张伟 作品数:26 被引量:81 H指数:6 供职机构: 石河子大学动物科技学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家重点基础研究发展计划 国家科技支撑计划 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 更多>>
绵羊7号染色体46 818 598位点在脂臀阿勒泰羊群体中的多态检测及分析 被引量:2 2014年 为了研究影响阿勒泰羊臀脂沉积的分子标记,研究以国外新近报道的7号染色体一处可能与尾脂性状关联的单核苷酸多态性(SNP)为研究对象,采用PCR-SSCP的方法检测该位点在我国脂臀型阿勒泰羊群体中的多态性,并分析该位点与脂臀性状的关联性。结果表明:绵羊7号染色体46 818 598位点SNP的各基因型在我国脂臀型阿勒泰羊群体中符合孟德尔分离定律,且等位基因比值接近1.0,该位点在阿勒泰羊群体中的分布没有差异。说明绵羊7号染色体46 818 598位点不能作为影响我国阿勒泰羊臀脂沉积性状的分子标记。 甘尚权 杨武 张伟 张伟 沈敏 刘守仁关键词:多态性 分子标记 绵羊 FABP4基因在阿勒泰羊尾脂沉积与代谢模型中的表达变化规律 被引量:16 2015年 FABP4(Fatty acid binding protein 4)参与细胞内脂肪酸的转运和脂肪酸代谢,是当前研究动物脂肪沉积与代谢的热门候选基因。为了研究FABP4基因在绵羊尾脂沉积与代谢中的作用,文章采用生物信息学方法分析了FABP4氨基酸序列在各物种中的保守性;利用半定量RT-PCR方法检测了该基因在阿勒泰羊主要组织中的表达;采用饥饿法成功建立了模拟阿勒泰羊尾脂沉积与代谢的动物模型,利用q PCR和i TRAQ(isobaric tags for relative and absolute quantitation)技术同时验证FABP4基因m RNA和蛋白在阿勒泰羊非饥饿组与饥饿组尾脂中的表达变化。序列分析结果表明,绵羊FABP4氨基酸序列在物种间高度保守,提示FABP4基因可能由于其重要的生物功能而在进化中表现出其物种的保守性。组织表达谱结果显示,FABP4 m RNA在阿勒泰羊肠脂与尾脂中均高丰度表达,暗示FABP4基因可能在脂肪中行驶着重要的生理生化功能。q PCR与i TRAQ结果显示,FABP4 m RNA与蛋白在两种极端条件下尾脂中的表达差异均不显著(P>0.05),表明FABP4基因可能不是绵羊尾脂沉积与代谢两种极端差异表型的决定基因。以上研究结果为进一步研究FABP4基因在绵羊尾脂中的生物功能奠定了基础。 许瑞霞 高磊 赵伟利 张伟 张伟 宋广超 甘尚权关键词:阿勒泰羊 绵羊X染色体59327581位点在3种不同尾型绵羊品种中的多态检测及分析 被引量:6 2013年 脂尾(臀)性状是绵羊逆境生存之需的必要性状,其在尾臀部位大量囤积脂肪的分子机理仍不明晰。为此,本研究以国外新近报道的X染色体一处可能与尾脂性状关联的SNP为研究对象,检测该位点在我国尾型极端差异的阿勒泰羊、湖羊以及细毛羊群体中的多态性,并验证该位点是否可作为1个有效的分子标记应用于低脂绵羊新品种培育。成功地扩增出了含绵羊X染色体59327581位点SNP的385bp片段,并采用PCR-SSCP方法进行SNP分型,后DNA测序只鉴定出1种基因型。结果表明,我国脂臀型阿勒泰羊、短脂尾型湖羊以及长瘦尾型中国美利奴羊在X染色体59327581位点处无多态性,说明我国绵羊X染色体59327581位点不能作为选育低脂绵羊品种的有效分子标记。 甘尚权 张伟 张伟 沈敏 梁耀伟 杨井泉 高磊 刘守仁关键词:等位基因 基因型 布鲁氏菌分泌蛋白BMCO基因缺失株的构建及生物学特性研究 被引量:4 2022年 【目的】试验旨在构建牛种布鲁氏菌S2308的多铜氧化酶(BMCO)基因缺失株,探究缺失株的生长特性及在宿主细胞中的存活能力,并分析BMCO蛋白的结构。【方法】利用PCR扩增BMCO基因上、下游同源臂和Kan基因,通过融合PCR技术将3段基因进行融合。融合片段与pMD19-T载体连接,制作牛布鲁氏菌S2308感受态细胞,1800 V电压、400Ω电阻电转化至牛种布鲁氏菌S2308感受态细胞中,涂布于Kan抗性的布鲁氏菌固体培养基中,筛选挑取阳性菌落,连续培养10代,检测第10代阳性菌落的遗传稳定性和生长变化趋势,将pBBR1MCS-4-BMCO融合质粒电转至能够稳定遗传BMCO基因缺失的牛种布鲁氏菌中,培养筛选阳性菌落。以感染复数(MOI)100分别用亲本株、缺失株、回补株侵染小鼠巨噬细胞RAW264.7,通过平板计数法分别检测3种菌株在细胞内的生存能力。【结果】试验成功获得片段大小为522、539、1054 bp的BMCO基因上、下游同源臂和Kan基因;成功构建pMD19-T-BMCO-Kan融合片段重组载体;获得稳定遗传的BMCO基因缺失株,命名为S2308ΔBMCO;成功构建BMCO基因回补株,命名为ΔBMCO::BMCOS2308;缺失株和亲本株表现的生长曲线相同,均在12 h达到对数生长期,30 h进入平台期;侵染小鼠巨噬细胞RWA264.7后,与亲本株S2308相比,S2308ΔBMCO株在胞内的生存能力极显著降低(P<0.01)。生物信息学分析结果表明,BMCO属于疏水蛋白,定位于胞质且含有大量的无规则卷曲、α-螺旋和延伸链,预示该蛋白具有多个结合位点。【结论】本研究成功构建了布鲁氏菌BMCO基因的缺失株和回补株,BMCO基因的缺失不影响其生长性能,但其在宿主细胞内的存活能力显著性降低,初步分析了BMCO蛋白的结构,为后续布鲁氏菌分泌蛋白的功能研究奠定基础。 邱润辉 关飞虎 王梓行 郭嘉 朱德馨 张伟 魏春燕 霍明凯 孙志华 张辉关键词:布鲁氏菌 Kisspeptins/GPR54神经内分泌系统对哺乳动物生殖活动的调控 被引量:7 2014年 哺乳动物的生殖活动受到神经内分泌系统的精确调控。近年来的研究表明,KISS-1基因的表达产物Kisspeptins及其G蛋白偶联受体(G protein coupled receptor 54,GPR54)在这一调控网络中发挥着重要作用,与哺乳动物青春期启动、发情排卵及季节性繁殖等过程密切相关。该文就近年来Kisspeptins/GPR54系统对哺乳动物生殖活动调控的研究进展进行简述。 张伟 张伟 张伟 王世银关键词:GPR54 KISS-1 生殖调控 长链非编码RNA Gm35082-202对布鲁氏菌引起的细胞焦亡的影响 2022年 【目的】研究长链非编码RNA(lncRNA)Gm35082-202对布鲁氏菌侵染引起的细胞焦亡的影响,旨在为研究lncRNA参与布鲁氏菌引起的先天性免疫反应提供参考。【方法】在Ensemble数据库中查找并分析Gm35082-202在染色体上的位置、外显子等信息;采用RNAfold在线软件预测Gm35082-202的二级结构;通过KEGG、GO富集分析预测Gm35082-202功能;用牛种布鲁氏菌(S2308)以感染复数(MOI)为0.01侵染小鼠巨噬细胞(RAW264.7),在侵染不同时间点(0、4、8、12、24、36、48 h)收集细胞,用实时荧光定量PCR检测Gm35082-202的表达量;利用LncLocator网站预测Gm35082-202亚细胞定位,用实时荧光定量PCR检测Gm35082-202在细胞质、细胞核的表达;将3条Gm35082-202 siRNAs (siRNA1、siRNA2和siRNA3)、siRNA NC转染RAW264.7细胞,实时荧光定量PCR检测Gm35082-202的表达量,筛选干扰效率最高的siRNA进行后续试验。Gm35082-202-siRNA、Gm35082-202-siRNA-NC转染RAW264.7细胞24 h后,再用布鲁氏菌侵染,以PBS为空白对照组(PBS),只用布鲁氏菌侵染的细胞为侵染对照组(Bru)。侵染24 h后收集PBS组、Bru组、Gm35082-202-siRNA组(Bru-siRNA)、Gm35082-202-siRNA-NC组(Bru-NC)细胞,用实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测各组细胞中NOD样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、Caspase-11、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-18的相对表达量,用ELISA法检测各组上清液中细胞因子IL-1β、IL-18分泌水平;通过菌落计数,比较各组布鲁氏菌的胞内生存能力。【结果】基因结构分析表明,Gm35082-202是大小为525 nt的lncRNA(Trianscript ID:ENSMUST00000208164.2),含有2个外显子,位于小鼠7号染色体(Chr7:100 324 295~100 326 967),其二级结构含有多个茎环及多分枝内部环结构;KEGG信号通路富集分析表明,Gm35082-202主要参与NOD样受体、钙调节以及细胞因子信号通路的调控;GO功能分析结果显示,Gm35082-202功能主要涉及DNA转录、线粒体组分以及� 邓兴梅 曹树珠 郭嘉 朱德馨 赵天艺 柴迎锦 张伟 史超 贾思锋 张辉关键词:布鲁氏菌 绵羊X染色体59194976位点多态分析及其与尾(臀)脂性状相关性研究 被引量:6 2013年 尾脂沉积能力在脂尾型绵羊和瘦尾型绵羊间存在很大的差异,但其沉积脂肪的遗传特性与分子机制仍不明晰。为此,本研究选择尾型极端差异的阿勒泰羊(巨型脂臀)、湖羊(短脂尾)和黑萨福克羊(长瘦尾),采用PCR-RFLP方法检测绵羊X染色体59194976位点多态性,分析其与尾(臀)脂沉积能力的相关性。结果表明:在阿勒泰羊群体中G等位基因属优势等位基因,其两等位基因比值(G/A)分别是湖羊和黑萨福克羊的6倍和68倍,且G等位基因在阿勒泰羊中趋于纯合。卡方检验结果表明,阿勒泰羊在该位点均处于HardyWeinberg平衡状态(p>0.05),而湖羊和黑萨福克羊在该位点均处于Hardy-Weinberg极不平衡状态(p<0.01)。以上结果提示,绵羊X染色体59194976位点SNP可作为理想的分子标记应用于高、低脂绵羊品种选育。 王世银 张伟 张伟 张伟 沈敏 李欢 梁耀伟 杨井泉 高磊关键词:等位基因 基因型 分子标记 不同繁殖状态阿勒泰羊下丘脑MTNR1A基因表达变化与其季节性繁殖的关系 被引量:5 2015年 【目的】分析不同繁殖状态阿勒泰羊下丘脑褪黑素受体1A(MTNR1A)基因表达情况与其季节性繁殖之间的关系,为深入研究绵羊季节性繁殖的调控机理奠定基础。【方法】采用RT-PCR对发情盛期阿勒泰羊不同组织中的MTNR1A基因表达情况进行检测,并以q RT-PCR测定分析乏情期及发情初期、发情盛期、发情末期和间情期阿勒泰羊下丘脑MTNR1A基因的表达变化情况。【结果】MTNR1A基因在发情盛期阿勒泰羊的下丘脑、垂体、卵巢和脾脏中高表达,而在心肌、肺脏和骨骼肌中不表达或表达量极低。秋季发情季节阿勒泰羊下丘脑中MTNR1A基因的表达量极显著高于夏季乏情季节(P<0.01),但在发情前期、发情盛期、发情末期和间情期的表达量差异不显著(P>0.05);夏至后20 d下丘脑中MTNR1A基因的表达量显著高于夏至前20 d(P<0.05)。【结论】褪黑素及其受体在阿勒泰羊发情启动过程中发挥重要的调控作用。 王世银 石国庆 甘尚权 宋广超 张伟 张伟关键词:阿勒泰羊 下丘脑 季节性繁殖 单增李斯特菌IspD蛋白生物信息学分析及表达纯化 被引量:1 2023年 【目的】对单增李斯特菌IspD蛋白的潜在生物学功能进行预测分析,并表达纯化IspD蛋白,为后续IspD蛋白的研究提供理论支撑。【方法】从NCBI中获得单增李斯特菌IspD的编码序列(基因ID:986270)和氨基酸序列(登录号:NP_464611.1),运用生物信息学软件对IspD蛋白编码序列进行开放阅读框分析,对氨基酸序列进行基本特性、空间结构、抗原表位、修饰化位点、蛋白互作及相似性等预测分析。对IspD蛋白编码序列进行密码子优化并合成,采用无缝克隆法构建重组质粒pET-32a-IspD并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,将测序和双酶切验证正确的阳性克隆经IPTG低温过夜诱导表达,采用镍柱亲和层析法纯化得到IspD融合蛋白,利用SDS-PAGE和Western blotting验证IspD融合蛋白表达、纯化及反应原性。【结果】IspD蛋白编码基因为lmo1086,全长711 bp,共有4个开放阅读框,其中ORF1为最长的开放阅读框,可编码236个氨基酸。氨基酸序列分析显示,IspD蛋白无跨膜结构域、信号肽,是一种亲水性蛋白,亚细胞定位于细胞质中,为2-C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸胞苷酰基转移酶。α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲参与了IspD蛋白二级结构的组成,三级结构模型预测与二级结构特点相符。IspD蛋白具有多个T、B细胞抗原表位、固定无序结构域、磷酸化、糖基化、甲基化及乙酰化修饰位点。蛋白互作分析显示,IspD蛋白与DXR、IspF、ipk等多个蛋白存在相互作用,IspD与其相互作用最强的DXR蛋白之间通过氢键、盐桥等实现连接和相互作用。试验成功构建了表达菌株pET-32a-IspD,SDS-PAGE结果显示,在上清中高表达IspD融合蛋白;Western blotting验证显示,纯化的IspD融合蛋白具有反应原性。【结论】IspD蛋白具有成为候选诊断、疫苗研发和药物靶点等的潜在价值。试验表达纯化得到IspD融合蛋白,可为后续IspD蛋白具体功能的研究提供理论依 史超 张伟 张伟 张梦琦 何欣 赵明彦 周霞 周霞 张辉关键词:单增李斯特菌 生物信息学 纯化 X染色体一处新发现的SNP位点在脂尾(臀)、瘦尾绵羊群体中的多态检测及分析 被引量:9 2013年 脂尾(臀)性状是绵羊逆境生存之需的必要性状,其在尾臀部位大量囤积脂肪的分子机理亟待解析。为此,本研究以国外新近报道的X染色体一处可能与尾脂性状相关的SNP为研究对象,检测该位点在我国巨臀脂型阿勒泰羊、短脂尾型湖羊以及瘦尾萨福克羊群体中的多态性,并验证该位点是否可作为一个有效的分子标记应用于高、低脂绵羊新品种培育。本研究成功地扩增出了含绵羊X染色体59257971位点SNP的170 bp片段,并采用PCR-RFLP方法进行SNP分型。研究结果表明我国脂臀型阿勒泰羊、短脂尾型湖羊和瘦尾萨福克羊在X染色体59257971位点均以AA基因型为主要基因型,3个群体中均没有发现GG基因型,说明脂臀(尾)与瘦尾绵羊品种间、臀尾异常丰满的阿勒泰羊与尾脂较为丰满的湖羊群体间等位基因并无明显差异,暗示该位点不能作为选育我国高、低脂绵羊品种的有效分子标记。 甘尚权 张伟 张伟 宋天增 沈敏 梁耀伟 杨井泉 高磊 刘守仁关键词:基因型 等位基因