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密码子优化的HPV16 L2E7基因在大肠杆菌中高效表达被引量：4: 2007年; 目的提高HPV16L2E7融合基因在大肠杆菌中的表达水平,为中试研究提供高表达量的疫苗候选株。方法根据大肠杆菌偏爱密码子,利用Synthetic Gene Designer软件对L2E7全基因进行密码子优化,将分段合成的基因分部插入到pET9a中,经酶切和测序鉴定无误后转化BL21(DE3+)中,用异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。表达的融合蛋白进行SDS-PAGE胶和Western blot鉴定。同时还进行梯度实验分别对诱导的温度、时间和IPTG诱导时菌体浓度进行优化,并对蛋白的纯化方案进行摸索。结果优化后的pET9aSL2E7AB在大肠杆菌中得到高效表达,诱导条件优化后的目的蛋白占全菌60%左右。结论成功得到了具有较高表达水平的疫苗候选株。; 高见赵莉任皎张卉阮力田厚文; 关键词：人乳头瘤病毒密码子优化大肠杆菌

HPV融合蛋白、基因、载体、菌株、制备方法及用途: 本发明涉及一种在大肠杆菌中高效表达的人乳头瘤病毒16型L2E7重组蛋白的密码子优化基因，将其插入原核表达载体pET9a，优化基因获得高效表达，表达水平占全菌的50％，表达蛋白经纯化后免疫小鼠，实验结果表明该蛋白与未经优化...; 田厚文高见赵莉任皎张卉阮力; 文献传递

HPV16型L2N120E7E6融合蛋白、基因、制备方法及用途: 本发明涉及一种在大肠杆菌中高效表达的人乳头瘤病毒16型L2N120E7E6重组蛋白的密码子优化基因，将其插入原核表达载体pET9a，优化基因获得高效表达，表达水平占全菌的50％，表达蛋白经纯化后免疫小鼠，实验结果表明该蛋...; 田厚文赵莉毛子安庄昉成任皎高见冯靖庞正姜云水阮力

HPV 16型E7E6融合蛋白基因、表达载体、方法、细胞和用途: 本发明提供一种编码HPV 16型E7E6融合蛋白的基因、表达载体、方法、细胞和用途。本发明利用重组腺病毒，将经修饰失去转化活性的E6、E7蛋白基因融合，并根据融合蛋白的氨基酸序列进行哺乳细胞密码子优化改造，使之在哺乳细胞...; 田厚文任皎赵莉高见冯靖庞正吴小兵阮力; 文献传递

人乳头瘤病毒16型融合蛋白的大肠杆菌高效表达及对肿瘤生长的抑制作用被引量：4: 2012年; 目的在原核表达系统高效表达人乳头瘤病毒（HPV）16型L2N120E7E6融合蛋白，获得具有高表达水平和强免疫原性的HPV治疗性融合蛋白疫苗。方法利用重叠PCR方法构建经密码子优化的HPVl6L2N120E7E6融合基因，然后将其插入pETga原核表达载体中，采用Westernblot法对表达蛋白进行鉴定。对HPVl6L2N120E7E6融合蛋白免疫的小鼠进行特异性抗体和细胞免疫反应的检测，评价其对肿瘤生长的抑制作用。结果密码子优化的HPVl612N120E7E6基因能在原核表达载体pET9a中高效表达，表达水平约占全菌蛋白的48．6％。HPVl6L2N120E7E6融合蛋白免疫的小鼠可检测到针对L2、E7和E6的高滴度抗体，抗体滴度分别为1：40317、1：16000和1：800。CPGl826佐剂和HPVl6L2N120E7E6融合蛋白免疫小鼠后，可产生较强的针对HPVl6E749-57肽特异性T细胞免疫反应和较弱的E6特异性T细胞免疫反应，其分泌γ-干扰素的效应T细胞斑点数分别为（464．00±35．52）个和（47．00±11．67）个。HPVl6L2N120E7E6融合蛋白对小鼠移植瘤生长有明显的抑制作用，有80．0％（8／10）的小鼠不成瘤。结论HPVl6L2N120E7E6融合蛋白可作为治疗HPVl6慢性感染和宫颈癌手术后辅助治疗的候选疫苗。; 赵莉高孟高见任皎张卉田厚文谭文杰阮力; 关键词：人乳头瘤病毒16 宫颈肿瘤免疫疗法

HPV16型L2N120E7E6融合蛋白、基因、制备方法及用途: 本发明涉及一种在大肠杆菌中高效表达的人乳头瘤病毒16型L2N120E7E6重组蛋白的密码子优化基因，将其插入原核表达载体pET9a，优化基因获得高效表达，表达水平占全菌的50％，表达蛋白经纯化后免疫小鼠，实验结果表明该蛋...; 田厚文赵莉毛子安庄昉成任皎高见冯靖庞正姜云水阮力; 文献传递

HPV16E7E6重组腺病毒的构建及免疫效果评价被引量：3: 2012年; 目的构建用于宫颈癌治疗的HPV16E7E6重组腺病毒并评价其免疫效果。方法根据哺乳细胞使用密码子的偏嗜性设计HPV16E7E6融合蛋白表达优势密码子基因序列并合成。将合成的E7E6基因插入腺病毒重组穿棱质粒pCD316后，与Ad5腺病毒骨架质粒共转染293细胞，重组病毒经单斑纯化并进行目的基因插入及表达的鉴定。扩增纯化重组病毒后免疫小鼠，评价其免疫活性。结果PCR试验证明E7E6密码子优化基因成功插入Ad5病毒；Western blot检测结果表明重组腺病毒中E7E6优化基因能高效表达，该重组腺病毒免疫C57小鼠后，可诱发强特异性T细胞免疫应答，在小鼠体内能完全抑制5×10^4TC-1移植瘤细胞的生长。结论重组HPV16E7E6腺病毒可作为治疗HPV慢性感染或宫颈癌的候选疫苗。; 任皎赵莉田厚文高见冯靖庞正吴小兵谭文杰阮力; 关键词：人乳头瘤病毒16型宫颈癌免疫治疗腺病毒载体

密码子优化的HPV16型L2E7融合基因的原核表达及其蛋白的免疫效果观察: 本文的目的是提高L2E7融合蛋白在大肠杆菌中的表达量，为后期纯化打下良好基础，同时能降低HPV治疗性疫苗生产成本。本试验主要从密码子偏性等方面来进行优化从而期望提高L2E7融合蛋白在大肠杆菌中表达量，经密码子优化后的基因...; 高见; 关键词：病毒疫苗原核表达; 文献传递

HPV 16型E7E6融合蛋白基因、表达载体、方法、细胞和用途: 本发明提供一种编码HPV 16型E7E6融合蛋白的基因、表达载体、方法、细胞和用途。本发明利用重组腺病毒，将经修饰失去转化活性的E6、E7蛋白基因融合，并根据融合蛋白的氨基酸序列进行哺乳细胞密码子优化改造，使之在哺乳细胞...; 田厚文任皎赵莉高见冯靖庞正吴小兵阮力

表达HPV-16结构蛋白的重组痘苗病毒疫苗免疫效果研究被引量：2: 2007年; 目的研究表达HPV—16结构蛋白L1和12的重组痘苗病毒（rVVL1L2）的免疫效果。方法以重组痘苗病毒rVVL1L2免疫C57BIJ6小鼠，用酶联免疫（ELISA）和酶联免疫斑点（ELISPOT）方法检测重组痘苗病毒诱发小鼠产生的体液免疫和细胞免疫应答水平；利用C3肿瘤细胞在C57BIJ6小鼠中的成瘤模型，观察重组痘苗病毒在抗肿瘤移植实验和肿瘤生长抑制实验中对小鼠的免疫保护效果。结果重组痘苗病毒rVVL1L2免疫的小鼠，可以检测到针对L1和12特异的抗体、L1165-175肽特异性的、分泌IFN-的T细胞；同时可以观察到免疫后的C57BI/6小鼠，可以有效预防HPV．16相关肿瘤细胞（1．5×10^5C3细胞）的攻击；对已产生的肿瘤，可以延缓肿瘤细胞的生长速度。结论重组痘苗病毒rVVL1L2可以有效诱发小鼠产生体液免疫和细胞免疫应答，为研究预防和治疗HPV-16感染的疫苗提供了实验资料。; 赵莉任皎高见张卉韩立群范江涛田厚文阮力; 关键词：人乳头状瘤病毒子宫颈癌痘苗病毒

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高见

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