杨曦
- 作品数：8 被引量：13H指数：2
- 供职机构：第四军医大学更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- BCR/ABL-OD结构域重组蛋白的表达和纯化
- 2005年
- 目的:制备BCR/ABL OD结构域-HIS的重组蛋 白.方法:用RT-PCR方法扩增BCR/ABL OD结构域的基因 片段,测序正确后将其克隆入原核表达载体pET16b中,并进 行酶切鉴定,鉴定正确后转化大肠杆菌BL21,构建表达His- OD融合蛋白的菌株.经IPTG诱导表达后,镍 次氮基三乙酸 (Ni NTA)琼脂糖进行亲和层析纯化,用SDS-PAGE对该融 合蛋白的表达产率及蛋白纯度进行了分析.结果:获得了 His-OD重组融合蛋白,纯度在95%以上,产物得率约75%. 结论:成功制备高纯度His-OD融合蛋白,为进一步研究OD 结构域的生物学功能奠定了基础.
- 叶盛开贾洪霞林媛周鹏杨曦张萍李军锋李军林董潇张兵华梁英民
- 关键词：重组蛋白质类
- 核糖体蛋白L6/Taxreb107的核定位信号的分析被引量：2
- 2002年
- 核糖体蛋白L6 (RpL6 ,Taxreb10 7)含有三个具有核定位信号特征的基序 .用作者构建的核定位信号捕获系统分析了这些核定位信号是否具有介导蛋白质进行核转位的功能 .将RpL6 /Taxreb10 7分段插入核定位信号捕获载体的克隆位点后转化宿主酵母 ,发现其前两个核定位信号可以介导融合蛋白进入细胞核 ,而第三个核定位信号无此作用 .将RpL6 /Taxreb10 7分段与绿色荧光蛋白融合后转染培养的哺乳类细胞 ,证实了以上在酵母中所得的结果 .进一步发现RpL6 /Taxreb10 7的前两个核定位信号同时具有核仁定位的功能 .当在细胞中表达的早期 ,进入核内的融合蛋白优先定位于核仁 .这些结果一方面有助于理解RpL6 /Taxreb10 7核转位的机理 ,同时说明作者构建的核定位信号捕获系统也可用在蛋白质中寻找核定位信号 .
- 王冀姝杨曦李荣周鹏张淼丽韩骅
- 关键词：核定位信号核转位绿色荧光蛋白
- 核糖体蛋白RpL6/Taxreb107核定位信号的确定及启动子分析
- 利用核定位信号捕捉系统确定核糖体蛋白L6(RpL6)的核定位信号(NLS)的位置，并在体外培养的细胞中加以证实.氨基端的30-41和68-84氨基酸残基具有核定位及核仁定位功能.RpL6又称Taxreb107，是HTLV...
- 王冀姝杨曦李荣孙强周鹏韩骅
- 关键词：核糖体蛋白核定位信号启动子转录因子
- 文献传递
- PTD-BCR/ABL-OD融合癌蛋白的表达和跨膜转运被引量：2
- 2005年
- 梁英民叶盛开贾洪霞林媛蒋姗姗吴绒丽周鹏杨曦张萍李军锋李军林韩骅
- 关键词：癌蛋白跨膜转运
- LIM结构域蛋白KyoT相互作用分子的筛选被引量：6
- 2002年
- KyoT为LIM结构域蛋白 ,可与转录因子RBP Jk相互作用。为了研究其功能 ,用酵母双杂交法筛选了与KyoT相互作用的蛋白。以KyoT2为诱饵筛选人淋巴结cDNA文库 ,从 5× 10 6 个克隆中共获得 4 2个阳性克隆。提取质粒进行酶切鉴定 ,获得 2 2个非重复克隆。对此 2 2个克隆进行序列分析 ,共获得 13种基因 ,其中包括已知的KyoT相互作用蛋白RBP Jk和两个未知基因。另一种被筛选到的已知基因是激活状态的信号转导物和转录因子 1活化物的抑制蛋白 (proteininhibitorofactivatedsignaltransducerandactivatoroftranscription 1,PIAS1)。由于KyoT在小鼠睾丸中表达较高 ,因此进一步探讨了KyoT2与PIAS1的相互作用。并首先在酵母中证实KyoT2与PIAS1的相互作用并得到阳性结果。进而在大肠杆菌中表达纯化了KyoT2蛋白 ,并以此为抗原制备了抗KyoT2多克隆抗体 ,再用GST pulldown实验验证了KyoT2和PIAS1在体外的相互作用。成功筛选了KyoT相互作用蛋白 ,发现并验证了KyoT与PIAS1的相互作用 。
- 李荣王冀姝孙强王键杨曦黄红燕周鹏韩骅
- 关键词：LIM蛋白酵母双杂交转录
- Bcr-Abl酪氨酸蛋白激酶域及其突变体的构建和表达被引量：1
- 2006年
- 目的:制备Bcr-Ab l激酶域及其突变体-H is的重组蛋白.方法:用PCR方法从含有Bcr-Ab l全长的质粒pGD210中扩增出Bcr-Ab l激酶域片段,再通过重组PCR技术获得激酶域的几个主要突变体(T315 I,Y253F,E255K,E255V),测序正确后将其克隆到原核表达载体pET-32 a中,构建表达激酶域片段和H is标签融合表达的载体,IPTG诱导表达,得到的融合蛋白用镍-次氮基三乙酸(N i-NTA)琼脂糖进行亲和层析纯化.结果:成功得到了Bcr-Ab l激酶域及其突变体序列,经序列分析证实后将重组质粒转入BL-21进行表达.结论:通过重组PCR技术获得了野生型激酶域及其突变体蛋白.融合蛋白表达在包涵体,占菌体总蛋白的70%以上.经N i-NTA镍珠纯化后,纯度在95%以上.
- 王淑红梁英民邢佩霓刘海妮王耀春杨曦蒋珊珊李军林李军锋
- 关键词：蛋白质酪氨酸激酶聚合酶链反应蛋白纯化
- 抗nestin多克隆抗体的制备
- 2005年
- 目的: 在大肠杆菌中融合表达编码小鼠nestin肽链C段的cDNA序列,制备特异性多克隆抗体;方法: 采用RT PCR的方法获得编码小鼠nestin肽链C段的cDNA序列,将测序正确的片段克隆入pET 32a,构建pET 32a nestin C表达载体.在大肠杆菌BL 21中IPTG诱导下表达6×Hisnestin C融合蛋白,纯化后免疫新西兰兔,制备兔抗鼠nes tin血清,以WesternBlotting和免疫组化方法分析其特异性.结果: 6×His nestin C融合蛋白免疫新西兰兔成功获得多克隆抗体,WesternBlotting和免疫组化结果显示制备的抗体具有较高的特异性.结论: 构建了pET 32a nestin C表达载体,并在大肠杆菌中获得高效表达.该多克隆抗体效价高、特异性好.
- 李军林韩骅兰莉杨曦李军锋王亚蓉祝仰庭
- 关键词：抗体制备
