骨髓细胞,以rGM-CSF及rIL-4诱导分化获得树突状细胞(DC),以pEGHsp65融合质粒转染DC,共聚焦激光扫描显微镜检测转染率,继以电镜鉴定细胞形态、流式细胞术分析组合性表面分子表达、混合淋巴细胞反应(MLR)检测体外刺激T细胞增殖的功能。将制备的DC疫苗静脉接种正常同系小鼠,分别取各脏器冰冻切片后荧光显微镜观察;取小鼠静脉血用ELISA法检测IL-12及IFN-γ的表达量。结果:24 h DC转染率约20%,电镜可见细胞呈典型毛刺状突起,流式细胞分析表明转染后的DC表面MHCⅡ、33D1的表达量均呈显著增高。MLR显示,pEGHsp65转染DC组与pEG-FP-C1转染DC组及空白DC组比较呈统计学增高。脏器冰冻切片显示,接种pEGHsp65转染DC小鼠组及pEG-FP-C1转染DC小鼠组与未转染DC组比较,在各脏器分布中,以脾脏分布显著增高。其余脏器分布无显著差别。pEGHsp65转染DC小鼠组IL-12及IFN-γ表达量显著高于pEGFP-C1转染DC小鼠组及未转染DC小鼠组,P<0.05,未转染DC组与阴性对照组相比,IL-12及IFN-γ表达量也有统计学增高,P<0.05。结论:pEGHsp65制备的DC疫苗具有成熟表型及功能,能够刺激小鼠IFN-γ及IL-12分泌增高。; 魏雅稚刘胜武夏飞肖凌; 关键词：树突状细胞疫苗结核杆菌

一种新型调控基因表达的反义寡核苷酸:LNA: 2003年; LNA(lockednucleicacid)是新近发现的一种新型调控基因表达的反义寡核甘酸 ,它以RNA为骨架 ,亚甲基键连接核糖环中的 2′ 氧和 4′ 碳。这种锁套式的结构。; 肖凌王明军刘胜武谭锦泉; 关键词：基因调控反义寡核苷酸 LNA 基因表达

结核分枝杆菌诱导宿主巨噬细胞凋亡机制初探被引量：7: 2005年; 目的探讨结核杆菌感染中巨噬细胞凋亡的信号传导通路及分子机理。方法用透射电镜、荧光染色对凋亡细胞的形态特征进行分析;琼脂糖凝胶电泳检测巨噬细胞DNA片段化水平;流式细胞术测定不同时期小鼠巨噬细胞凋亡率、膜表面Toll样受体2(TLR2)和胞内Bcl2蛋白的水平。结果结核杆菌强毒力株H37Rv感染组的巨噬细胞凋亡率在1～7d内逐渐升高,至7d时最高可达32.2%,感染的9～11d以后,凋亡率逐渐降低;H37Rv感染组Bcl2水平于感染9～11d后逐渐升高,与卡介苗(BCG)组比较差异有统计学意义;H37Rv感染组和BCG组的巨噬细胞膜表面的TLR2水平均高于正常对照组;各组组内不同时期的TLR2水平无明显变化。结论结核杆菌H37Rv株在感染的早期对宿主巨噬细胞有较强的致凋亡作用,而Bcl2表达的增加能显著抑制这种凋亡。结核杆菌在体内感染过程中,TLR2蛋白可能与巨噬细胞凋亡及Bcl2表达无关。; 夏飞刘胜武魏雅稚肖凌; 关键词：结核分枝杆菌宿主巨噬细胞凋亡 DNA片段化凝胶电泳检测 H37RV

不同浓度TFtb对淋巴细胞增殖的影响: 转移因子是从由某种抗原预激发的机体内提取的,将它注射给受者,能使受者在首次接触该抗原时就发生继发性免疫应答。本实验通过研究结核特异性转移因子(Tubercuiosis transfer factor,TFtb)在体外对巨...; 肖凌刘胜武夏飞; 文献传递

不同浓度结核特异性转移因子对巨噬细胞呈递抗原作用的影响被引量：7: 2004年; 目的 :通过研究结核特异性转移因子 (transferfectortuberculosis,TFtb)对巨噬细胞促进BCG预致敏淋巴细胞增殖反应的影响 ,探讨转移因子 (TF)在传递特异性抗原信息过程中的作用机制。方法 :将小鼠腹腔巨噬细胞作为刺激细胞 ,脾脏非贴壁细胞为效应细胞 ,PPD作为抗原 ,以不同浓度的TFtb为刺激剂 ,用MTT法检测T细胞的增殖率。结果 :预致敏鼠的淋巴细胞增殖率随TFtb浓度升高而增高 ,0 .5mg·ml-1 时达到峰值 ,随后浓度升高增殖率反而下降。TFtb促预致敏淋巴细胞增殖是巨噬细胞依赖性和抗原特异性的。对未致敏鼠的淋巴细胞增殖率无明显改变。结论 :TFtb能够增强巨噬细胞促结核抗原预致敏淋巴细胞增殖反应的作用 ,可能与增强巨噬细胞呈递抗原的作用有关。; 肖凌刘胜武夏飞; 关键词：结核杆菌抗原呈递巨噬细胞

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肖凌