杨高晖
- 作品数：18 被引量：39H指数：4
- 供职机构：广西医科大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广西研究生教育创新计划广西壮族自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 介导人α-反义寡核苷酸慢病毒载体的构建被引量：1
- 2010年
- 目的构建介导人α-反义寡核苷酸的慢病毒载体,为α-反义寡核苷酸对β-地中海贫血基因治疗的体内试验提供稳定的转染细胞载体。方法根据人α-反义寡核苷酸序列设计siRNA、合成DNA片段,通过双限制性内切酶消化和连接的方法构建pGCSIL-vshRNA-GFP载体质粒,接着该质粒转化感受态的大肠杆菌E.coliDH5α,通过PCR及基因测序鉴定阳性克隆,再经Lipofectamine 2000将pGCSIL-vshRNA-GFP,pHelper 1.0和pHelper 2.0三质粒系统共转染293 T细胞包装病毒,通过绿色荧光蛋白的表达测定收集的病毒滴度。结果重组质粒的外源基因PCR鉴定正确,基因测序结果与所需要的α-反义寡核苷酸序列完全一致,浓缩后病毒滴度为5×109TU/ml。结论成功构建介导人α-反义寡核苷酸的慢病毒载体。
- 赖颖晖赖永榕杨高晖
- 关键词：慢病毒载体反义寡核苷酸基因治疗
- 尿多酸肽对原代红系细胞γ-珠蛋白表达的体外研究被引量：1
- 2020年
- 目的:探讨尿多酸肽(CDA-Ⅱ)对体外培养原代红系细胞γ-珠蛋白基因和蛋白表达的影响,为CDA-Ⅱ对β-地中海贫血的治疗提供新思路。方法:以不同浓度CDA-Ⅱ(0 mg/mL、1 mg/mL、2 mg/mL、3 mg/mL、4 mg/mL)作用原代红系细胞24 h、48 h和72 h,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)和Cell counting kit-8(CCK-8)法分别检测γ-珠蛋白基因的表达及细胞增殖-毒性情况;以3 mg/mL CDA-Ⅱ为实验组、200 nmol/L地西他滨和100μmol/L羟基脲为阳性对照组以及等体积PBS+DMSO为阴性对照组作用细胞后,采用RT-PCR检测γ-珠蛋白、DNA甲基转移酶1(DNMT1)和FOXO3a mRNA表达的变化;Western Blot(WB)检测γ-珠蛋白表达的情况。结果:RT-PCR结果表明,3 mg/mL CDA-Ⅱ作用细胞48 h和72h后上调γ-珠蛋白基因的表达作用明显(P<0.05),分别为空白对照组(0 mg/mL)的2.5倍和2.68倍;CCK-8结果显示细胞存活率存在时间和浓度依赖性下降,24 h、48 h和72 h的半数抑制浓度(IC50)分别为(5.28±0.67)mg/mL、(3.89±0.63)mg/mL、(2.35±0.20)mg/mL;与阴性对照组比较,CDA-Ⅱ组与地西他滨、羟基脲阳性对照组既可以降低DNMT1基因的表达(P<0.05)、升高FOXO3a基因的表达,同时可以上调γ-珠蛋白基因和蛋白的表达(P<0.01)。结论:CDA-Ⅱ对红系细胞γ-珠蛋白基因和蛋白的高表达可能与DNMT1和FOXO3a有关。
- 江雷方栋黄语妹杨高晖盘玲媛刘容容赖永榕
- 关键词：尿多酸肽DNMT1FOXO3A
- 地西他滨对K562细胞γ-珠蛋白基因表达及细胞增殖的影响被引量：1
- 2012年
- 目的研究地西他滨对K562细胞γ-珠蛋白基因表达及细胞增殖的影响,探讨药物治疗β-地中海贫血的新思路。方法分别用不同浓度(0 nmol/L、50 nmol/L、100 nmol/L、200 nmol/L、300 nmol/L)地西他滨作用于K562细胞24 h、48 h、72 h,用CCK-8检测药物对K562细胞存活率的影响,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用实时荧光定量RT-PCR检测γ-珠蛋白基因表达。结果地西他滨对K562细胞生长有抑制作用,作用后细胞凋亡率增加,γ-珠蛋白基因表达显著提高(P<0.05)。结论地西他滨可以提高K562细胞γ-珠蛋白基因表达。
- 谢冬梅赖永榕刘容容谭滨彬杨高晖
- 关键词：地西他滨K562细胞细胞凋亡
- 人骨髓及脐血单个核细胞移植构建人源化非肥胖糖尿病/重症联合免疫缺陷小鼠模型:可以提高其人源化水平吗被引量：3
- 2009年
- 背景:人源化非肥胖糖尿病/重症联合免疫缺陷(nonobese diabetic/severe combined immunodeficient,NOD/SCID)小鼠模型在生物及医学科学研究中被广泛应用,而提高人源化NOD/SCID小鼠模型中的人源化水平是研究者的迫切需要。目的:探讨提高人源化NOD/SCID小鼠模型人源化水平的措施。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008-11/2009-01在广西医科大学实验动物中心及广西医科大学第一附属医院完成。材料:雄性NOD/SCID小鼠14只,体质量(25.0±1.5)g;1例骨髓标本约6mL(多部位分层次采集)取自健康志愿者;1例足月脐带血标本大约90mL,取自广西医科大学第一附属医院产科,为健康产妇。方法:无菌抗凝的正常骨髓及足月脐带血样本均在采集后6h内处理。密度梯度离心法分离单个核细胞。将14只小鼠标号电脑随机分为5组:全身照射/环磷酰胺骨髓移植组(n=3),全身照射/环磷酰胺脐血移植组(n=3),全身照射骨髓移植组(n=3),全身照射脐血移植组(n=3),空白对照组(n=2)。将人骨髓或脐血单个核细胞分别移植给经不同方案和剂量预处理的各组小鼠,移植后给小鼠腹腔注射重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子及重组人促红细胞生成素。主要观察指标:各组小鼠输注的细胞数,小鼠存活情况并计算死亡率,移植6周后流式细胞仪检测小鼠骨髓及外周血人CD45+细胞比例。结果:全身照射/环磷酰胺骨髓移植组、全身照射骨髓移植组和全身照射/环磷酰胺脐血移植组、全身照射脐血移植组小鼠输注人单个核细胞数分别为(0.6560±0.0089)×106和(4.0775±0.8450)×106。全身照射/环磷酰胺组死亡率均为100%,全身照射组死亡率均为33.3%。全身照射后再加环磷酰胺,小鼠不能耐受;而全身照射剂量越大,死亡率越高,当达400cGy时,死亡率100%。存活小鼠移植6周后,流式细胞仪检测小鼠骨髓中人CD45+细胞的比例,全身照射脐血移植组13号和6号小鼠�
- 赖颖晖赖永榕王明月杨高晖
- 关键词：NOD/SCID小鼠人源化细胞移植
- 异基因造血干细胞移植治愈不稳定血红蛋白病Hb Mizuho 1例
- 2023年
- 患儿,男,8岁10个月,陕西西安人。患儿1岁时出现面色苍白、巩膜黄染,在当地医院检查发现黄疸、轻中度贫血,诊断溶血性贫血,原因未明确,未予特殊处理。
- 李婵杨高晖刘练金陈英华周雪梅赖永榕刘容容
- 关键词：巩膜黄染不稳定血红蛋白溶血性贫血异基因造血干细胞移植中度贫血
- 同胞异基因造血干细胞移植治疗重型地中海贫血后巨细胞病毒感染的危险
- 杨高晖林雨刘练金章忠明赖永榕李桥川
- D63.重型β-地中海贫血患者维生素D3的测定
- 胡陈万赖永榕杨高晖
- 文献传递
- 广西重型β地中海贫血患者铁过载及其相关并发症和机制研究
- 第一部分 广西重型β地贫患者铁过载状况研究 目的调查广西重型β地贫患者铁过载发病率及铁过载严重程度 方法从2010年11月至2013年1月共收集重型β地贫患者310例,其中男性196例,女性114例。年龄为2～25岁,中...
- 杨高晖
- 关键词：重型Β地中海贫血铁过载左室射血分数铁过载左室射血分数铁过载Β-地中海贫血铁过载Β-地中海贫血
- 文献传递
- 建立人源β-地中海贫血小鼠模型被引量：2
- 2010年
- 背景:没有适合的β-地中海贫血动物模型的发展,就没有β-地中海贫血基因治疗的进步,而小鼠模型是最有用的且通常用于第一线的体内试验。目的:拟建立人源β-地中海贫血小鼠模型,为β-地中海贫血的基因治疗提供与人类疾病相似、可靠的动物模型。方法:非肥胖糖尿病/重症联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠15只,随机均分为3组:β-地贫/HbE骨髓移植组、β-地贫骨髓移植组、空白对照组。取β-地中海贫血/HbE和β-地中海贫血患者骨髓的单个核细胞,分别从尾静脉输注给经60Coγ射线350cGy全身照射预处理后的β-地贫/HbE骨髓移植组、β-地贫骨髓移植组小鼠,空白对照组输注RPMI-1640培养液。移植后小鼠腹腔注射重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子及重组人促红细胞生成素。观察小鼠一般状况和存活情况,移植5周后取小鼠骨髓及外周血,检测人CD45+细胞比例、人β-地贫基因,观察红系细胞内α-珠蛋白链的沉积情况、小鼠的肝脏和脾脏病理及铁染色检查。结果与结论:移植5周后,小鼠骨髓和外周血人CD45+细胞比例结果分别为:β-地贫/HbE骨髓移植组为7.21%、4.08%(+47d),7.37%、6.03%(+61d);β-地贫骨髓移植组为8.17%、3.43%(+36d),16.82%、8.89%(+45d),空白对照组均为0。β-地贫基因检测结果与供者相符,部分红系细胞内出现电子致密物(过剩α-珠蛋白肽链)沉积。移植组小鼠脾脏长度与其体质量的比值比空白对照组的大(P<0.05),肝脾出现较明显的铁沉积。提示,所建立的小鼠模型具有人源化β-地中海贫血的表现,基本符合人源β-地中海贫血小鼠模型的要求。
- 赖颖晖赖永榕杨高晖罗琳
- 关键词：Β-地中海贫血NOD/SCID小鼠Γ射线人源化
- D57.118例广西重型β-地中海贫血患者TTV、HGV感染状况调查
- 陈津晶赖永榕刘容容杨高晖
- 文献传递
