刘张玲
- 作品数：9 被引量：23H指数：3
- 供职机构：重庆医科大学检验医学院更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金国家自然科学基金湖南省教育厅科研基金更多>>
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- 重组腺病毒AdE-SH2-Caspase8对耐伊马替尼的K562/G01细胞凋亡的影响被引量：1
- 2015年
- 目的:研究表达融合蛋白SH2-Caspase 8的重组腺病毒Ad E-SH2-Caspase 8-HA-GFP(SC)对BCR/ABL阳性的耐伊马替尼的K562/G01细胞凋亡的影响。方法:K562/G01细胞经重组的腺病毒SC感染后,分别设突变Ad E-SH2m-Caspase 8-HA-GFP(Sm C)组、病毒空载Ad EGFP(CM V)组和PBS对照组。荧光显微镜和流式细胞仪(FCM)检测病毒感染效率,Western blot检测融合蛋白SH2-Caspase 8-HA的表达水平,光学显微镜观察经瑞氏染色后的细胞形态,FCM和DNA梯度电泳检测细胞凋亡情况,Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase3和PARP的表达水平。结果:重组腺病毒在K562/G01细胞中的感染效率较高;Western blot能检测到目的蛋白SH2-Caspase 8-HA的表达;与对照组比较,瑞氏染色后SC组出现明显的凋亡形态改变,FCM检测结果表明SC组早前凋亡细胞明显增高(P<0.05),DNA梯度电泳检测结果发现SC组出现明显细胞凋亡特异性的梯度条带,Western blot结果表明SC组凋亡相关蛋白Caspase 3、PARP活化片段的表达水平升高。结论:重组腺病毒SC表达的SH2-Caspase 8融合蛋白能明显诱导K562/G01细胞的凋亡。
- 王林王林费嫦黄峥兰李会刘张玲
- 关键词：细胞凋亡BCR-ABL融合蛋白SH2结构域
- LY294002对慢粒白血病急变期K562细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响及其效应
- 慢性粒细胞白血病(Chronic myeloid leukemia，CML)是起源于骨髓造血干细胞的恶性克隆性疾病，它以9号和22号染色体发生相互易位形成的BCR/ABL融合基因为发病特征，该基因编码的BCR/ABL癌蛋...
- 刘张玲
- 关键词：信号通路K562细胞特异性抑制剂
- 吲哚美辛抑制慢性粒细胞白血病急变期CD34^+细胞增殖及其机制探讨被引量：1
- 2016年
- 目的:观察吲哚美辛对急变期慢性粒细胞白血病患者骨髓CD34^+细胞增殖和自我更新能力的影响,并从Wnt/β-catenin信号通路的角度初步探讨吲哚美辛作用的分子机制。方法:采用免疫磁珠分选技术分选获得慢性期和急变期慢性粒细胞白血病患者骨髓以及健康人脐带血标本中的CD34^+细胞,并采用FCM和实时荧光定量PCR法检测CD34^+细胞中β-catenin和Bcr-Abl的表达水平。用吲哚美辛或(和)伊马替尼处理CD34^+细胞后,采用FCM法检测细胞中β-catenin的表达水平,MTT法检测细胞增殖情况,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,实时荧光定量PCR法检测c-Myc和cyclin D1的mRNA水平。结果:成功分选出各标本中的CD34^+细胞,其中急变期慢性粒细胞白血病患者的CD34^+细胞中β-catenin和Bcr-Abl均高表达(P值均<0.05)。吲哚美辛作用后,急变期慢性粒细胞白血病患者的CD34^+细胞中β-catenin表达显著下调(P<0.05),细胞增殖和克隆形成能力均被明显抑制(P值均<0.05),并且β-catenin下游靶基因c-Myc和cyclin D1的mRNA水平也被明显下调(P值均<0.05);而吲哚美辛与伊马替尼联合用药后,以上作用效果更加明显(P值均<0.05)。结论:吲哚美辛可能通过影响Wnt/β-catenin信号通路,抑制CD34^+细胞的增殖和自我更新能力,从而增强伊马替尼对急变期慢性粒细胞白血病患者中CD34^+细胞的杀伤力。
- 胡晶冯敏刘毅刘张玲李会黄峥兰冯文莉
- 关键词：吲哚美辛CD34+细胞Β-连环素
- 吲哚美辛显著增强伊马替尼对KCL22和K562/G01细胞的增殖抑制作用
- 2015年
- 目的:研究吲哚美辛联合伊马替尼对KCL22和K562/G01细胞增殖的抑制作用,并从Wnt/β-Catenin信号通路角度探讨其抗增殖作用的分子机制。方法:采用MTT法明确吲哚美辛在各细胞中的最佳作用浓度及时间;采用MTT法和甲基纤维素集落形成实验检测伊马替尼、吲哚美辛以及两者联合对各细胞增殖能力的影响;采用流式细胞术鉴定细胞周期及细胞凋亡的变化;Western blot检测经两种药物处理的细胞内pβ-catenin(S33/37/T41)、p GSK-3β(Ser9)和C-M YC蛋白的表达情况。结果:吲哚美辛抑制细胞增殖的最佳作用浓度和时间分别为80μmol/L和48 h;吲哚美辛联合伊马替尼对细胞的增殖抑制作用明显优于单一药物处理;在KCL22和K562/G01细胞株中联合用药组的细胞周期均被阻制在G0/G1期;联合用药组的细胞凋亡数目明显高于单一药物处理组;与对照组或单一药物处理组相比,联合用药组细胞内pβ-catenin、β-catenin、p GSK-3β(Ser9)和C-MYC蛋白表达明显下调。结论:吲哚美辛可显著增强伊马替尼对KCL22和K562/G01细胞的增殖抑制作用和诱导细胞凋亡,并通过抑制Wnt/β-Catenin信号通路调控细胞的增殖。
- 刘毅胡晶刘张玲李会黄峥兰冯文莉
- 关键词：吲哚美辛伊马替尼WNT/Β-CATENIN
- 吲哚美辛对慢性粒细胞白血病急变期CD34^+细胞的影响研究被引量：5
- 2016年
- 目的探讨吲哚美辛(IN)对慢性粒细胞白血病(简称慢粒)急变期CD34+细胞凋亡和周期的影响,并从Wnt/β-catenin信号通路初步探讨其可能的分子机制。方法采用免疫磁珠分选技术分选慢粒慢性期、急变期患者骨髓标本和正常脐带血标本中的CD34+细胞,流式细胞术鉴定其分选纯度,瑞氏染色观察其细胞形态,采用免疫荧光技术检测CD34+细胞中β-catenin和BCR/ABL的表达及定位。使用IN联合伊马替尼(IM)处理CD34+细胞,免疫荧光技术检测β-catenin蛋白变化,瑞氏染色和流式细胞术观察细胞凋亡及细胞周期,定量PCR检测靶基因c-myc和cyclin D1的m RNA水平,流式细胞术和免疫荧光技术检测BCR/ABL蛋白变化。结果成功分选出CD34+细胞,纯度达90%以上;β-catenin和BCR/ABL均在慢粒急变期CD34+细胞中高表达,主要定位于胞质。IN与IM联用能够显著抑制慢粒急变期CD34+细胞中β-catenin的表达,使慢粒急变期CD34+细胞的细胞周期被阻滞在G0/G1期,明显增加细胞的凋亡,明显降低c-myc和cyclin D1的m RNA水平,并使BCR/ABL的蛋白水平显著下降,但对正常CD34+细胞没有影响。结论 IN通过影响细胞周期和细胞凋亡,增强IM对慢粒急变期CD34+细胞的杀伤力,其机制可能是与降低β-catenin的表达,抑制c-myc和cyclin D1的转录及BCR/ABL的蛋白水平有关。
- 胡晶冯敏刘毅刘张玲李会黄峥兰冯文莉
- 关键词：CD34+细胞吲哚美辛
- 吲哚美辛对K562细胞株BCR/ABL-Wnt/β-catenin信号通路的影响被引量：9
- 2015年
- 目的探讨吲哚美辛对K562细胞增殖的影响及其分子机制。方法采用不同浓度的吲哚美辛作用于K562细胞,MTT法检测其对细胞增殖的影响,克隆形成实验检测吲哚美辛对K562细胞克隆形成能力的影响。RT-PCR分别检测bcr-abl、β-catenin的mRNA表达变化,Western blot分别检测p BCR/ABL、总BCR/ABL、β-catenin、p GSK-3β、c-myc的蛋白表达变化。结果 100、200、400μmol/L吲哚美辛作用细胞48 h后,以浓度依赖性方式抑制K562细胞的增殖和克隆形成能力。3种浓度的吲哚美辛处理K562细胞后,p BCR/ABL、总BCR/ABL的蛋白表达依次减少,而bcr-abl mRNA水平没有明显变化。β-catenin mRNA和蛋白水平依次减少;p GSK-3β、c-myc的蛋白水平均明显降低。结论吲哚美辛可通过抑制BCR/ABL-Wnt/β-catenin信号通路的活性,从而抑制白血病K562细胞的增殖和克隆形成能力。
- 刘张玲胡晶黄峥兰李会刘鑫冯文莉
- 关键词：吲哚美辛慢性粒细胞白血病K562细胞信号通路
- LY294002对CML急变期细胞中Wnt/β-catenin信号通路的影响及其效应
- 2014年
- β-catenin在慢性粒细胞白血病急变过程中发挥着重要作用,而其受BCR/ABL及其下游信号通路调控的具体分子机制尚未完全阐明。该研究旨在探讨PI3K-AKT信号通路对慢粒急变期细胞的影响及其对Wnt/β-catenin信号通路的调控作用。采用PI3K-AKT信号通路的靶向抑制剂LY294002作用于慢粒急变期K562细胞,MTT法检测其对细胞增殖的影响,甲基纤维素克隆形成实验检测细胞的克隆形成能力,Western blot检测pAKT(Thr308)的表达变化,RT-PCR和Western blot分别检测β-catenin及其下游靶基因c-myc、cyclinD1的mRNA和蛋白表达情况。结果显示,10,20,40μmol/L的LY294002作用细胞24 h后,抑制了K562细胞的增殖以及克隆形成能力,该效应呈浓度依赖的方式。3种浓度的LY294002处理细胞后,PI3K-AKT信号通路明显被抑制,pAKT(Thr308)的蛋白表达明显减少;β-catenin的mRNA表达无明显改变,但其蛋白水平依次减少;β-catenin的下游靶基因c-myc、cyclinD1的mRNA和蛋白水平均明显降低。综上所述,抑制PI3K-AKT信号通路可抑制白血病K562细胞的增殖和克隆形成能力,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路相关。
- 刘张玲胡晶黄峥兰李会李亚娟冯文莉
- 关键词：BCRABL
- 重组腺病毒AdE-SH2-Caspase8-HA-GFP对耐伊马替尼的K562/G01细胞增殖的影响
- 2013年
- 研究表达融合蛋白SH2-Caspase8的重组腺病毒AdE-SH2-Caspase8-HA-GFP对耐伊马替尼的BCR/ABL阳性的慢性粒细胞白血病(CML)K562/G01细胞增殖的影响。荧光显微镜观察病毒感染效率,Western blot检测融合蛋白的表达情况,MTT和细胞计数检测细胞的生长情况,流式细胞仪分析细胞增殖周期,甲基纤维素克隆形成实验检测细胞的克隆形成能力。结果显示,荧光显微镜观察病毒感染效率高,Western blot能检测到目的蛋白的表达,MTT和细胞计数检测可见,与对照组相比AdE-SH2-Caspase8-HA-GFP能显著抑制细胞的生长;流式周期检测发现,AdE-SH2-Caspase8-HA-GFP组G1期细胞比例增加,S期和G2期细胞比例减少;克隆形成实验可见,AdE-SH2-Caspase8-HA-GFP能显著抑制细胞克隆的形成。综上所述,重组腺病毒AdE-SH2-Caspase8-HA-GFP表达的SH2-Caspase8融合蛋白能明显抑制耐伊马替尼的K562/G01细胞的增殖。
- 王林罗秋平黄峥兰李会刘张玲祖白玲冯文莉向华
- 关键词：细胞增殖BCRABLSH2结构域CASPASE8
- AKT抑制剂对慢粒急变期K562细胞中Wnt/β-catenin信号通路的影响及其效应观察被引量：6
- 2015年
- 目的探讨PI3K-AKT信号通路靶向抑制剂AKTiⅣ对慢性粒细胞白血病(CML)急变期细胞K562的影响及其对Wnt/β-catenin信号通路的调控作用。方法取处于对数生长期的K562细胞,分别加入0、2.5、5、10μmol/L的AKTiⅣ进行处理,采用MTT法检测其对细胞增殖的影响,甲基纤维素克隆形成实验检测细胞的克隆形成能力,Western blotting检测K562细胞中p AKT(Thr308)、p GSK-3β(Ser9)蛋白表达情况,荧光定量PCR和Western blotting检测β-catenin及其下游靶基因c-myc、cyclin D1 m RNA和蛋白表达情况。结果 AKTiⅣ作用6、10、16h后,K562细胞的增殖能力以及克隆形成能力明显受抑,且作用10h时抑制效果最好。2.5、5、10μmol/L AKTiⅣ处理K562细胞10h后,PI3KAKT通路明显受到抑制,p AKT(Thr308)蛋白表达依次减少。5μmol/L AKTiⅣ作用K562细胞10h后,p GSK-3β(Ser9)及β-catenin蛋白表达明显减少,而β-catenin m RNA表达水平无明显改变。5μmol/L AKTiⅣ作用K562细胞10h后,β-catenin下游靶基因c-myc、cyclin D1的m RNA和蛋白表达水平均明显降低。结论 AKTiⅣ可抑制慢粒急变期K562细胞的增殖和克隆形成能力,其机制可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号通路阻断细胞的生长信号转导。
- 刘张玲胡晶黄峥兰李会刘毅冯文莉
- 关键词：Β连环素WNT信号通路K562细胞
