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高表达CD81的Huh7细胞株对提高HCV病毒感染效率的研究被引量：1: 2010年; 目的建立具有高感染性的丙型肝炎病毒(HCV)的体外细胞株。方法构建高表达CD81的Huh7细胞株。将HCV质粒(JFH-1,2a)体外转录成RNA,电转染到Huh7和CD81-Huh7细胞中,实时定量PCR法检测两组细胞和培养上清液中病毒载量,间接免疫荧光法检测细胞中HCV核心蛋白表达。收集电转后细胞上清液重新感染两组细胞,检测细胞中病毒RNA表达。结果 CD81-Huh7电转后,细胞和上清液中病毒RNA水平均明显高于Huh71-2log。其被感染的效率也高于Huh7。结论成功建立一株能够高表达感染性HCV病毒颗粒的细胞株CD81-Huh7。; 杨硕徐珩顾娜冯丹丹李宁李军锋童贻刚周育森娄金丽闾军; 关键词：丙型肝炎病毒 CD81 HUH7细胞

pCDNA3.1/NY-ESO-1真核表达质粒的构建及在肝癌细胞系HepG2中稳定高表达: 2010年; 目的建立癌-睾丸抗原NY-ESO-1稳定表达的HepG2肝癌细胞系。方法设计NY-ESO-1的引物,PCR法从NY-ESO-1阳性表达的睾丸癌组织中扩增出目的片段,克隆至T载体,双酶切后定向连入pCDNA3.1载体,构建pCD-NA3.1/NY-ESO-1真核表达质粒。经酶切、PCR、测序检测其构建的正确性,脂质体转染法将重组质粒转入HepG2细胞,G418药物筛选出稳定转染的细胞系,RT-PCR法、间接免疫荧光法分别检测稳定转染HepG2细胞中NY-ESO-1基因、蛋白的表达水平。结果构建的pCDNA3.1/NY-ESO-1质粒经酶切、测序等检验表明质粒构建成功,筛选获得稳定高表达NY-ESO-1的HepG2细胞。结论构建了pCDNA3.1/NY-ESO-1真核表达质粒及稳定高表达NY-ESO-1的HepG2细胞株,为下一步以NY-ESO-1为靶标进行肝癌的抗原特异性免疫治疗研究奠定了实验基础。; 徐珩杨硕顾娜冯丹丹闾军汪思应; 关键词：免疫疗法荧光免疫测定

HLA-A2限制性NY-ESO-1抗原特异的TCR基因转导人外周血T淋巴细胞过继免疫治疗肝癌的初步研究: 目的：检测肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma HCC)患者肝癌组织中癌-睾丸抗原NY-ESO-1（New York esophageal squamous cell carcinoma 1)基...; 徐珩; 关键词：过继免疫治疗 T淋巴细胞癌-睾丸抗原; 文献传递

NY-ESO-1抗原T细胞受体基因慢病毒载体的构建及鉴定: 2010年; 目的构建NY-ESO-1抗原T细胞受体基因(TCellReceptor,TCR)的慢病毒载体并获得重组慢病毒。方法设计特异性NY-ESO-1TCR的引物,用聚合酶链反应(PCR)对我们前期已克隆的NY-ESO-1TCRcDNA进行体外扩增,双酶切后定向插入到pCL20c-MSCV-GFP质粒,构建NY-ESO-1抗原特异性TCR基因的重组慢病毒载体pCL20c-MSCV-ESOTCR,并经酶切、PCR及测序鉴定。用pCL20c-MSCV-ESOTCR﹑pCL20c-HIV-gp、pCAG4-RTR2和CAG-VSV-G共转染T293包装细胞,获得上清,上清浓缩后感染Hela细胞,观察ESOTCR基因及蛋白水平的表达。结果经PCR及测序证实,成功构建重组慢病毒载体pCL20c-MSCV-ESOTCR,包装产毒后感染Hela细胞,RT-PCR法及荧光显微镜均能检测及观察到基因及蛋白水平的表达。结论成功构建了表达NY-ESO-1抗原T细胞受体基因(TCellReceptor,TCR)的重组慢病毒载体。; 顾娜徐珩冯丹丹李宁闾军; 关键词：慢病毒载体 HELA细胞

转染NY-ESO-1特异性TCR增强人PBMC对NY-ESO-1阳性肿瘤细胞的特异性细胞毒性被引量：2: 2013年; 目的探讨体外转导NY-ESO-1特异性T细胞受体至人外周血淋巴细胞中,是否可增强转导后细胞体外特异性识别并杀伤肿瘤细胞的能力。方法将NY-ESO-1特异性TCR质粒(pCDNA3.1-ESO-TCR)体外电转入新分离的正常人PBMC中,RT-PCR法鉴定转导是否成功;采用流式细胞仪分析转导后PBMC表型;用特异性NY-ESO-1b抗原肽(p157-165)刺激转导PBMC后,用ELISPOT法检测PBMC分泌IFN-γ的能力,用实时无标记动态细胞分析仪检测PBMC特异性细胞毒性作用。结果电转后PBMC能够扩增出特异性TCR片段;电转pCDNA3.1-ESO-TCR质粒的PBMC细胞表面特异性TCR表达率高于电转空载体的PBMC的表达率(P<0.05);经多肽刺激后,电转目的质粒的PBMC分泌IFN-γ的斑点数明显多于电转空载体的PBMC(P<0.05);转导后PBMC特异性细胞毒性作用明显强于电转空载体的PBMC。结论经NY-ESO-1特异性TCR基因修饰的PBMC对NY-ESO-1阳性HepG2细胞的体外特异性杀伤作用有明显提高,为进行下一步肝癌过继性免疫研究提供了基础资料。; 郭佳田洲顾娜徐珩闾军; 关键词：TCR PBMC NY-ESO-1

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徐珩