靳雷
- 作品数：7 被引量：24H指数：3
- 供职机构：第四军医大学唐都医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- microRNA-194模拟物对成骨肉瘤细胞系SOSP_9607生物学特性的影响被引量：2
- 2011年
- 目的:观察miR-194模拟物对于成骨肉瘤细胞系SOSP_9607细胞增殖、周期和凋亡的影响。方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪测定细胞凋亡和周期。将SOSP_9607细胞分为对照组和实验组,对照组分为阴性对照和正常细胞对照组。实验组采用miR-194模拟物(hsa-miR-194mimics)转染成骨肉瘤细胞系SOSP_9607,增强SOSP_9607细胞内miR-194的活性。结果:与对照组比较,实验组细胞的增殖能力明显下降。实验组凋亡率(10.1±0.22)%与阴性对照组凋亡率(3.3±0.19)%相比明显增高(P<0.01)。与对照组比较,实验组细胞周期G0/G1细胞比例显著增加,G2/M期细胞比例显著减少,S期细胞比例显著减少(P<0.01)。结论:通过转染miR-194模拟物增强SOSP_9607细胞中miR-194的活性对SOSP_9607细胞的增殖和凋亡造成显著影响。
- 靳雷高杰刘云燕马琼杨彤涛裘秀春范清宇马保安
- 关键词：骨肉瘤细胞增殖细胞凋亡
- 周期性静水压对人软骨细胞IL-1β和MMP-3代谢的影响被引量：1
- 2014年
- 目的:以正常成人软骨细胞及OA软骨细胞为研究对象,探讨在静水压作用下正常软骨细胞IL-1β和MMP-3代谢的变化,以及与OA软骨细胞之间的差异。同时观察在力学信号刺激下软骨细胞的IL-1β和MMP-3代谢有无相关性。方法:将体外培养的正常成人膝关节软骨第3代软骨细胞随机分为加压组和对照组。甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色进行细胞鉴定。将加压组细胞放入高压恒温静水压加压系统,冲入含有95%的空气和5%的CO2混合气体,以10MPa进行加压2h,共加压5d。分别于加压前、加压第3天、加压第5天后取加压组、对照组和OA组细胞培养液检测IL-1β、MMP-3含量。同时采用MTT法分析3组细胞的增殖情况。对三组细胞中IL-1β与MMP-3的水平做双变量相关分析,采用方差分析对三组标本间的IL-1β、MMP-3含量进行比较。结果:各组细胞IL-1β与MMP-3两者间存在正相关关系。OA组细胞中IL-1β与MMP-3含量高于加压组和对照组,加压组高于对照组。加压组、OA组软骨细胞的生长曲线与对照组相比增殖高峰降低,平台时间缩短。结论:10MPa间歇性静水压加压可抑制软骨细胞增殖,增加IL-1β与MMP-3分泌。
- 肖春颜世举靳雷王鑫裘秀春范清宇马保安
- 关键词：IL-1ΒMMP-3
- microRNA-15a模拟物对人关节软骨细胞增殖与凋亡的影响被引量：7
- 2013年
- 目的:近年来研究表明,关节软骨细胞凋亡在骨关节炎发病过程中起到了重要的作用,本文旨在探讨microrna-15a模拟物对于原代人膝关节软骨细胞增殖与凋亡的影响。方法:取人外伤性截肢后的膝关节软骨,采用双酶消化法分离获得人膝关节软骨细胞,并进行体外培养,通过甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色进行软骨细胞鉴定。将培养的软骨细胞传代后取第1代细胞,分为实验组和对照组,实验组采用mir-15a模拟物(has-mir-15a mimics)转染软骨细胞,上调软骨细胞内mir-15a的表达量;对照组分为阴性对照组、空白对照组。采用MTT法测定细胞增殖曲线,流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果:原代细胞中细胞呈多角形、圆形与梭型,贴壁生长;甲苯胺蓝染色胞质呈深蓝色,Ⅱ型胶原染色胞质呈黄褐色,为特异性染色。经统计学分析,实验组与对照组相比增殖速率明显下降(P<0.05)。实验组凋亡率(7.13%±0.57)与阴性对照组凋亡率(2.66%±0.15)相比明显增高(P<0.05)。结论:采用双酶消化法成功分离并培养具有生物学特性的原代人膝关节软骨细胞,通过转染mir-15a模拟物外源性增加关节软骨细胞内mir-15a表达量可显著促进其凋亡并抑制其增殖,为阐明骨关节炎发病机制提供了新的理论依据,为临床治疗提供了新的靶点。
- 颜世举靳雷肖春王鑫孙聪张开亮裘秀春马保安范清宇
- 关键词：软骨细胞骨关节炎细胞增殖
- siRNA干扰FoxM1基因表达对人骨肉瘤MG63细胞增殖与凋亡影响研究被引量：11
- 2014年
- 目的通过抑制骨肉瘤细胞株MG63中FoxM1基因表达,观察对骨肉瘤细胞系增殖与凋亡的影响。方法采用蛋白质印迹法检测不同人骨肉瘤细胞株MG63和SOSP-9607中FoxM1基因的表达。将骨肉瘤细胞株MG63分为实验组、阴性对照组和空白对照组,实验组转染FoxM1特异性siRNA(FoxM1-siRNA),阴性对照组转染阴性对照siRNA,空白对照组不做处理。实时-聚合酶链反应(Real-time PCR)和蛋白质印迹法检测转染前后FoxM1基因在mRNA及蛋白表达水平的变化;四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖率,流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果人骨肉瘤细胞株MG63和SOSP-9607中存在FoxM1基因的表达。实验组MG63细胞转染siRNA后,FoxM1的mRNA表达为0.39±0.09,低于阴性对照组的0.91±0.07,t=7.92,P<0.001;也低于空白对照组的0.96±0.08,t=8.68,P<0.001。实验组FoxM1蛋白表达为0.31±0.06,显著低于阴性对照组的0.81±0.10,t=7.20,P<0.001;也低于空白对照组的0.89±0.09,t=8.35,P<0.001。实验组MG63细胞增殖率为0.36±0.03,显著低于阴性对照组的0.61±0.02,t=12.86,P<0.001;也低于空白对照组的0.65±0.02,t=14.92,P<0.001。实验组MG63细胞凋亡率为(13.69±1.15)%,显著高于阴性对照组的(2.38±0.90)%,t=14.16,P<0.001;也高于空白对照组的(2.87±0.86)%,t=13.54,P<0.001。结论人骨肉瘤细胞株中存在FoxM1蛋白的表达;特异性siRNA可下调骨肉瘤细胞株MG63中FoxM1基因的表达,对细胞的增殖具有负性调控作用,并能诱导细胞凋亡。
- 颜世举肖春靳雷王鑫韩康马保安范清宇
- 关键词：骨肉瘤FOXM1RNA干扰
- 周期性静水压对人软骨细胞活性的时间依赖性影响
- 2014年
- 目的:目前软骨细胞体外研究多为动物模型,本研究以正常成人软骨细胞研究对象,探讨在适当强度、类型的周期性静水压下不同持续时间对软骨细胞活性的影响,探究人软骨细胞体外培养、构建组织工程软骨合适的时间参数。方法:将体外培养的正常成人膝关节软骨第3代软骨细胞随机分为4组:4 h组、8 h组、12 h组、对照组。应用高压恒温静水压加压系统,充入含有95%的空气和5%的CO2混合气体,以2 MPa压力大小对3个实验组进行周期性加压,分别每天加压4 h、8 h、12 h,三组加压时间均为10 d。10 d后倒置相差显微镜下观察4组细胞形态,甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色进行细胞鉴定,并对Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色行半定量分析。MTT法分析各组软骨细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:3个实验组细胞增殖均快于对照组(P<0.05),与对照组相比4 h组、8 h组均抑制凋亡,12 h组促进凋亡。12 h组第6代细胞开始细胞形态即逐渐发生改变。结论:软骨细胞的增殖和凋亡水平对静水压的作用时间具有依赖性。在2 MPa静水压力下,8 h组更适合细胞生长,细胞活性更强。为进一步构建组织工程软骨人类模型及组织工程软骨的临床应用提供了一定的实验基础。
- 肖春靳雷王鑫颜世举韩康张开亮孙聪裘秀春范清宇马保安
- 关键词：人软骨细胞
- 异体肿瘤mRNA电转染DC瘤苗的特异性抗骨肉瘤免疫学效应被引量：3
- 2013年
- 目的应用肿瘤细胞来源的mRNA转染至树突状细胞(dendritic cells,DCs)已逐渐成为一种颇具潜能的抗肿瘤免疫治疗新方法。但目前针对异体肿瘤来源的mRNA转染DCs的瘤苗研究尚不够系统明晰。本研究旨在探讨异体大鼠骨肉瘤细胞mRNA电转染树突状细胞瘤苗在荷瘤动物模型诱导的特异性抗肿瘤免疫学效应。方法提取UMR108细胞mRNA的步骤分为2步,首先采用Trizol法提取肿瘤细胞总RNA,继而采用磁珠法纯化mRNA。采用电穿孔的方法将mRNA转染至SD大鼠骨髓单核细胞来源的DCs制备瘤苗,通过荷瘤动物模型观察其特异性抗肿瘤效应。结果异体骨肉瘤mRNA转染DCs瘤苗可诱导针对自体肿瘤特异性的CTLs效应,且该效应可以被抗MHC-I抗体加以抑制。在体内预防保护作用和主动免疫治疗实验中,均有70%的异体mRNA-DC瘤苗接种大鼠可以有效地抵抗肿瘤细胞攻击而得以长期存活。结论该研究验证了异体肿瘤细胞来源的mRNA可以对特异性肿瘤治疗提供抗原信息,尤其是以DC为基础的免疫治疗中优势明显,可能为很多尚缺少特异性抗原的肿瘤患者,提供了更多的治疗选择。
- 于哲耿捷戴霞靳雷范清宇
- 关键词：骨肉瘤细胞毒性T淋巴细胞
- 人软骨细胞压力实验模型的建立与评估
- 2014年
- 目的:人承重关节内受到的多种机械应力(剪切力、张力、静水压力等)在调节关节软骨细胞的生理功能方面起着重要作用。建立对人膝关节软骨细胞施加不同强度周期性静水压的压力模型,观察不同压力强度下软骨细胞的生长形态、增殖和凋亡情况。方法:采用酶消化法分离培养正常成人膝关节软骨细胞,将培养的第3代软骨细胞分为6组:对照组、0.5 MPa组、1.0 MPa组、3.0MPa组、5.0 MPa组、8.0 MPa组,应用高压恒温静水压加载系统分别给予各组不同强度压力作用5 d,每日1 h。甲苯胺蓝染色法和Ⅱ型胶原免疫组织化学染色法鉴定软骨细胞,倒置相差显微镜观察细胞形态和生长状况,流式细胞术检测细胞凋亡,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法绘制细胞生长曲线。结果:与对照组相比,0.5 MPa、3.0 MPa组无明显差异(P>0.05);1.0 MPa组能促进软骨细胞增殖,抑制凋亡(P<0.05);5.0 MPa组出现细胞增殖能力下降,细胞活力降低,凋亡率增加(P<0.05);8.0 MPa组则表现出明显的细胞增殖的抑制和细胞凋亡趋势(P<0.05),以及细胞形态学的改变。结论:不同强度的周期性压力对人软骨细胞的新陈代谢产生了不同影响,尤其在软骨细胞的增殖和凋亡水平方面。利用本压力实验模型能体外模拟人负重关节软骨细胞的受压情况,初步确定了人软骨细胞压力实验中压力梯度的选择。为软骨细胞的压力损伤研究提供了实验数据,为进一步探寻压力作用与骨关节炎的关系提供了实验平台。
- 王鑫靳雷肖春颜世举孙聪张开亮裘秀春范清宇马保安
- 关键词：人软骨细胞
