吴宁华
- 作品数：33 被引量：45H指数：3
- 供职机构：中国医学科学院中国协和医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金卫生部科技专项基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 人IL-2Rα链基因负调控元件结合蛋白的分离纯化
- 1999年
- 淋巴细胞表面高亲和力IL-2R的出现受IL－2Ra基因的诱导表达控制，而IL－2Ra链基因的表达受到严格的时空的调控。在IL-2Ra基因上游除存在正调控元件外还存在负调控元件（-391TCATCCCAGG-381，NRE）及其下游不完全反转重复序列（-153CCTGGTTTGA-143NIRS）。本组曾通过紫外交联实验发现Jurkat细胞有一种蛋白质与NIRS和NRE特异结合。本文利用肝素-亲和柱层析及序列特异DNA亲和层析认1010Jurkat细胞中获得了分子量约为75kD的NRE特异结合蛋白。EMSA实验表明，纯化后的蛋白与NRE所形成的结合物能被NIRS及HIVLTR的负调控元件所竞争，提示该NRE结合蛋白不仅可能参与IL-2Ra基因的转录调控，而且可能在HIV基因表达过程中起某种作用。
- 张玉健邢光新莽锐程小款衡凤燕吴宁华沈琲
- 关键词：结合蛋白DNA
- 热激活Rac-MEKK-JNK信号通路与hsp90β基因表达被引量：3
- 2002年
- 目的探讨Rac-MEKK-JNK(Rac-丝裂原活化的蛋白激酶的激酶的激酶-C-junN端蛋白激酶)信号通路对热诱导hsp90β基因表达的调控作用以及Hsp90蛋白对Rac信号通路传递的调节过程。方法将载体PcDNA3、显性负突变Rac(DN-Rac),显性负突变MEKK(DN-MEKK)和显性负突变JNK(DN-JNK)表达质粒分别与hsp90β基因转录调控片段介导的氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因质粒β3.1共转染Jurkat和LETPa-2细胞,采用以竞争性RT-PCR为基础的系统检测CAT报告基因转录水平。用Western印迹分析检测转染了DN-Rac、DN-MEKK和DN-JNK的细胞在热刺激前后c-Jun的表达水平和磷酸化状态。用体外激酶活性分析法检测geldanamycin(GA)对热诱导的JNK活性的影响。结果转染DN-Rac、DN-MEKK及DN-JNK均能抑制42℃1h诱导的β3.1报告基因的表达,Jurkat细胞中CAT的热诱导表达分别为对照组的(72.8±5)%、(60±13.2)%及(47.7±12.1)%;LETPa-2细胞中CAT的热诱导表达分别为对照组的(16.17±5.1)%、(50.2±8.7)%及(47.5±10)%。转录因子c-Jun的表达和磷酸化水平也在一定程度上被抑制。GA处理细胞可明显抑制热诱导激活的JNK激酶活性和c-Jun的磷酸化水平,但不影响JNK和c-Jun的蛋白表达水平。结论Rac-MEKK-JNK通路参与hsp90β基因的热诱导表达,hsp90可能对热激活化?
- 李晓燕路程吴宁华沈珝琲
- 关键词：HSP90Β基因基因表达调控
- 人Jurkat细胞GAGA样元件结合蛋白cDNA的克隆被引量：3
- 2002年
- 目的探讨人Jurkat细胞中是否存在与GAGA样元件相互作用的结合蛋白。方法采用酵母单杂交体系,在HTLV-1转化的Jurkat细胞cDNA文库中筛选与GAGA样元件相互作用的蛋白;提取人Jurkat细胞总RNA,应用反转录反应标记cDNA探针,与候选的阳性克隆杂交。结果共获得9个阳性克隆,其中6个阳性克隆的插入片段可以与cDNA探针杂交。结论在人Jurkat细胞中有与GAGA样元件相关的结合蛋白。
- 莫志成陆瑜高超吴宁华沈珝琲
- 关键词：JURKAT细胞基因调控
- p53反式结合hsp90β基因被引量：2
- 2002年
- 目的探讨hsp90β基因中p53结合位点(+31/+60)是否参与p53与hsp90β基因的反式结合,以进一步揭示该位点在p53调节hsp90β基因转录中的作用。方法将含有p53结合位点的hsp90β基因片段插入质粒pBS-SK,然后将它与突变引物和选择引物一起依次退火和延伸,经过两轮细菌转化,酶切筛选出突变阳性质粒后进行序列分析。采用电泳迁移率变更测定(EMSA)检测突变后基因片段与转染p53表达质粒的Jurkat细胞核抽提物的结合。结果序列分析证实p53结合位点第2个半位点核心序列的两个碱基已发生突变,EMSA结果表明,突变后基因片段不能与p53结合。结论hsp90β基因中p53结合位点的核心序列在p53与hsp90β基因的反式结合中起关键作用。
- 陈丽玲吴宁华沈珝琲关新民
- 关键词：定点突变P53基因
- 白细胞介素2受体α亚基参与Jurkat细胞凋亡的调节被引量：4
- 2001年
- T淋巴细胞表面的高亲和力白细胞介素 2受体 (IL 2R)由α ,β及γ三种亚基组成 ,其中只有IL 2Rα亚基具有特异结合IL 2的活性 ,目前对IL 2Rα亚基的确切的功能尚不清楚。我们将IL 2RαcDNA反意表达质粒转染Jurkat细胞后 ,经Western印迹 ECL分析发现 ,细胞内出现了细胞凋亡早期特异的多聚二磷酸腺核糖聚合酶 [Poly(ADP ribose)polymerase ,PARP]的 89kD断裂片段 ,此结果提示 ,IL
- 胡晶晶李宏帆程小款衡凤燕吴宁华沈珝琲
- 关键词：细胞凋亡T淋巴细胞
- 检测4种热休克基因表达水平的RT-PCR体系的建立及其应用被引量：1
- 2002年
- 目的建立能同时检测人Jurkat细胞中4种热休克基因mRNA表达水平的RT-PCR体系。方法采用基因克隆、基因重组、体外转录、RT-PCR技术,建立能同时检测细胞中4种热休克基因的RT-PCR体系,并将此体系用于检测SW13细胞中热休克基因的表达。结果构建了用于4种热休克基因mRNA检测的内参照质粒,并经体外转录成内参照RNA(i-RNA);用于SW13细胞中结果显示:hsp70、hsp90α呈典型的热诱导表达,hsp60和hsp90β具有较高水平的组成性表达,并且呈不同程度的热诱导表达。结论新构建的RT-PCR体系可以用于检测人Jurkat细胞中4种热休克基因mRNA的表达水平。
- 李宏帆刘兴荣衡凤燕吴宁华沈珝琲
- 关键词：基因表达热休克基因逆转录一聚合酶链反应JURKAT细胞
- 人骨钙素成熟肽编码基因聚合酶链反应扩增及其克隆的研究
- 1994年
- 人骨钙素成熟肽编码基因聚合酶链反应扩增及其克隆的研究刘云山，周学瀛，沈，孟迅吾，吴宁华骨钙素是由非增殖期成骨细胞特异合成和分泌的一种非胶原骨蛋白。其结构基因由３个内含子和４个外显于组成，４９个氨基酸的人骨钙素由第三、四外显子各一部分编码［１］（图１）...
- 刘云山周学瀛孟迅吾吴宁华沈珝琲
- 关键词：骨钙素聚合酶链反应
- 恶性疟原虫红内期cDNA库的组建及克隆的筛选被引量：4
- 1989年
- 从体外培养的恶性疟原虫中分离纯化总mRNA,将其逆转录为cDNA,组入表达型载体λgt11,建立了恶性疟原虫中国海南岛分离株FCC1/HN红内期cDNA库。经大肠杆菌表达后用抑制性单克隆抗体M26-32、F6-C2、F6-D3筛选。杭有27个克隆与M26-32作用、34个克隆与M26-32和F6-C2都反应。对筛选结果进行了分析。这些阳性克隆的表达产物有可能作为疟疾疫苗的组成部分。
- 程勤沈珝琲强伯勤余曙华吴宁华陈菊凤樊汝恭程小款李文渌毛映红刘尔翔
- 关键词：疟原虫单克隆抗体
- 人白细胞介素2受体α链在因第三内含子的克隆与核苷酸序列分析
- 1998年
- 应用ＰＣＲ技术扩增了人白细胞介素２受体ａ链（ＩＬ２Ｒα）基因第三内含子２５ｋｂ片段，并成功地克隆到ｐＢＳＳＫ载体中。构建了一系列亚克隆并测定了２５ｋｂ全核苷酸序列，其中２２２８ｂｐ碱基序列为国内外首次测定，其数据已被ＧｅｎＢａｎｋ接受，接受号为Ｕ５６３８９。通过计算机分析发现ＩＬ２Ｒα基因第三内含子具有典型的Ｇ↓ＧＵ……Ｐｙｒｉｃｈ（∽１５ｂｐ）ＮＣＡＧ↓Ｇ结构特点，但在３’剪接点５’上游５００ｂｐ范围内未发现分支点结构。
- 张晶张晶吴宁华
- 关键词：内含子PCR克隆核苷酸序列
- 地塞米松对人白细胞介素2受体α链基因表达的影响被引量：2
- 1996年
- 白细胞介素２／白细胞介素２受体（ＩＬ－２／ＩＬ－２Ｒ）系统在免疫系统中起极重要作用，研究糖皮质激素对ＩＬ－２／ＩＬ－２Ｒ系统的影响有助于了解糖皮质激素免疫调节作用的分子机理。通过荧光素酶报告基因的表达及狭缝杂交，发现在Ｊｕｒｋａｔ细胞中地塞米松对ＩＬ－２Ｒα链基因ｍＲＮＡ的基础表达及ＰＨＡ的诱导表达均有直接促进作用，这种正调节作用与ＩＬ－２Ｒα链基因５＇上游一４８２ｂｐ以内近端已知的诱导转录元件无关，且与ＰＨＡ的活化机制不同，两者间具有协同效应。
- 关中晖吴宁华沈珝琲
- 关键词：白细胞介素2受体地塞米松基因表达
