刘元伟
- 作品数：9 被引量：90H指数：3
- 供职机构：北京大学人民医院更多>>
- 发文基金：北京市科技计划项目国家高技术研究发展计划首都医学发展科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 起搏通道基因hHCN2和hHCN4亚型在大鼠心脏构建生物起搏器的比较研究
- 目的: 探讨分别利用hHCN2和hHCN4起搏通道基因亚型体内转染大鼠心脏构建生物起搏器的可行性比较基频率差别.
方法: 6周龄SD大鼠随机分AdGFP注射组(n=10),分别经心外膜注射50μl重组腺病毒(滴...
- 钟幼民郭继鸿张萍李继文刘元伟张幼怡周春燕
- 关键词：生物起搏器离子通道起搏电流腺病毒
- 文献传递
- 腺病毒介导超极化激活环核苷酸门控阳离子通道基因亚型4过度表达对乳鼠心肌细胞电生理特性的影响被引量：3
- 2006年
- 目的观察过度表达超极化激活环核苷酸门控阳离子通道基因亚型(HCN)4对乳鼠心肌细胞电生理特性的影响。方法酶解法分离20只乳鼠的原代心肌细胞并进行培养,用含HCN4基因的重组腺病毒AdHCN4感染心肌细胞,以未感染细胞作为对照组,通过RT-PCR及细胞免疫荧光方法检测心肌细胞中HCN4基因在mRNA和蛋白质水平的表达,用全细胞膜片钳方法测定转染HCN4基因的心肌细胞的动作电位和起搏电流If。结果AdHCN4感染组心肌细胞中HCN4mRNA和蛋白质的表达水平明显高于对照组细胞;感染组心肌细胞自发搏动的频率为(92·5±7·4)次/分,明显高于对照组心肌细胞的(68·9±6·2)次/分(P<0·05);动作电位出现明显的4相自动除极化,其最大舒张电位(-52·8±4·2)mV明显高于对照组细胞(-62·1±2·6)mV(P<0·05);动作电位复极50%和90%的时间两者比较差异无统计学意义;在感染组细胞中,起搏电流If的电流密度为(115·7±7·8)pA/pF,也明显高于对照组细胞的(7·2±0·6)pA/pF(P<0·05)。结论过度表达起搏通道基因HCN4能够明显增强乳鼠心肌细胞的自律性,从而增加心肌细胞自发搏动的频率,这提示HCN4基因有可能成为治疗缓慢性心律失常疾病的目的基因。
- 李继文郭继鸿张萍李春刘元伟周春燕
- 关键词：离子通道电生理学动作电位心肌细胞
- HEK293细胞上表达的人类超极化激活环核苷酸门控钾通道亚型2和亚型4的电生理
- 2007年
- 目的将人类超极化激活环核苷酸门控钾通道亚型2(hHCN2)和亚型4(hHCN4)的基因表达于 HEK293细胞系上,观察其表达的通道的电生理特点。方法包含目的基因 hHCN2或hHCN4的 cNDA 亚克隆到腺病毒穿梭载体 pAdTrack-CMV,穿梭载体和病毒骨架载体 pAdEasy-1在大肠杆菌重组,病毒经过包装和扩增后分别转染 HEK293细胞。利用全细胞膜片钳技术,记录分别转染了 hHCN2和 hHCN4的 HEK293细胞上的超极化激活钾电流(I_f)。结果转染 hHCN2和 hHCN4的HEK293细胞上产生超极化激活的内向电流。两种通道的半数最大激活电压分别为-114.8 mV±3.3 mV 和-125.9 mV±2.9 mV,反向曲线斜率分别为11.1 mV±1.2 mV 和13.7 mV±1.3 mV。两者的激活动力学明显不同,刺激电压为-110 mV 时,通道的激活时间常数分别为0.99 s±0.21 s 和8.47 s±2.85 s。两种通道对钠离子和钾离子的相对通透性分别为0.40和0.34。两种电流均可被2mmol/L 的氯化铯(CsCl)阻断。结论目的基因 hHCN2和 hHCN4在 HEK293细胞上成功表达,形成的两种通道具有明显不同的激活动力学。
- 李春郭继鸿李继文刘元伟郝雪梅王世强
- 关键词：全细胞记录HEK293
- 二甲基亚砜诱导小鼠胚胎干细胞向心肌分化过程中的毒性作用
- 目的研究DMSO在诱导小鼠胚胎干细胞向心肌分化过程中的毒性作用。方法MESPU13小鼠胚胎干细胞培养在丝裂霉素处理的ICR鼠胚制成的饲养层上,细胞消化成单个细胞后经差速贴壁除去饲养细胞后以400ES/20μl置于培养皿上...
- 刘元伟郭继鸿张萍周春燕李继文
- 文献传递
- 稳心颗粒甘松提取物对大鼠心室肌细胞钠电流和瞬时外向钾电流激活动力学的影响被引量：60
- 2009年
- 目的研究步长稳心颗粒中甘松提取物对大鼠心室肌细胞钠电流(INa)、瞬时外向钾电流(Ito)激活动力学的影响。方法采用全细胞膜片钳技术,研究10 g/L甘松提取物对急性分离的成年大鼠心室肌细胞INa、Ito激活动力学的影响。结果①10 g/L甘松提取物使大鼠心室肌细胞INa峰值(INa,max)从-58.96±2.71 pA/pF降至-31.66±1.29 pA/pF(n=5,P<0.01);②10 g/L甘松提取物使Ito峰值(Ito,max)由3.40±1.52 pA/pF降到1.43±0.64 pA/pF(n=7,P<0.05)。10 g/L甘松提取物对INa和Ito的抑制率分别达38.2%和57.9%。结论10 g/L甘松提取物对大鼠心室肌细胞INa、Ito具有显著抑制作用。
- 刘元伟郭继鸿张萍李继文李春
- 关键词：心血管病学全细胞膜片钳钠电流瞬时外向钾电流
- 人类超极化激活环核苷酸门控阳离子通道基因亚型4导入大鼠心脏构建生物起搏点的初步研究被引量：6
- 2006年
- 目的探讨利用人类超极化激活环核苷酸门控阳离子通道基因亚型4在大鼠心脏中构建生物起搏点的可能性、安全性和时效性。方法6周龄SD大鼠分为对照组（10只）和实验组（10只），分别经心外膜注射50山的腺病毒和人类超极化激活环核苷酸门控阳离子通道基因亚型4重组腺病毒（滴度为10^10～10^12）至左心室心尖部。术后3d内每天记录一次心电图，每次10min。术后第7天分离颈部双侧迷走神经干并进行双侧或单侧电刺激，同时记录体表心电图。随后在心尖部进行起搏标测。最后取出心脏进行病理学检查和免疫荧光检测。结果术后3d内心电图没有记录到室性心律失常事件。在术后第7天进行颈部迷走神经干电刺激时，实验组大鼠室性异搏节律的频率明显快于对照组（分别为69bpm±6bpm和41bpm±10bpm，P〈0．001）。心电图和起搏标测均证实实验组大鼠室性异搏节律起源于注射部位附近。免疫荧光检测证实注射局部人类超极化激活环核苷酸门控阳离子通道基因亚型4蛋白过度表达。1个月后，注射部位心脏组织未检测到该蛋白的表达。结论人类超极化激活环核苷酸门控阳离子通道基因亚型4导入心室可以使通道蛋白在局部过度表达，提高室性异位起搏点的频率。利用人类超极化激活环核苷酸门控阳离子通道基因亚型4在体内构建生物起搏器的长期效果有待于进一步研究。
- 钟幼民郭继鸿张萍李继文刘元伟周春燕张幼怡
- 关键词：起搏器心律失常基因疗法
- 起搏通道基因亚型HCN4重组腺病毒载体的构建及通道电流检测被引量：23
- 2006年
- 目的旨在构建超极化激活环核苷酸门控阳离子通道基因亚型4(HCN4)重组腺病毒载体并鉴定其离子通道功能。方法全长人HCN4基因酶切后亚克隆到腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV,形成含目的基因和绿色荧光蛋白基因的穿梭载体。穿梭载体和病毒骨架载体pAdEasy-1经电穿孔法在BJ5183大肠杆菌中同源重组,重组后的腺病毒载体经PacⅠ酶切线性化后,利用脂质体介导转染到HEK293细胞进行病毒的包装和扩增。用多聚酶链反应(PCR)方法对病毒上清中的HCN4进行检测,并将重组腺病毒感染COS-7细胞,用免疫荧光染色检测HCN4蛋白质的表达,利用全细胞膜片钳方法测定转HCN4基因细胞的电生理功能。结果通过酶切、测序、PCR等证实HCN4通道基因重组腺病毒载体构建正确,免疫荧光检测证实转染AdHCN4的COS-7细胞中HCN4通道基因的表达,膜片钳实验也在转基因细胞中检测到超极化激活的非选择性内向阳离子电流(If)。结论HCN4通道基因重组腺病毒载体的构建成功为进一步研究该离子通道的电生理功能及在心律失常疾病基因治疗方面的潜在应用价值奠定了基础。
- 李继文郭继鸿张萍李春刘元伟周春燕
- 关键词：超极化激活环核苷酸门控阳离子通道起搏电流腺病毒
- 人类超极化激活环核苷酸门控阳离子通道基因体内转染大鼠心脏进行生物起搏的初步研究被引量：1
- 2007年
- 严重的缓慢性心律失常往往需要置入电子起搏器。然而，电子起搏器自身存在一些局限性。近年来，人们开始探索采用基因治疗和细胞治疗技术构建生物起搏器。目前，构建生物起搏器的策略有多种，其中以通过增强起搏电流（pacemaker current，If）来构建生物起搏器的策略最受关注。If的分子基础是超极化激活环核苷酸门控阳离子通道（hyperpolarization—activated cyclic nucleotide-gated cation channel，HCN）。本研究的目的是探讨利用人类HCN2（hHCN2）转染到大鼠心脏中进行生物起搏的可行性、安全性和时效性。
- 张萍郭继鸿钟幼民李继文刘元伟张幼怡周春燕
- 关键词：超极化激活环核苷酸门控阳离子通道生物起搏器大鼠心脏体内转染离子通道基因
- 甘松提取物对大鼠心室肌细胞L型钙通道、钠通道、瞬时外向钾通道激活动力学的影响
- 目的研究步长稳心颗粒中甘松提取物对大鼠心室肌细胞L型钙通道、钠通道、瞬时外向钾通道(I)激活动力学的影响。方法采用全细胞膜片钳技术,研究10 g/L甘松提取物对急性分离的成年大鼠心室肌细胞L型钙通道、钠通道、瞬时外向
- 刘元伟郭继鸿张萍张海澄李学斌李继文李春李鼎
- 文献传递
