杨硕 作品数:9 被引量:17 H指数:2 供职机构: 首都医科大学附属北京佑安医院 更多>> 发文基金: 中国博士后科学基金 国家自然科学基金 北京市自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
高表达CD81的Huh7细胞株对提高HCV病毒感染效率的研究 被引量:1 2010年 目的建立具有高感染性的丙型肝炎病毒(HCV)的体外细胞株。方法构建高表达CD81的Huh7细胞株。将HCV质粒(JFH-1,2a)体外转录成RNA,电转染到Huh7和CD81-Huh7细胞中,实时定量PCR法检测两组细胞和培养上清液中病毒载量,间接免疫荧光法检测细胞中HCV核心蛋白表达。收集电转后细胞上清液重新感染两组细胞,检测细胞中病毒RNA表达。结果 CD81-Huh7电转后,细胞和上清液中病毒RNA水平均明显高于Huh71-2log。其被感染的效率也高于Huh7。结论成功建立一株能够高表达感染性HCV病毒颗粒的细胞株CD81-Huh7。 杨硕 徐珩 顾娜 冯丹丹 李宁 李军锋 童贻刚 周育森 娄金丽 闾军关键词:丙型肝炎病毒 CD81 HUH7细胞 HCV细胞模型及三氧化二砷抗HCV作用的实验研究进展 2010年 Hepatitis C virus(HCV)is a human pathogen responsible for liver diseases including acute and chronic hepatitis and hepatocellular carcinoma.However,the high prevalence,the absence of antiviral drugs and vaccines for prevention and treatment are the difficult medical problems.Lacking appropriate culture method and small animal model have severely limited investigation of the HCV infection mechanism and the development of the therapeutic strategy.Recently,the in vitro culture system develops rapidly,and provides a powerful tool for HCV related research.Despite the well known toxicity of the chemical,arsenic trioxide(As2O3)is effective for treating the patients with refractory or relapsed acute promyelocytic leukemia and many other cancers.Interestingly,As2O3 shows the ability of inhibiting HCV RNA replication and infection.This review describes the different types of in vitro HCV models developed,and many studies of the potent effect of As2O3 against HCV and its associated molecular mechanisms. 娄金丽 杨硕 闾军关键词:细胞培养 三氧化二砷 pCDNA3.1/NY-ESO-1真核表达质粒的构建及在肝癌细胞系HepG2中稳定高表达 2010年 目的建立癌-睾丸抗原NY-ESO-1稳定表达的HepG2肝癌细胞系。方法设计NY-ESO-1的引物,PCR法从NY-ESO-1阳性表达的睾丸癌组织中扩增出目的片段,克隆至T载体,双酶切后定向连入pCDNA3.1载体,构建pCD-NA3.1/NY-ESO-1真核表达质粒。经酶切、PCR、测序检测其构建的正确性,脂质体转染法将重组质粒转入HepG2细胞,G418药物筛选出稳定转染的细胞系,RT-PCR法、间接免疫荧光法分别检测稳定转染HepG2细胞中NY-ESO-1基因、蛋白的表达水平。结果构建的pCDNA3.1/NY-ESO-1质粒经酶切、测序等检验表明质粒构建成功,筛选获得稳定高表达NY-ESO-1的HepG2细胞。结论构建了pCDNA3.1/NY-ESO-1真核表达质粒及稳定高表达NY-ESO-1的HepG2细胞株,为下一步以NY-ESO-1为靶标进行肝癌的抗原特异性免疫治疗研究奠定了实验基础。 徐珩 杨硕 顾娜 冯丹丹 闾军 汪思应关键词:免疫疗法 荧光免疫测定 HCV细胞模型及三氧化二砷抗HCV作用实验研究进展 全世界约有1.7亿人感染丙型肝炎病毒(HCV),占世界人口的3%,我国约有4千万HCV携带者,平均感染率为3.2%。尽管急性感染阶段症状轻微,但70%以上HCV感染者发展成慢性过程,可导致慢性活动性肝炎,肝硬化,甚至肝细... 娄金丽 杨硕 闾军关键词:丙肝病毒 三氧化二砷 文献传递 葛根素治疗2型糖尿病KKA^y小鼠肝脏损伤的实验研究 被引量:9 2009年 目的研究2型糖尿病(T2DM)肝脏损伤的发生及可能的发病机制,探讨葛根素注射液的干预作用。方法选取T2DM小鼠(KKAy)随机分为模型组和葛根素组。同龄C57BL/J小鼠作为正常对照组。28周龄后处死小鼠,全自动生化法检测空腹血糖(FBG)、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)等生化指标;流式细胞仪检测肝细胞凋亡情况;电镜观察肝组织病理形态学改变;RT-PCR法检测凋亡相关基因bcl-2、baxmRNA的表达;紫外分光光度检测肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力、丙二醛(MDA)含量及Na+-K+-ATP酶活性。结果与正常对照组比较,模型组KKAy小鼠血清FBG、TG、TC、ALT、AST含量均增高(P<0.01);肝脏凋亡细胞百分率增高(P<0.01);可见肝脏线粒体肿胀、损伤;bcl-2表达下调,bax表达上调(P<0.01);肝组织中SOD,GSH-Px,Na+-K+-ATP酶活性降低,MDA含量增高(P<0.01)。葛根素组治疗后,小鼠以上各项指标均有所改善。结论糖尿病KKAy小鼠存在明显肝损害;葛根素可通过上调bcl-2,从而抑制氧化应激,改善小鼠肝脏能量代谢障碍,对糖尿病引起的氧化损伤有保护作用。 杨硕 娄金丽 王谦 郑宏 黄启福关键词:2型糖尿病 肝损害 BCL-2/BAX 葛根素 糖尿病KKA^y小鼠的肝损害 被引量:5 2008年 目的:探讨2型糖尿病肝损害的发生及可能的发病机制。方法:KKAy糖尿病小鼠高脂饮食喂养,28周后处死小鼠,分别取血清和肝组织,全自动生化法检测血糖(GLU)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)等生化指标;HE、Masson染色观察肝组织病理形态学改变;TUNNEL法检测肝细胞凋亡变化;放免法检测肝组织中IL-1β、TNF-α含量的变化等。结果:与正常小鼠相比,KKAy糖尿病小鼠血清中GLU、TG、TC均增高(P<0.01),血清中ALT、AST增高(P<0.01),肝组织病理形态学检测可见肝细胞呈脂肪变性,肝组织纤维化,并可见肝细胞凋亡;肝组织中IL-1β、TNF-α含量明显增高(P<0.01)。结论:糖尿病KKAy小鼠存在肝损害;IL-1β、TNF-α可能是其损伤机制之一。 娄金丽 王谦 杨硕 张锦 郑宏 黄启福关键词:2型糖尿病 肝损害 细胞凋亡 细胞因子 2型糖尿病肝损害及葛根素的干预作用 目的:研究2型糖尿病肝脏损伤的发生及可能的发病机制,探讨葛根素注射液的干预作用。方法:选取12周龄2型糖尿病模型 KKA~y 小鼠及同龄 C57BL/J 小鼠,实验分为正常对照组(C57BL/J)、模型组和葛根素注射液组... 娄金丽 杨硕关键词:肝损害 高脂饮食 GSH 肝组织病理 糖尿病模型 干预作用 文献传递 HCV感染通过Erk信号的激活上调PTTG1的表达 被引量:2 2012年 为探讨丙型肝炎病毒(HCV)感染导致肝细胞癌发生的分子机制,利用前期研究建立的体外HCV细胞培养体系,将HCVJFH-1RNA转染CD81-Huh7细胞,确定能够获得感染性HCV后,收集HCV转染后10,50,100和150d的细胞,采用RealtimePCR及WesternBlot法检测不同时间点细胞内垂体瘤转化基因1(PTTG1)基因和蛋白水平的表达情况,同时检测总MAPK/Erk1/2,磷酸化Erk1/2(p-Erk1/2)蛋白的表达。随后,用干扰素抑制HCV的感染,再检测PTTG1及MAPK/Erk1/2的表达情况,以及用MAPK/Erk抑制剂(PD98059)阻断MAPK/Erk1/2的磷酸化后,检测PTTG1的表达情况。结果显示,HCV转染的细胞与未转染细胞比较,PTTG1的mRNA和蛋白表达均显著增加,p-Erk1/2蛋白显著升高(P<0.05);抑制HCV感染显著降低PTTG1的表达和MAPK/Erk1/2的磷酸化(P<0.05);MAPK/Erk1/2抑制剂显著降低了PTTG1基因和蛋白的表达(P<0.05)。体外HCV感染可以导致MAPK/Erk信号通路的磷酸化,进一步导致原癌基因PTTG1的表达增加,这可能是慢性HCV感染导致HCV相关性肝细胞癌发生的分子机制之一。 冯丹丹 杨硕 李红霞 顾娜 闾军关键词:HCV感染 MAPK/ERK信号通路 糖尿病肝损伤研究进展 随着糖尿病发病率的增高,糖尿病致肝损伤也越来越受到临床重视,其中非酒精性脂肪肝(NAFLD)最为常见。2型糖尿病患者并发脂肪肝的患病率为21%-78%,平均约50%。但往往因为它无症状或症状轻微,以致医生、患者对糖尿病并... 杨硕 娄金丽文献传递