黎庶
- 作品数：76 被引量：261H指数：9
- 供职机构：第三军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学农业科学更多>>
- 革兰阴性菌基因敲除载体的构建及其应用被引量：11
- 2009年
- 目的构建1个适用于革兰阴性菌的精确基因敲除载体并证明其有效性。方法构建的载体主要包括以下成分:π蛋白依赖性复制起点oriR6K;接合转移基因mob,使载体可以通过简单的接合方式实现转移;多克隆位点序列:EcoRⅠ-XbaⅠ-ApaⅠ-SfiⅠ-SacⅠ-NotⅠ-SpeⅠ-NdeⅠ-SacⅡ-BglⅡ;反向选择标志SacB;正向选择标志卡那霉素抗性片段。载体构建完成后,采用该载体对弗氏枸橼酸杆菌的yeeZ基因进行框架内敲除,以验证其有效性。结果成功构建了敲除载体,命名为pYG4,并对yeeZ基因进行了框架内精确敲除获得突变株。结论本研究构建的载体适用于对革兰阴性菌进行目的基因的精确敲除,将在细菌基因功能研究中得到广泛的应用。
- 王景穆媛嫒黎庶陈志瑾熊坤丛延广
- 关键词：突变株基因功能
- 肽抗生素hPAB-β3拷贝工程菌的发酵与重组蛋白纯化
- 2004年
- 胡金川饶贤才黎庶金晓琳李明张椿汪正清胡福泉
- 关键词：肽抗生素工程菌发酵重组蛋白
- 革兰阴性菌基因快速失活载体的构建及其应用被引量：1
- 2009年
- 目的构建适用于革兰阴性菌的快速基因失活载体系统并进行初步应用。方法应用分子克隆技术构建快速基因失活载体系统。载体成分主要包括:π蛋白依赖性复制起点ori R6K;编码接合转移的mob片段;多克隆位点序列;含有2个XcmⅠ酶切位点的T载体形成片段以及多种耐药片段,包括Chl(氯霉素抗性)、Tet(四环素抗性)、Km(卡那霉素抗性),获得的载体分别命名为EK3-Chl、EK3-Tet、EK3-Km。采用构建的EK3-Tet载体对弗氏枸橼酸杆菌的yeeZ基因进行插入突变,以验证其有效性。通过XcmⅠ酶切EK3-Tet质粒形成T载体状态,将PCR扩增得到的两端截短的yeeZ基因与该T载体直接连接,获得的质粒采用接合方式转移到弗氏枸橼酸杆菌ATCC8090中以实现整合,双抗培养基筛选整合突变株,对获得的突变株进行鉴定和形态观察。结果成功构建了EK3-Chl、EK3-Tet和EK3-Km,并对yeeZ基因进行插入突变获得突变株,步骤简便,工作周期短。结论上述构建的载体系统能够对革兰阴性菌进行目的基因的快速插入失活,该载体可在细菌基因功能研究中得到一定的应用。
- 龚明福滕亮张金龙黎庶胡晓梅陈志瑾熊坤丛延广
- 关键词：基因失活
- NADase细菌毒素的活性测定
- 1998年
- 旨在建立一种测定ＮＡＤａｓｅ细菌毒素活性的非放射性测定法。本方法建立了一个ＮＡＤ（辅酶Ⅰ）依赖的显色系统，在该系统中，ＮＡＤ接受乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）从乳酸脱下来的氢，再通过ＰＭＳ（吩嗪二甲酯硫酸盐）传递给ＩＮＴ（碘化硝基四氮唑蓝），使后者还原而显色。如果ＮＡＤａｓｅ毒素分解ＮＡＤ，就会打断递氢链而抑制显色反应。结果：显色系统中，ＮＡＤ含量与显色有良好线性关系（Ｒ＝０．９８９８）。绿脓杆菌外毒素Ａ分解ＮＡＤ而抑制显色反应。以毒素含量为自变量，以毒素对显色反应的抑制为应变量，建立了对数线性回归方程ｙ＝１２．５ｘ０．２６当ｙ＝５０％时［即显色系统中的ＮＡＤ有半数（２５０ｎｇ）被分解］，ｘ＝２０７（ｎｇ）。定义分解１ｎｇＮＡＤ的毒素活性为一个单位，则２０７ｎｇ毒素含有２５０个毒素活性单位。该方法的测定敏感性达到“ｎｇ”水平。
- 金晓琳黎庶胡福泉
- 关键词：活性
- 应用患者恢复期血清初步筛选猪链球菌体内诱导表达抗原被引量：3
- 2010年
- 目的利用患者恢复期血清对中国猪链球菌2型05ZY/H33强毒株体内诱导表达抗原进行初步筛选,并对建立的05ZY/H33菌株基因组表达文库及体内诱导表达抗原筛选平台的可行性进行初步验证。方法提取05ZY/H33菌基因组DNA,由Sau3AⅠ不完全酶切后回收0.5～3kbDNA片段,插入经其同尾酶BamHⅠ酶切及去磷酸化处理的pET-30a/b/c表达载体系统,转化大肠埃希菌BL21(DE3),构建05ZY/H33菌株基因组表达文库。将收集的患者恢复期血清等体积混合,经体外培养的05ZY/H33和BL21(DE3)全细胞及细菌超声裂解物吸附处理后,获得吸收血清。用此血清采用免疫印迹法筛选IPTG诱导的基因组表达文库,寻找05ZY/H33强毒株的体内诱导表达抗原。结果 05ZY/H33强毒株的基因组文库构建共得到3.2×104个重组子,重组阳性率达95%。随机挑选文库中的2000个重组子运用吸附处理后的患者恢复期血清对其进行体内诱导抗原的初步筛选,共筛到5个阳性克隆,经测序鉴定和生物信息学分析显示5个克隆子包含了05ZY/H33基因组的7个开放阅读框(ORF),其编码产物均参与细菌新陈代谢、复制增殖及损伤修复等重要的生命活动,极有可能为05ZY/H33强致病株的体内诱导抗原。结论本实验成功建立了运用中国猪链球菌2型05ZY/H33强毒株患者恢复期血清进行菌株体内诱导表达抗原筛选的技术平台,为05ZY/H33菌株体内诱导抗原的系统筛选奠定了基础。
- 宋洁黎庶丛延广陈志瑾熊坤胡福泉
- 关键词：猪链球菌2型
- C5a对血管内皮细胞表达P-选择素的影响被引量：2
- 2001年
- 黎庶汪正清
- 关键词：C5A血管内皮细胞P-选择素
- 摩氏摩根菌噬菌体MmP1内溶素基因的克隆、表达及活性鉴定
- 2009年
- 目的克隆、表达摩氏摩根菌噬菌体编码的内溶素基因,为内溶素的生物学活性检测提供纯化蛋白产物。方法以摩氏摩根菌噬菌体基因组为模板扩增内溶素全长基因,并将其插入原核表达载体pQE31中,成功构建了内溶素重组质粒pQE31-M12;将重组质粒转化大肠埃希菌JM109,获得了表达稳定的基因工程菌,并优化了表达条件;该表达菌经过超声裂解及SDS-PAGE电泳,确定重组融合蛋白的表达形式,并利用亲和层析及分子筛层析纯化目的蛋白;利用平板扩散法检测重组蛋白抑菌活性。结果内溶素基因重组质粒pQE31-M12经酶切及测序鉴定正确;重组工程菌经0.5mmol/LIPTG在37℃诱导5h后内溶素重组蛋白可获得最佳分泌型表达,对其蛋白裂解上清行非变性的Ni-NTA柱亲和层析以及分子筛层析纯化后,获得单一条带的目的蛋白;该重组蛋白对金黄色葡萄球菌的生长具有明显的抑制作用。结论成功构建了表达内溶素基因的大肠杆菌工程菌,获得了纯化的表达产物,并初步证明该内溶素蛋白可抑制金黄色葡萄球菌的生长,为进一步改组内溶素的结构并增强其抗菌功能奠定了基础。
- 朱晓艳朱军民王竞黎庶饶贤才胡福泉谭银玲
- 关键词：噬菌体基因表达纯化
- 葡萄球菌的酚溶调制蛋白被引量：1
- 2009年
- 近年来,由于临床上各种侵入性操作的增多,表皮葡萄球菌已成为医源性感染中重要的病原菌。随着感染率的不断增高及临床治疗难度的增大,表皮葡萄球菌致病机制的研究逐渐受到人们关注。多方面的研究显示一类新发现的多肽——酚溶调制蛋白在表皮葡萄球菌的致病过程中发挥重要的作用。本文即针对酚溶调制蛋白的发现、组成、表达调控及生物学活性等方面的研究进展进行综述。
- 黎庶饶贤才
- 关键词：表皮葡萄球菌NF-ΚB
- 人肽抗生素hPAB-β分子的同源模建及其突变体设计
- 2003年
- 目的 :获得肽抗生素hPAB β的分子结构 ,设计其突变体。 方法 :在序列比较的基础上 ,利用同源分子对hPAB β进行同源模建 ,并以此为基础设计其突变体 ,通过PCR引入突变法获得突变体基因序列 ,将其克隆到原核融合蛋白表达质粒 pQE CP4中 ,转化JM 10 9大肠杆菌进行表达。 结果 :模建结果表明 ,hPAB β由一个α螺旋和3个 β片层构成 ,二级结构保守 ,具有两亲性结构 ;其α螺旋推测与活性寡聚体形成有关 ;Asp4带负电 ,可能通过削弱寡聚体中央微孔口处阳电荷富集区而降低目的分子的生物学活性。利用PCR成功克隆了所设计的突变体基因 ,通过构建融合蛋白表达质粒 ,实现了突变体融合蛋白在大肠杆菌中的表达。 结论 :基于分子同源模建的肽抗生素hPAB β突变体的设计、克隆和成功表达 ,为筛选肽链更短。
- 饶贤才金晓琳黎庶胡金川胡晓梅陈志瑾胡福泉
- 关键词：肽抗生素同源模建突变体
- 推行本科生导师制 提升医学微生物学教学质量被引量：10
- 2011年
- 本科生导师制是在适应新时期高等医学教育培养体制下产生的一种"以满足学生个性发展和创新精神需要"为理念的制度,它在很大程度上克服了医学微生物学传统教学模式的弊端,体现了"以学生为主体,以提高能力素质为核心"的教学理念,充分调动了学生的积极性和创造力,增强了学生的实践技能和综合素质,切实提高了医学微生物学的教学质量,值得深入学习和推广。
- 李明申晓冬胡晓梅黎庶饶贤才汪正清胡福泉
- 关键词：本科生导师制医学微生物学教学模式教学质量
