倪望
- 作品数：118 被引量：518H指数：12
- 供职机构：华中科技大学同济医学院附属同济医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金高等学校骨干教师资助计划武汉市青年科技晨光计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- PKCa对大鼠肺动脉平滑肌细胞中cyclinD1及细胞周期的调控作用
- 徐永健刘先胜曾大雄王冉向敏谢敏熊维宁倪望陈仕新
- 活性氧和ERK1/2信号通路在缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖和凋亡中的作用被引量：6
- 2009年
- 目的:研究缺氧状态下大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)内活性氧(ROS)水平的变化,ROS对细胞外信号调节激酶(ERK)1/2蛋白表达的影响以及ROS和ERK1/2在PASMCs增殖和凋亡关系失衡中的作用。方法:原代培养正常大鼠PASMCs,选用第2-3代用于实验。分别在常氧及缺氧条件下用ROS清除剂tiron、ERK1/2抑制剂PD98059进行分组干预。通过NBT还原法和DCFH-DA荧光探针检测细胞内ROS,免疫荧光法检测磷酸化-ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白表达,MTT比色法和增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的免疫细胞化学法检测细胞增殖,原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡。结果:(1)缺氧组细胞内ROS水平明显高于对照组(P<0.01);(2)缺氧组的增殖活性与对照组相比显著增高(P<0.01),而凋亡率显著降低(P<0.01),使用tiron后能明显抑制缺氧诱导的细胞增殖(P<0.05),而凋亡率却明显升高(P<0.01);(3)缺氧组p-ERK1/2蛋白表达显著高于对照组(P<0.01),使用tiron后缺氧诱导的p-ERK1/2表达被显著抑制(P<0.01);(4)使用PD98059也能明显抑制缺氧诱导的细胞增殖(P<0.05),而凋亡率也明显升高(P<0.01),缺氧下同时使用PD98059和tiron与单用tiron相比,对细胞增殖和凋亡的影响均无明显差异(P>0.05)。结论:缺氧时PASMCs中生成增多的ROS通过活化下游ERK1/2信号通路,促进PASMCs增殖并抑制凋亡,从而在缺氧性肺动脉重建过程中发挥重要作用。
- 汤娜娜刘先胜徐永健倪望陈士新
- 关键词：活性氧细胞外信号调节激酶类缺氧肺动脉平滑肌细胞
- 细胞外信号调节激酶1/2信号通道在慢性支气管哮喘模型大鼠支气管平滑肌表型变化中的作用
- 研究细胞外信号调节激酶1／2(ERK1／2)信号通道在慢性支气管哮喘(简称哮喘)模型大鼠支气管平滑肌细胞表型变化中的作用。我们用卵白蛋白(OVA)雾化8周制备大鼠慢性哮喘模型,分离支气管平滑肌并加入ERK1／2激动剂表皮...
- 谢敏刘先胜徐永健白晶倪望陈士新
- 文献传递
- 慢性阻塞性肺病患者血浆内皮素-1水平与肺血流动力学的关系被引量：5
- 1998年
- 通过右心漂浮导管检测了２０例临床缓解期慢性阻塞性肺病（ＣＯＰＤ）患者的血流动力学参数，并用放射免疫分析法分别测定了体动脉和肺动脉血浆内皮素－１（ＥＴ－１）水平。结果显示：体动脉血浆ＥＴ－１水平（５７．００±８．８９）ｐｇ／ｍｌ小于肺动脉血浆ＥＴ－１水平（７５．９２±１７．３６）ｐｇ／ｍｌ（Ｐ＜０．００１）：ＣＯＰＤ并ＰＡＨ组肺动脉混合静脉血浆ＥＴ－１水平的（８３．９０±１７．１２）ｐｇ／ｍｌ明显高于ＣＯＰＤ非ＰＡＨ组肺动脉混合静脉血浆ＥＴ－１水平（６２．７３±４．４３）ｐｇ／ｍｌ（Ｐ＜０．０５）；肺动脉混合静脉血浆ＥＴ－１水平与肺动脉平均压（ＰＡＰｍ）及肺血管阻力（ＰＶＲ）呈显著的正相关（ｒ＝０．８８，Ｐ＜０．００１；ｒ＝０．０８１，Ｐ＜０．００１），与心输出量（ＣＯ）、氧饱和度（ＳＡＴ％）呈显著的负相关（ｒ＝－０．４７，Ｐ＜０．０５：ｒ＝－０．７９，Ｐ＜０．００１）。提示ＥＴ－１在ＣＯＰＤ并ＰＡＨ的发生发展中起着重要的病理生理学作用。
- 林春龙林春龙徐永健张珍祥
- 关键词：阻塞性肺疾病肺血流动力学内皮素-1慢性
- 磷酸二酯酶抑制剂对慢性阻塞性肺疾病患者PBMC中IL-08 mRNA表达的影响被引量：5
- 2005年
- 目的:探讨磷酸二酯酶(PDE)抑制剂对慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者外周血单个核细胞(PBMC)IL-8mRNA表达的影响及机制。方法:采集20例急性发作期COPD患者(A组)和15例正常人(B组)的PBMC。A组的每份PBMC分4组培养:A1组为空白对照,A2组和A3组分别加入100μmol/L及1mmol/L的非选择性PDE抑制剂茶碱,A4组加入选择性PDEⅣ抑制剂Rolipram。应用RT-PCR检测IL-8mRNA的表达,以免疫组化法检测NF-κB阳性细胞的百分率,用Westernblot检测I-κB蛋白的含量。结果:(1)A1组PB-MC中IL-8mRNA的表达及NF-κB阳性细胞的百分率,均显著高于B组;IκB的水平显著低于B组(P<0.01)。(2)与A1组比较,A2组和A3组的PB-MC中IL-8mRNA的表达无显著差异(P>0.05);A4组IL-8mRNA的表达明显下降(P<0.01)。(3)与A1组比较,A2组NFκB阳性细胞的百分率及IκB的水平无显著差异(P>0.05);而A3组的PBMC中NFκB阳性细胞的百分率下降(P<0.05),IκB蛋白的水平无显著变化(P>0.05)。A4组PB-MC中,NF-κB阳性细胞的百分率较A1组明显下降,I-κB蛋白的水平明显增加(P<0.01)。结论:COPD患者PBMC中IL-8mRNA的表达较正常增高,提示IL-8参与了COPD的发病过程;选择性PDEⅣ抑制剂Roli-pram可抑制IL-8基因的表达,其作用机制可能与NF-κB阳性细胞百分率的下降有关。
- 杨丹蕾徐永健李超乾张珍祥倪望
- 关键词：磷酸二酯酶抑制剂白细胞介素-8核因子ΚB
- 细胞外信号调节激酶反义寡核苷酸对支气管哮喘血清被动致敏的人气道平滑肌细胞的影响
- 2010年
- 目的 观察细胞外信号调节激酶（ERK）反义寡核苷酸（ODNs）对支气管哮喘（简称哮喘）血清被动致敏的人气道平滑肌细胞（HASMCs）增殖和凋亡的影响.方法 用10%哮喘患者血清被动致敏HASMCs（空白对照组）,并用脂质体将反义（AODNs组）、正义（SODNs组）及错配ERKODNs（RODNs组）导入HASMCs,以10%非哮喘患者血清为对照（对照血清组）.采用流式细胞仪、四甲基偶氮唑盐（MTT）法、3H-TdR掺入法及增殖细胞核抗原（PCNA）免疫荧光技术检测HASMCs的增殖,原位末端标记法和Annexin-V FITC PI双染色法检测细胞凋亡,RT-PCR和Western blot检测ERKmRNA和ERK1/2、磷酸化ERK1/2蛋白的表达.结果 用ERK ODNs干预经哮喘血清致敏的HASMCs后,AODNs组S＋G2/M期细胞所占比例、吸光度（A490）值、细胞DNA合成量和PCNA蛋白表达量[分别为（14.21±1.21）%、（0.271±0.021）、（2811±182）cpm/106和（5.25±0.60）]均低于空白对照组[分别为（22.48±2.04）%、0.507±0.090、（3869±396）cpm/106和11.25±1.21]（F值分别为65.594、39.676、61.111、120.321,均P〈0.01）,AODNs组的凋亡指数和早期凋亡细胞百分率[分别为13.96±1.72和（9.17±0.47）%]均高于空白对照组[分别为5.37±0.05和（3.26±0.04）%],差异有统计学意义（F值分别为98.181和65.444,均P〈0.01）,AODNs组的ERK mRNA和ERK活化率[分别为0.43±0.06和（63±6）%]均低于空白对照组[分别为0.89±0.09和（87±8）%]（F值分别为78.043和87.288,均P〈0.01）.而正义和错配ERK ODNs没有上述作用.结论 反义ERK可通过抑制ERK mRNA表达和翻译抑制哮喘血清被动致敏的HASMCs的增殖,促进其凋亡,ERK信号通道可能对哮喘患者HASMCs增殖与凋亡具有重要的调控作用.
- 白晶刘先胜徐永健张珍祥谢敏倪望
- 关键词：细胞外信号调节激酶类肌细胞平滑肌寡核苷酸类反义
- 银杏叶提取物对哮喘大鼠气道炎性细胞蛋白激酶Cα表达及白细胞介素-4分泌的影响被引量：4
- 2006年
- 目的探讨银杏叶提取物(EGb)对哮喘的治疗效果及可能机制。方法48只SD大鼠随机分成:正常对照组(6只)、哮喘组(此组再分为:未处理组,激素处理1、2、4周组,EGb处理1、2、4周组,每组各6只)。采用Wright染色法计数肺泡灌洗液中各类炎性细胞的相对数,免疫组化(SP)法测定蛋白激酶Cα(PKCα)的表达情况,ELISA法测定肺泡灌洗液上清中IL-4的含量。结果哮喘未处理组大鼠肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞(EOS)、淋巴细胞相对计数百分比、PKCα在淋巴细胞和总的细胞中的阳性表达率以及上清液中IL-4含量均显著高于正常对照组(均P<0.05)。与未处理组比较,激素处理不同时间组前述各指标均明显下降(均P<0.05)。EGb处理1、2周组各指标明显高于激素处理组(P<0.05),4周组与激素处理组比较无明显差异。EGb处理1周组除淋巴细胞PKCα阳性表达率外,其余检测指标与哮喘未处理组比较均无明显差异(均P>0.05),而EGb处理2、4周组相关检测指标均明显下降(均P<0.05),且随时间延长,下降更明显(P<0.05)。EGb处理组炎性细胞PKCα阳性表达率与上清液中IL-4、嗜酸性粒细胞及淋巴细胞的相对计数百分比呈显著正相关(r值分别为0.641、0.699、0.625,均P<0.01,n=18)。结论EGb可减轻气道EOS和淋巴细胞等炎性细胞的浸润以及气道炎性细胞PKCα的阳性表达率和IL-4的分泌量,其作用弱于糖皮质激素,但随着药物治疗时间的延长其药理作用逐渐明显。EGb治疗哮喘的作用可能与其减少炎性细胞PKCα的表达进而降低EOS和淋巴细胞在气道的浸润以及IL-4的浓度有关。
- 唐以军徐永健张珍祥倪望陈仕新高宝安叶涛曹勇杜春玲
- 关键词：支气管哮喘银杏叶提取物蛋白激酶CΑ白细胞介素-4
- cGMP对慢性低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞膜电压门控钾通道的作用被引量：5
- 2003年
- 目的 :探讨cGMP对慢性低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞 (PASMC)膜电压门控钾通道 (Kv通道 )的作用 ,为进一步阐明慢性低氧性肺动脉高压的发病机理提供理论依据。方法 :Wistar大鼠 ,随机分为对照组和慢性低氧组 ,低氧组大鼠每天低氧 (氧浓度 10 %± 1% ) 8h ,连续 4周。单个大鼠PASMC的获得采用急性酶分离法 (胶原酶Ⅰ型和木瓜蛋白酶 )。采用全细胞膜片钳技术测定两组PASMC的静息膜电位 (Em)和电压门控钾通道的钾离子电流 (IKV) ,观察并比较cGMP (1mmol/L)以及cGMP和蛋白激酶G(PKG)抑制剂H - 8(1mmol/L)应用后两组PASMCIKV的不同变化。结果 :慢性低氧大鼠PASMC的静息膜电位和电压门控钾通道电流明显低于正常对照组。cGMP可抑制正常和慢性低氧大鼠PASMC +5 0mV刺激时的峰值IKV[正常组从 (118 0± 5 0 )pA/pF下降到 (89 9± 16 5 )pA/pF ,n =6 ,P<0 0 5 ;慢性低氧组则从 (81 0± 5 0 )pA/pF下降到 (5 6 8± 9 1)pA/pF ,n =6 ,P <0 0 5 ],该抑制作用可被PKG的抑制剂H - 8阻断 [正常组 (119 2± 10 3)pA/pFvs (117 8± 9 1)pA/pF ,n =6 ,P >0 0 5 ;慢性低氧组 (96 8± 6 2 )pA/pFvs(98 0± 2 2 )pA/pF ,n =6 ,P >0 0 5 ]。结论 :慢性低氧抑制肺动脉平滑肌细胞的电压门控钾通道。
- 张永昶倪望甄国华张珍祥徐永健
- 关键词：低氧肺动脉钾通道
- 慢性阻塞性肺疾病患者血维生素D水平及其维生素D结合蛋白基因多态性的相关性研究被引量：14
- 2014年
- 目的 探讨湖北地区慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者维生素D水平及其维生素D结合蛋白（GC）基因多态性.方法 对250例受检者（116例吸烟COPD患者和134例健康吸烟者）进行问卷调查,收集相关资料（吸烟史、维生素D摄入、并发症等）;ELISA法检测受试者血清25-羟基维生素D（25-OHD）水平,通过Taqman探针实时荧光定量PCR对GC基因（rs4588位点和rs7041位点）进行分型;并进行肺功能检测.结果 吸烟COPD者25-OHD水平较健康吸烟者低（36.58 nmol/L比43.80 nmol/L,P＜0.001）.25-OHD水平吸烟COPD者第1秒用力呼气容积（FEV1）占预计值百分比≥80％者为39.43 nmol/L,FEV1占预计值百分比＞50％～80％者为35.32 nmol/L,FEV1占预计值百分比＞30％～50％者为32.21 nmol/L,FEV1占预计值百分比＜30％者为26.25 nmol/L（P＜ 0.01）.25-OHD水平与肺功能呈正相关（r2 =1.911,P＜0.000 1）.GC基因rs7041位点的TT型与25-OHD水平和COPD易感性存在关联（P＜0.01;OR =2.140,95％ CI1.157～3.959,P=0.015）.结论 吸烟COPD者易患维生素D缺乏,且COPD气流受限程度与维生素D水平呈负相关.GC基因rs7041位点的TT型与25-OHD水平和COPD易感性密切相关,可能成为COPD易感性筛查的候选突变位点.
- 李晓晨刘先胜徐永健熊维宁赵建平倪望陈士新
- 细胞外信号调节激酶1/2信号通道在慢性支气管哮喘模型大鼠支气管平滑肌表型变化中的作用
- 谢敏刘先胜徐永健白晶倪望陈士新
