张辉
- 作品数：21 被引量：24H指数：3
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- 相关领域：农业科学医药卫生生物学经济管理更多>>
- 单增李斯特菌IspD蛋白生物信息学分析及表达纯化被引量：1
- 2023年
- 【目的】对单增李斯特菌IspD蛋白的潜在生物学功能进行预测分析,并表达纯化IspD蛋白,为后续IspD蛋白的研究提供理论支撑。【方法】从NCBI中获得单增李斯特菌IspD的编码序列(基因ID:986270)和氨基酸序列(登录号:NP_464611.1),运用生物信息学软件对IspD蛋白编码序列进行开放阅读框分析,对氨基酸序列进行基本特性、空间结构、抗原表位、修饰化位点、蛋白互作及相似性等预测分析。对IspD蛋白编码序列进行密码子优化并合成,采用无缝克隆法构建重组质粒pET-32a-IspD并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,将测序和双酶切验证正确的阳性克隆经IPTG低温过夜诱导表达,采用镍柱亲和层析法纯化得到IspD融合蛋白,利用SDS-PAGE和Western blotting验证IspD融合蛋白表达、纯化及反应原性。【结果】IspD蛋白编码基因为lmo1086,全长711 bp,共有4个开放阅读框,其中ORF1为最长的开放阅读框,可编码236个氨基酸。氨基酸序列分析显示,IspD蛋白无跨膜结构域、信号肽,是一种亲水性蛋白,亚细胞定位于细胞质中,为2-C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸胞苷酰基转移酶。α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲参与了IspD蛋白二级结构的组成,三级结构模型预测与二级结构特点相符。IspD蛋白具有多个T、B细胞抗原表位、固定无序结构域、磷酸化、糖基化、甲基化及乙酰化修饰位点。蛋白互作分析显示,IspD蛋白与DXR、IspF、ipk等多个蛋白存在相互作用,IspD与其相互作用最强的DXR蛋白之间通过氢键、盐桥等实现连接和相互作用。试验成功构建了表达菌株pET-32a-IspD,SDS-PAGE结果显示,在上清中高表达IspD融合蛋白;Western blotting验证显示,纯化的IspD融合蛋白具有反应原性。【结论】IspD蛋白具有成为候选诊断、疫苗研发和药物靶点等的潜在价值。试验表达纯化得到IspD融合蛋白,可为后续IspD蛋白具体功能的研究提供理论依
- 史超张伟张伟张梦琦何欣赵明彦周霞周霞张辉
- 关键词：单增李斯特菌生物信息学纯化
- 牛病毒性腹泻病毒感染绵羊胃肠道Cajal间质细胞模型的建立
- 2021年
- 为了建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)感染细胞模型,试验将盲传5代的BVDV新疆分离株TC病毒液按照10倍倍比稀释接种至原代绵羊胃肠道Cajal间质细胞(ICC)中,使用Reed-Muench法计算病毒效价,显微镜观察BVDV感染ICC 24 h后细胞形态变化情况,RT-PCR扩增BVDV 5′UTR基因,间接免疫荧光染色检测ICC中的BVDV。结果表明:经计算测得BVDV新疆分离株TC的效价为1×10^(4.6)TCID_(50)/0.1 mL;BVDV感染ICC后出现致细胞病变效应(CPE),细胞出现空泡、萎缩、数量减少及脱落等现象;RT-PCR扩增得到BVDV 5′-UTR基因的目的条带;间接免疫荧光染色可检测到BVDV感染ICC。在ICC中,BVDV盲传5代仍具有较好的感染性和CPE。说明ICC可作为研究BVDV造成胃肠道炎性病变的细胞模型。
- 李胜男王勇张辉冉多良付强陈创夫史慧君
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒绵羊CAJAL间质细胞细胞模型细胞病变效应
- 顶山水库大坝除险加固中大坝防渗技术方案研究
- 2020年
- 为解决顶山水库工程除险加固中大坝存在的渗漏问题,采用单管高压旋喷防渗墙、振动沉模混凝土防渗墙+高喷防渗墙、射水法防渗墙+高喷防渗墙3种方法进行大坝防渗加固方案比选,根据其原理、施工方法与技术、施工条件以及三种方法自身的优缺点,选择出一种施工效果较好的单管高压旋喷防渗墙方案进行大坝加固,最后对施工后的大坝进行渗流稳定计算来验证其加固效果,得到加固后大坝渗流稳定满足要求。
- 张辉
- 关键词：除险加固渗流稳定防渗技术
- 医院神经外科住院患者抗菌药物应用性研究被引量：1
- 2009年
- 目的了解神经外科住院患者抗菌药物应用情况。方法回顾性调查2006年与2008年住院病历,每月连续抽取7 d住院病历,共计285份,对抗菌药物种类用药金额及DDDs进行归类统计比较和相关性分析。结果2006年神经外科抗菌药物使用率91.67%,2008年神经外科使用率为78.29%,同比下降13.38%,涉及抗菌药物种类7类17个品种,应用频率最高是头孢菌素,住院患者抗菌药物应用统计药物利用指数(DUI)<1为合理用药。结论神经外科抗菌药物的应用较为合理,符合神经外科用药特点,但使用水平有待进一步提高。
- 彭义刚郭龙王志强张辉孙康东赵剑涛王寿新
- 关键词：神经外科抗菌药物
- 长链非编码RNA在PEDV感染Vero-E6细胞中对自噬的调控作用被引量：2
- 2022年
- 【目的】试验旨在研究长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)在猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea viru,PEDV)感染非洲绿猴肾细胞(Vero-E6)过程中对自噬的调控作用,以期为抗PEDV新型药物靶点的开发提供新思路。【方法】根据GenBank上公布的人lncRNA-HOTAIR基因序列(登录号:NR_047517.1),利用LongMan在线工具筛选lncRNA-HOTAIR的猴源同源序列(lncRNA-M),并利用RNAfold、LncLocator在线预测工具预测其二级结构和核质分布。建立PEDV感染的Vero-E6细胞模型,在0、6、12、24、36和48 h收集细胞,利用实时荧光定量PCR和Western blotting检测微管相关蛋白1-轻链3(LC3)蛋白的表达,以明确病毒感染细胞后不同时间点自噬的发生情况。通过实时荧光定量PCR检测lncRNA-M在PEDV感染Vero-E6细胞模型中0、6、12、24、36和48 h的表达水平。设计并合成3条lncRNA-M的干扰片段:siRNA-1、siRNA-2和siRNA-3,分别转染Vero-E6细胞,待细胞汇合度达到90%时接毒,感染48 h后利用实时荧光定量PCR检测lncRNA-M的表达情况,筛选出干扰效率最高的干扰片段。将干扰效率最高的干扰片段转染至Vero-E6细胞并接种PEDV后,通过Western blotting检测感染后24和48 h LC3蛋白的表达水平,以验证自噬的发生情况。【结果】成功筛选出lncRNA-HOTAIR猴源同源序列为lncRNA 0.1,并根据RNAfold预测结果生成lncRNA 0.1的RNA最小自由能二级结构;LncLocator预测结果表明,lncRNA 0.1在细胞核和细胞质中的分布分别为41.88%和37.78%。PEDV感染Vero-E6细胞48 h后,细胞皱缩、聚集成团,细胞膜融合形成合胞体;1.0%琼脂糖凝胶电泳结果显示,在1326 bp处出现目的条带,说明PEDV感染Vero-E6细胞模型成功建立。在PEDV感染的Vero-E6细胞模型中,Western blotting结果显示,6、12、24、36和48 h LC3Ⅱ的表达量呈上升趋势,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值在48 h最高且极显著高于0 h(P<0.01);实时荧光定量PCR结果显示,LC3的mRNA表达量在48 h最高,且极
- 王梓行邓兴梅邱润辉朱德馨李佳陶婷婷朱嘉乐孙志华张辉
- 关键词：自噬长链非编码RNA
- 推进新型工业化中人才工作的瓶颈及对策——以新疆生产建设兵团第一师新型工业化人才工作为例
- 2018年
- 党的十六大把基本实现工业化作为我国在新世纪头20年经济建设的主要任务之一,并强调要必须走出一条科技含量高、经济效益好、资源能耗低、人力资源得到充分发挥的新型工业化道路,这样才能满足人民日益增长的物质、文化、生活水平的要求,实现全面建设小康社会的宏伟目标。因此加快推进新型工业化进程,努力实现兵团工业超常规跨越式发展,是摆在兵团各级党组织和广大干部职工面前的一项十分艰巨而紧迫的重大任务。
- 张辉
- 关键词：新型工业化
- 布鲁氏菌分泌蛋白BPE005的亚细胞定位及与宿主细胞互作蛋白的筛选被引量：1
- 2022年
- 【目的】分析布鲁氏菌分泌蛋白BPE005的蛋白结构及细胞定位,筛选宿主细胞内与其存在相互作用的靶蛋白,为后续研究BPE005的生物学功能奠定基础。【方法】通过生物信息学软件对BPE0005的蛋白结构进行初步分析;构建PDRRED2-C1-BPE005重组荧光定位载体,转染人胚肾上皮细胞293T,通过扫描激光共聚焦显微镜观察BPE005的细胞定位;构建PGBKT7-BPE005诱饵载体,验证诱饵载体是否有细胞毒性和自激活现象;以小鼠巨噬细胞RAW264.7 mRNA的cDNA文库为AD文库菌液,检测文库滴度,通过酵母双杂交系统筛选宿主细胞内与BPE005相互作用的靶蛋白。【结果】布鲁氏菌分泌蛋白BPE005属于疏水性蛋白,内含有大量的无规则卷曲、α-螺旋和延伸链。成功构建PDRRED2-C1-BPE005荧光定位载体和PGBKT7-BPE005诱饵蛋白载体,BPE005定位于宿主细胞核。PGBKT7-BPE005诱饵蛋白载体无酵母细胞毒性和自激活现象,AD文库菌液滴度>2×10^(7)/mL,筛选出4个宿主细胞内与BPE0005存在相互作用的蛋白:RNA聚合酶Ⅱ多肽G、补体因子H、鸟苷酸环化酶2G及颗粒蛋白。经复筛、测序、BLAST比对、一对一验证后,最终筛选出1个在宿主细胞内与BPE005具有较强相互作用的靶蛋白(RNA聚合酶Ⅱ多肽G)。对该蛋白的作用网络分析表明,RNA聚合酶Ⅱ多肽G对宿主细胞内mRNA的转录和合成具有重大影响。【结论】布鲁氏菌分泌蛋白BPE005定位于宿主细胞核,在宿主细胞内可与RNA聚合酶Ⅱ多肽G产生较强相互作用,对进一步阐明布鲁氏菌感染过程中关键效应分子的作用机制具有指导意义。
- 邱润辉关飞虎陶婷婷李佳赵天艺邓兴梅史超孙志华张辉
- 关键词：布鲁氏菌亚细胞定位酵母双杂交
- 新疆生产建设兵团国企改革的粗浅认识
- 2018年
- 随着中国国企改革正持续推进,新疆生产建设兵团国企改革破冰启动,兵团国企改革的最终目标是,以推进内部政企分开为突破口,着力构建兵团特殊管理体制与市场机制相适应的国资管理和国企运营方式。根据《新疆生产建设兵团党委关于深化国资国企改革的实施意见》(下称"《意见》"),新疆生产建设兵团(下称"新疆兵团")本轮国资国企改革,将在混改、跨所有制跨区域并购重组、搭建国有投融资平台引领下启动。《意见》显示,除承担重大专项任务、投融资平台等功能以及主业从事公共服务的国企,需保持国有独资、全资或绝对控股外,其他企业一般不限制国有股权比例。支持有条件的国企探索开展集团层面的混合所有制改革试点,新疆兵团还将积极探索混合所有制企业员工持股。横向上,新疆兵团将按照行政引导、市场主导、企业主体、政策支持的原则,充分确立企业的市场主体地位,以现有骨干企业为依托,以资本为纽带,推进企业跨兵团、师局和团场、跨区域、跨所有制并购重组、合资合作。纵向上,新疆兵团鼓励产业上下游关联度强的企业进行整合,打造全产业链竞争优势。
- 张辉
- 关键词：国企改革
- 生鲜乳中海氏肠球菌的分离鉴定
- 2024年
- 为了解生鲜乳中是否存在肠球菌污染,本试验从石河子某奶牛场无菌采集7份生鲜乳样品,通过细菌分离纯化、生化鉴定、16S rRNA和肠球菌RNA聚合酶α亚基(rpoA)编码基因的扩增和序列分析对分离菌株进行菌种鉴定,并利用纸片扩散法药敏试验和小鼠致病性试验确定分离菌株的药物敏感性和致病性。结果显示,从生鲜乳中分离到1株细菌,其培养特性和生化特性与肠球菌相似,16S rRNA基因测序结果显示其为肠球菌,rpoA基因测序结果显示其分子特征符合海氏肠球菌;药敏试验结果显示,分离海氏肠球菌对氨基糖苷类、林可胺类、磺胺类和多肽类药物表现一定的耐药性,而对四环素类、β-内酰胺类和部分喹诺酮类药物具有不同程度的敏感性;小鼠致病性试验结果显示,该菌株具有一定的致病性。本试验基于生鲜乳中海氏肠球菌的分离鉴定、耐药性和致病性分析,初步说明该牛场乳品中存在肠球菌污染的风险,且分离菌株具有一定耐药性和致病性,因此需在日常生产加工环节加强监测。
- 史超张伟张伟寇茜茜刘荣慧于海涛霍明凯于海涛张辉
- 关键词：耐药性
- 营造语文教学艺术氛围 激发学生强烈求知欲望
- 营造课堂教学的艺术氛围,可以说是语文课堂教学与数理化课堂教学的一个不同的突出特点。我想语文课应把握下面几个环节。一、导语要新颖俗话说"好的开头,等于成功的一半。"教育实践告诉我们:"兴趣是推动学生求知欲望的强大内在动力,...
- 张辉
- 文献传递
