罗惠霞
- 作品数：16 被引量：54H指数：3
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- 发文基金：宁夏回族自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学经济管理文化科学医药卫生更多>>
- 组织型纤溶酶原激活剂缺失/点突变体基因转染细胞株
- 本发明是一种组织型纤溶酶原激活剂突变体rPA(K)基因转染细胞株，它是以脂质体介导法将所构建成的含有t-PA cDNA的缺失/点突变体rPA(K)——rPA(KHRR296～299AAAA)基因(该突变体可逃避PAI-1...
- 王玉炯李敏扈荣良罗惠霞
- 文献传递
- 组织型纤溶酶原激活剂缺失突变体基因转染细胞株
- 本发明是一种组织型纤溶酶原激活剂缺失突变体基因转染细胞株，它是以脂质体介导法将含有t-PA经G418及DMEM的双重选择后，获得其稳定表达细胞株CHO-dhfr<Sup>-</Sup>pCSRA(保藏号：CGMCC No...
- 王玉炯李敏扈荣良罗惠霞
- 文献传递
- 新型rPA(K)原核表达载体的构建及初步表达
- 2008年
- 利用PCR技术,获得了rPA(K)cDNA片段,将其克隆至pET-30a(+),成功构建了新型的rPA(K)原核载体pLrA(K),并实现了其在大肠杆菌中的初步表达,经IPTG(终浓度为1 mmol/L)分别于37℃诱导1,2,3 h后,以Bio-Rad凝胶成像仪分析目的蛋白,相对含量分别是19%,15.8%和24.3%,平均密度分别是0.13,0.14和0.16,IPTG诱导3 h后蛋白表达量最高.ELISA结果显示表达产物与抗t-PA抗体呈现特异性阳性反应,进一步参考标准曲线得出样品中rPA(K)的平均含量为210μg/L.
- 罗惠霞李敏王玉炯李稷亮
- 关键词：组织型纤溶酶原激活剂RPA(K)原核表达
- rPA(K)的原核表达及其产物的初步纯化
- 2007年
- rPA(K)是经过缺失/定点突变技术所获得的t-PA突变体。本实验以IPTG诱导,实现了rPA(K)在原核系统中的表达。实验证明目的产物的表达形式为包涵体,且当以IPTG诱导3h时,表达量最高,为41%。此后对该表达产物进行了初步纯化,即通过对不同超声破碎次数,包涵体洗涤液(脲,Triton X-100,乙醇)的不同浓度对纯化的影响因素进行了摸索。结果表明,超声2次,2M脲,0.5%Triton X-100,20%乙醇对目的蛋白纯化的效果最好,从而为进一步的纯化和复性奠定基础。
- 罗惠霞李敏王玉炯石晶
- 关键词：RPA(K)包涵体初步纯化
- 生物技术专业《生命科学进展》双语教学初探被引量：2
- 2011年
- 为提高学生的外语水平,适应社会经济高速发展对人才的更高要求,通过对《生命科学进展》课程进行了双语教学的实践探索,探讨了教学手段和方法的改革,教学效果调查评估结果显示,认为课程总评及满意程度达良好及以上等级的学生占94%,表明开展的《生命科学进展》双语教学活动所采用的教学方法和手段基本适合学生目前的英语和专业知识水平,《生命科学进展》双语教学改革实践是成功的。
- 罗惠霞
- 关键词：双语教学
- rPA(K)原核表达产物的复性与纯化被引量：1
- 2009年
- 为探索新型rPA(K)在原核系统中表达产物的纯化和复性,采用不同的洗涤剂(脲、Triton X-100、乙醇)依次洗涤包涵体,又经硫酸铵沉淀,得到了经初纯后纯度较高的包涵体.结果表明,经2 mol/L脲1、mL/L TritonX-100、200 mL/L乙醇洗涤,15%饱和度的硫酸铵沉淀后,包涵体的纯度由16.0%提高到56.6%.在此基础上,利用稀释复性和透析复性2种方法对包涵体进行复性,以恢复产物的天然构象,获得具有生物学活性的目的蛋白.结果如下:采用透析复性法,rPA(K)的比活可达1.33×105IU/mg;采用稀释复性法,rPA(K)的比活可达1.06×105IU/mg.利用S.TagTMrEK纯化试剂盒对目的产物进行进一步纯化,并对rEK和MgCl22种洗脱剂的洗脱效果进行了比较.SDS-PAGE结果显示,MgCl2洗脱后的产物,分子量未发生变化,仍为43 ku,其纯度为72%;而rEK洗脱后的产物,其纯度达到了72%,且分子量减小至约40 ku,表明去除了融合蛋白中的非目的片段.
- 罗惠霞李敏王玉炯田楠
- 关键词：RPA(K)包涵体纯化复性
- 组织型纤溶酶原激活剂缺失/点突变体基因转染细胞株
- 本发明是一种组织型纤溶酶原激活剂突变体rPA(K)基因转染细胞株，它是以脂质体介导法将所构建成的含有t－PA cDNA的缺失/点突变体rPA(K)－rPA(KHRR296～299AAAA)基因(该突变体可逃避PAI－1的...
- 王玉炯李敏扈荣良罗惠霞
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- 包涵体蛋白复性的几种方法被引量：35
- 2007年
- 外源基因在大肠杆菌中高水平表达时,通常会形成无活性的蛋白聚集体即包涵体。包涵体富含表达的重组蛋白,经分离、变性溶解后须再经过一个合适的复性过程实现变性蛋白的重折叠,才能够得到生物活性蛋白。
- 罗惠霞李敏王玉炯
- 关键词：包涵体复性
- 组蛋白乙酰化/去乙酰化在真核基因转录调控中的作用被引量：6
- 2004年
- 真核生物中 ,染色质的基本单位是核小体。核小体由H2 A ,H2 B ,H3 ,H4构成的核心组蛋白八聚体及缠绕于其上的DNA构成。最近的研究结果表明 ,核心组蛋白的乙酰化 去乙酰化过程是调控基因活性的一个关键步骤[1] 。而含有组蛋白去乙酰化酶活性的分子有两类 :一类是与酵母RPD3同源的分子 ,另一类是与RPD3不同源的分子。它们各有其不同的来源 ,存在于各自的复合物中 ,催化不完全相同的组蛋白或其他蛋白质去乙酰化 ;这些去乙酰化酶与基因转录的调控存在着密切的关系 ,主要是介导基因转录的抑制。
- 罗惠霞王玉炯
- 关键词：组蛋白乙酰化酶组蛋白去乙酰化基因转录转录调控真核基因
- 新型rPA（K）原核载体的构建及其表达研究
- 本研究将rPA(K)(经突变去除PAI-1结合位点)cDNA克隆至原核表达载体pET-30a(+)中，构建了其新型原核表达体系，并对其优化表达、复性和纯化等条件进行了探索，以达到去除非目的片段、方便检测、利于纯化、节约成...
- 罗惠霞
- 关键词：融合蛋白原核表达
- 文献传递
