张开亮
- 作品数：7 被引量：11H指数：2
- 供职机构：第四军医大学唐都医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学核科学技术化学工程更多>>
- DNA甲基化与食管腺癌关系研究进展
- 2009年
- 癌症本质上是一种多种因素导致的基因疾病。作为肿瘤形成假说中的重要补充内容,表观遗传学已经成为新的研究中心。DNA甲基化是人类基因组发生最为常见的一种表观遗传学事件,因而研究甲基化与肿瘤的关系成为当前分子生物学的热点之一。这篇综述是关于DNA甲基化与食管腺癌的研究进展,包括DNA高甲基化异常与食管腺癌的发生,以及针对甲基化的检测手段,诊断,治疗以及预后。
- 张开亮张峰张涛
- 关键词：DNA甲基化食管腺癌预后
- microRNA-15a模拟物对人关节软骨细胞增殖与凋亡的影响被引量：7
- 2013年
- 目的:近年来研究表明,关节软骨细胞凋亡在骨关节炎发病过程中起到了重要的作用,本文旨在探讨microrna-15a模拟物对于原代人膝关节软骨细胞增殖与凋亡的影响。方法:取人外伤性截肢后的膝关节软骨,采用双酶消化法分离获得人膝关节软骨细胞,并进行体外培养,通过甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色进行软骨细胞鉴定。将培养的软骨细胞传代后取第1代细胞,分为实验组和对照组,实验组采用mir-15a模拟物(has-mir-15a mimics)转染软骨细胞,上调软骨细胞内mir-15a的表达量;对照组分为阴性对照组、空白对照组。采用MTT法测定细胞增殖曲线,流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果:原代细胞中细胞呈多角形、圆形与梭型,贴壁生长;甲苯胺蓝染色胞质呈深蓝色,Ⅱ型胶原染色胞质呈黄褐色,为特异性染色。经统计学分析,实验组与对照组相比增殖速率明显下降(P<0.05)。实验组凋亡率(7.13%±0.57)与阴性对照组凋亡率(2.66%±0.15)相比明显增高(P<0.05)。结论:采用双酶消化法成功分离并培养具有生物学特性的原代人膝关节软骨细胞,通过转染mir-15a模拟物外源性增加关节软骨细胞内mir-15a表达量可显著促进其凋亡并抑制其增殖,为阐明骨关节炎发病机制提供了新的理论依据,为临床治疗提供了新的靶点。
- 颜世举靳雷肖春王鑫孙聪张开亮裘秀春马保安范清宇
- 关键词：软骨细胞骨关节炎细胞增殖
- miR-155抑制物对骨肉瘤细胞增殖与凋亡的影响被引量：4
- 2013年
- 目的:观察miR-155抑制物对于骨肉瘤细胞系SOSP-9607细胞增殖和凋亡的影响,探讨miR-155抑制物在骨肉瘤细胞生物学行为中所起的作用。方法:实验分3组,分别为实验组、阴性对照组和正常细胞对照组。实验组转染miR-155抑制物(hsa-miR-155 inhibitors)抑制其细胞内miR-155活性,阴性对照组转染抑制物阴性对照核苷酸序列(microRNA inhibitor N.C),正常细胞对照组不做转染。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色实验测定3组细胞24小时、48小时、72小时和96小时的吸光度(OD)值,并绘制生长曲线。细胞周期与凋亡的测定采用流式细胞仪检测。结果:两个对照组细胞增殖速度无明显差异,而实验组细胞增殖速度则明显减慢。两对照组细胞凋亡率未见明显差异,而实验组细胞凋亡率(8.5±0.4)%与阴性对照组凋亡率(1.2±0.3)%、空白对照组凋亡率(1.1±0.2)%相比则明显增高(P<0.01)。相比于对照组,实验组G0/G1期细胞所占比例明显增加,与此同时G2/M期与S期细胞比例则显著减少(P<0.01)。结论:miR-155抑制物可通过抑制成骨肉瘤细胞系SOSP-9607细胞内miR-155的活性,显著抑制其增殖能力,促进细胞凋亡和细胞G0/G1期阻滞。miR-155可能会成为骨肉瘤诊治的新靶点。
- 张开亮任坤张迎龙闫康赵广义马保安
- 关键词：骨肉瘤MIR-155细胞增殖细胞凋亡
- 人软骨细胞压力实验模型的建立与评估
- 2014年
- 目的:人承重关节内受到的多种机械应力(剪切力、张力、静水压力等)在调节关节软骨细胞的生理功能方面起着重要作用。建立对人膝关节软骨细胞施加不同强度周期性静水压的压力模型,观察不同压力强度下软骨细胞的生长形态、增殖和凋亡情况。方法:采用酶消化法分离培养正常成人膝关节软骨细胞,将培养的第3代软骨细胞分为6组:对照组、0.5 MPa组、1.0 MPa组、3.0MPa组、5.0 MPa组、8.0 MPa组,应用高压恒温静水压加载系统分别给予各组不同强度压力作用5 d,每日1 h。甲苯胺蓝染色法和Ⅱ型胶原免疫组织化学染色法鉴定软骨细胞,倒置相差显微镜观察细胞形态和生长状况,流式细胞术检测细胞凋亡,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法绘制细胞生长曲线。结果:与对照组相比,0.5 MPa、3.0 MPa组无明显差异(P>0.05);1.0 MPa组能促进软骨细胞增殖,抑制凋亡(P<0.05);5.0 MPa组出现细胞增殖能力下降,细胞活力降低,凋亡率增加(P<0.05);8.0 MPa组则表现出明显的细胞增殖的抑制和细胞凋亡趋势(P<0.05),以及细胞形态学的改变。结论:不同强度的周期性压力对人软骨细胞的新陈代谢产生了不同影响,尤其在软骨细胞的增殖和凋亡水平方面。利用本压力实验模型能体外模拟人负重关节软骨细胞的受压情况,初步确定了人软骨细胞压力实验中压力梯度的选择。为软骨细胞的压力损伤研究提供了实验数据,为进一步探寻压力作用与骨关节炎的关系提供了实验平台。
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- 关键词：人软骨细胞
- MiR-29c模拟物对骨肉瘤细胞侵袭和迁移能力的影响
- 2015年
- 目的:观察miR-29c在具有不同转移能力的F4和F5M2细胞系中的表达差异;研究miR-29c模拟物对骨肉瘤细胞侵袭和迁移能力的影响。方法:利用qRT-PCR技术检测F4与F5M2间miR-29c的表达差异;将骨肉瘤细胞F5M2分为3组,运用细胞转染技术分别对两组转染miR-29c模拟物、模拟物阴性对照,第3组不作处理,随后用qRT-PCR技术检测3组间miR-29c的表达差异。Transwell法检测3组不同处理的F5M2细胞的侵袭和迁移能力是否存在差异。结果:MiR-29c在F4和F5M2细胞系中表达差异显著,miR-29c在高转移性的F5M2细胞中表达水平显著下降。与阴性对照组和空白组相比,转染miR-29c模拟物的F5M2细胞侵袭和迁移能力均明显减弱,且差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:MiR-29c在高转移性骨肉瘤细胞中低表达,且miR-29c模拟物具有抑制骨肉瘤细胞侵袭和转移的作用。MiR-29c有可能作为骨肉瘤转移基因治疗的一个新靶点。
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- 关键词：骨肉瘤迁移
- 周期性静水压对人软骨细胞活性的时间依赖性影响
- 2014年
- 目的:目前软骨细胞体外研究多为动物模型,本研究以正常成人软骨细胞研究对象,探讨在适当强度、类型的周期性静水压下不同持续时间对软骨细胞活性的影响,探究人软骨细胞体外培养、构建组织工程软骨合适的时间参数。方法:将体外培养的正常成人膝关节软骨第3代软骨细胞随机分为4组:4 h组、8 h组、12 h组、对照组。应用高压恒温静水压加压系统,充入含有95%的空气和5%的CO2混合气体,以2 MPa压力大小对3个实验组进行周期性加压,分别每天加压4 h、8 h、12 h,三组加压时间均为10 d。10 d后倒置相差显微镜下观察4组细胞形态,甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色进行细胞鉴定,并对Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色行半定量分析。MTT法分析各组软骨细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:3个实验组细胞增殖均快于对照组(P<0.05),与对照组相比4 h组、8 h组均抑制凋亡,12 h组促进凋亡。12 h组第6代细胞开始细胞形态即逐渐发生改变。结论:软骨细胞的增殖和凋亡水平对静水压的作用时间具有依赖性。在2 MPa静水压力下,8 h组更适合细胞生长,细胞活性更强。为进一步构建组织工程软骨人类模型及组织工程软骨的临床应用提供了一定的实验基础。
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- 关键词：人软骨细胞
- Mir-29c模拟物对骨肉瘤细胞侵袭和迁移能力的影响
- 目的：观察miR-29c在不同转移能力的F4和F5M2细胞系中的表达差异;研究miR-29c模拟物对骨肉瘤细胞侵袭和迁移能力的影响。方法：利用qRT-PCR技术检测F4与F5M2间miR-29c的表达差异;将骨肉瘤细胞F...
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