刘华友
- 作品数：5 被引量：10H指数：2
- 供职机构：湖南师范大学更多>>
- 发文基金：湖南省自然科学基金国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 心脏发育相关基因Foxp4相互作用蛋白的筛选与鉴定
- 本实验室前期利用酵母双杂交技术,筛选获得了与心脏发育基因Foxp4相互作用的15个候选蛋白,并分析了其中3个候选蛋白与Foxp4相互作用的情况。本文进一步分析其它12个候选蛋白是否与Foxp4相互作用,为研究Foxp4调...
- 刘华友
- 关键词：免疫共沉淀基因芯片
- 文献传递
- Smyd1干扰真核表达质粒及其稳定转染H9c2细胞系的构建
- 2011年
- 运用RNA干扰技术(RNA interference RNAi)构建pSUPER.retro-Smyd1真核表达质粒,经鉴定后用脂质体法转染H9c2细胞,通过G418筛选出稳定表达pSUPER.retro-Smyd1的细胞系,最后经Western blot及RT-PCR实验鉴定其干扰效果。经鉴定,通过H9c2细胞系构建的pSUPER.retro-Smyd1干扰细胞系的干扰效果显著。因此,本实验成功构建了Smyd1干扰真核表达质粒及其稳定转染的H9c2细胞系,为进一步研究Smyd1基因在心脏发育中的作用奠定了良好的实验基础。
- 李帆廖四芳刘华友鲁建鑫刘宪楚刘明吴秀山李永青
- 关键词：RNAI技术SIRNA稳定转染
- 斑马鱼Lefty1特异性多克隆抗体的制备被引量：7
- 2010年
- Lefty蛋白是TGFβ大家族的配体,通过与Nodal以及Nodal的受体结合而抑制Nodal信号转导。本文采用PCR技术扩增出斑马鱼lefty1基因(z-lefty1)的部分编码区,将其插入到pGEX-4T-1原核表达载体中。所构建的重组质粒(pGEX/z-Lefty1)转化入BL21大肠杆菌,通过IPTG诱导表达GST-z-Lefty1融合蛋白。蛋白经尿素洗涤分离后用于免疫新西兰大白兔以制备多克隆抗体。Western blotting检测结果表明获得了高效价的特异性兔抗z-Lefty1多克隆抗体。这为进一步研究斑马鱼心脏发育的分子机制创造了条件。
- 满贤龚琳王跃群李帆刘华友莫小阳邓云万永奇吴秀山李永青
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- 斑马鱼Foxp4基因多克隆抗体的制备及检测被引量：2
- 2011年
- Foxp4为Fox基因家族的一员,目前研究发现其与怖、肠、心脏以及中枢神经系统的发育有关。为了在斑马鱼模型中进一步研究该基因的功能,有必要制备其多克隆抗体。按照巢式PCR原理,经过两次PCR扩增出亲水性和特异性均好的斑马鱼Foxp4基因片段,将其克隆入表达载体pGEX4T-1,转化至大肠杆菌BL21中,再通过IPTG进行诱导表达GST-Foxp4融合蛋白。融合蛋白先经谷胱甘肽琼脂糖珠亲和纯化,再经切胶纯化回收,然后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,分别进行Western-blot实验检测抗体效价和特异性。所得结果显示获得了较高效价和特异性好的斑马鱼Foxp4多克隆抗体,为Foxp4功能的进一步研究奠定了基础。
- 刘华友朱玲李帆王琨江志钢吴秀山李永青
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- 斑马鱼心脏标记基因VMHC多抗血清的制备被引量：2
- 2011年
- 斑马鱼基因VMHC(Ventricular myosin heavy chain)是心脏发育早期的标志基因,制备该基因多抗血清,首先通过生物信息学方法,选择VMHC基因中特异性强、具亲水性的一段核苷酸序列(3 772～4 221 bp),通过PCR扩增,将片段重组到原核表达载体pGEX-4T-1,通过原核诱导表达获得含有表达目的片段的融合蛋白,以该融合蛋白免疫小鼠,获得VMHC多克隆抗鼠血清.对该多抗血清抗体进行验证,结果具有很好特异性和较高效价,可以用作western-blot、免疫印迹等试验分析.
- 王琨满贤刘华友李志李发祥赵阳廖四芳吴秀山袁婺洲
- 关键词：标记基因融合蛋白
