张卉
- 作品数：10 被引量：28H指数：4
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人乳头瘤病毒16型融合蛋白的大肠杆菌高效表达及对肿瘤生长的抑制作用被引量：4
- 2012年
- 目的在原核表达系统高效表达人乳头瘤病毒（HPV）16型L2N120E7E6融合蛋白，获得具有高表达水平和强免疫原性的HPV治疗性融合蛋白疫苗。方法利用重叠PCR方法构建经密码子优化的HPVl6L2N120E7E6融合基因，然后将其插入pETga原核表达载体中，采用Westernblot法对表达蛋白进行鉴定。对HPVl6L2N120E7E6融合蛋白免疫的小鼠进行特异性抗体和细胞免疫反应的检测，评价其对肿瘤生长的抑制作用。结果密码子优化的HPVl612N120E7E6基因能在原核表达载体pET9a中高效表达，表达水平约占全菌蛋白的48．6％。HPVl6L2N120E7E6融合蛋白免疫的小鼠可检测到针对L2、E7和E6的高滴度抗体，抗体滴度分别为1：40317、1：16000和1：800。CPGl826佐剂和HPVl6L2N120E7E6融合蛋白免疫小鼠后，可产生较强的针对HPVl6E749-57肽特异性T细胞免疫反应和较弱的E6特异性T细胞免疫反应，其分泌γ-干扰素的效应T细胞斑点数分别为（464．00±35．52）个和（47．00±11．67）个。HPVl6L2N120E7E6融合蛋白对小鼠移植瘤生长有明显的抑制作用，有80．0％（8／10）的小鼠不成瘤。结论HPVl6L2N120E7E6融合蛋白可作为治疗HPVl6慢性感染和宫颈癌手术后辅助治疗的候选疫苗。
- 赵莉高孟高见任皎张卉田厚文谭文杰阮力
- 关键词：人乳头瘤病毒16宫颈肿瘤免疫疗法
- 人乳头状瘤病毒16型不同基因疫苗联合免疫的实验研究被引量：6
- 2006年
- 目的探索联合免疫策略在预防和治疗人乳头状瘤病毒16型(HPV16)相关肿瘤中的作用。方法在C57BL／6动物模型中,观察了表达HPV16基因的融合蛋白L2E7疫苗和重组痘苗病毒mE67疫苗的不同联合免疫方式在预防和治疗HPV16相关肿瘤中的作用。用酶联免疫斑点(ELISPOT)和细胞毒T淋巴细胞(CTL)反应评价它们在诱发机体产生细胞免疫应答中的作用。结果我们发现以HPV16 L2E7融合蛋白+佐剂(CpG)初免,用重组痘苗病毒rVVmE67加强免疫的联合免疫方式在C57BL/6小鼠实验中可以有效预防和治疗HPV16相关肿瘤的攻击。ELISPOT可以检测到高水平的E749-57肽特异性,分泌IFN-γ的效应T细胞。CTL检测同样反应出这种联合免疫方式所诱发的CTL细胞可以有效识别并杀伤含HPV16 E6／E7的靶细胞。结论以HPV16 12E7融合蛋白+CpG初免,用重组痘苗病毒rVVmE67加强的联合免疫策略可以有效防治HPV16相关肿瘤,为进一步研究提供了科学基础。
- 范江涛赵莉陈心秋任皎张卉阮力田厚文
- 关键词：人乳头状瘤病毒联合免疫疫苗
- HPV融合蛋白、基因、载体、菌株、制备方法及用途
- 本发明涉及一种在大肠杆菌中高效表达的人乳头瘤病毒16型L2E7重组蛋白的密码子优化基因，将其插入原核表达载体pET9a，优化基因获得高效表达，表达水平占全菌的50％，表达蛋白经纯化后免疫小鼠，实验结果表明该蛋白与未经优化...
- 田厚文高见赵莉任皎张卉阮力
- 文献传递
- HPV11型L2E7融合蛋白的原核表达及其免疫效果观察
- 根据各种流行病学资料,肛门生殖器疣/(GW/)是世界上一个不容忽视的公众健康问题,每年用于GW的诊断治疗费用给人们带来了不小的经济负担。传统的治疗方法存在一定的缺陷,而且复发率高,于是人们在寻找更有效的治疗或辅助治疗方法...
- 张卉
- 关键词：人乳头瘤病毒免疫效果
- 文献传递
- 密码子优化的HPV16 L2E7基因在大肠杆菌中高效表达被引量：4
- 2007年
- 目的提高HPV16L2E7融合基因在大肠杆菌中的表达水平,为中试研究提供高表达量的疫苗候选株。方法根据大肠杆菌偏爱密码子,利用Synthetic Gene Designer软件对L2E7全基因进行密码子优化,将分段合成的基因分部插入到pET9a中,经酶切和测序鉴定无误后转化BL21(DE3+)中,用异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。表达的融合蛋白进行SDS-PAGE胶和Western blot鉴定。同时还进行梯度实验分别对诱导的温度、时间和IPTG诱导时菌体浓度进行优化,并对蛋白的纯化方案进行摸索。结果优化后的pET9aSL2E7AB在大肠杆菌中得到高效表达,诱导条件优化后的目的蛋白占全菌60%左右。结论成功得到了具有较高表达水平的疫苗候选株。
- 高见赵莉任皎张卉阮力田厚文
- 关键词：人乳头瘤病毒密码子优化大肠杆菌
- 表达HPV16 L1、L2和E7蛋白的非复制重组痘苗病毒诱发的抗肿瘤免疫反应被引量：9
- 2009年
- 目的:评价表达HPV16 L1、L2E7的非复制重组痘苗病毒疫苗的抗肿瘤免疫反应。方法:采用肿瘤预防、肿瘤治疗和肿瘤切除等方法,观察疫苗NTVJL1/L2E7的抗肿瘤效果,用酶联免疫斑点(ELISPOT)和CTL检测该疫苗在小鼠体内诱发的细胞免疫应答。结果:在肿瘤预防和肿瘤治疗试验中,疫苗可以分别使60%和50%的小鼠免受HPV16阳性的治疗细胞攻击,肿瘤切除试验中,疫苗可以使70%的小鼠免于肿瘤复发,与对照组之间的差异具有显著性。ELISPOT和CTL均检测出强的特异性细胞免疫水平。结论:NTVJL1/L2E7能够在小鼠体内诱发出理想的抗肿瘤免疫反应,可以作为防治宫颈癌的候选疫苗。
- 范江涛陈心秋张卉
- 关键词：痘苗免疫反应
- HPV融合蛋白、基因、载体、菌株、制备方法及用途
- 本发明涉及一种在大肠杆菌中高效表达的人乳头瘤病毒16型L2E7重组蛋白的密码子优化基因，将其插入原核表达载体pET9a，优化基因获得高效表达，表达水平占全菌的50％，表达蛋白经纯化后免疫小鼠，实验结果表明该蛋白与未经优化...
- 田厚文高见赵莉任皎张卉阮力
- HPV11型L2E7融合蛋白的原核表达及其免疫效果观察被引量：3
- 2007年
- 目的构建人乳头瘤病毒11型L2E7原核表达系统pET9aHPV11L2E7，并纯化蛋白进行小鼠免疫效果研究。方法从尖锐湿疣组织中扩增人乳头瘤病毒11型12、E7基因片段，构建DET9aHPV11L2E7原核表达重组质粒并测序，在大肠埃希菌宿主菌BL21（DE3＋）中经IPTG诱导表达融合蛋白L2E7（553个氨基酸），经SDS—PAGE电泳和Western Blot进行鉴定。CM离子交换介质纯化蛋白免疫BALB／c小鼠，进行细胞免疫水平和体液免疫水平的检测。结果成功构建了pET9 aHPV11L2E7原核表达系统，纯化获得的HPV11L2E7蛋白免疫BALB／c小鼠后能检测到针对HPV11E7特异性的细胞免疫，血清中能检测到高效价抗HPV11L2E7抗体。结论纯化的HPV11L2E7融合蛋白能够引发特异性细胞和体液免疫反应，能作为尖锐湿疣免疫治疗候选疫苗。
- 张卉赵莉任皎高见边涛范江涛阮力陈心秋田厚文
- 关键词：疫苗
- 人乳头瘤病毒11型L2NE7E6融合蛋白的原核表达及其诱发的T细胞免疫反应被引量：1
- 2014年
- 目的:在原核表达系统中表达人乳头瘤病毒11型(HPV11)L2NE7E6融合蛋白,纯化蛋白后免疫小鼠,检测其诱发的T细胞免疫水平,并筛选HPV11 E6、E7特异的T细胞表位肽。方法:用重叠PCR方法构建HPV11L2NE7E6融合基因并插入原核表达质粒,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达融合蛋白L2NE7E6,用SDS-PAGE和West-ern印迹鉴定融合蛋白的表达。Q柱纯化蛋白后免疫C57BL/6小鼠,分别用覆盖HPV11 E6和E7蛋白序列的肽库,采用酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测其诱发的E7、E6特异的T细胞免疫反应,并筛选E7、E6特异的T细胞表位肽。结果:在原核表达系统中有效表达了HPV11 L2NE7E6融合蛋白,蛋白纯化后免疫C57BL/6小鼠,分别能检测到针对HPV11 E6、E7肽库刺激产生的特异性T细胞免疫反应。经肽池筛选到1条强的E6 T细胞表位肽E6aa41-55(AEI-YAYAYKNLKVVW);而E7只筛选到2条弱的T细胞表位肽,分别为E7aa53-67(QILTCCCGCDSNVRL)和E7aa73-87(DGDIRQLQDLLLGTL)。结论:HPV11 L2NE7E6融合蛋白能诱发小鼠产生E6、E7特异性细胞免疫反应,可作为尖锐湿疣免疫治疗候选疫苗。
- 任皎赵莉张卉郝明强周玲田厚文谭文杰阮力
- 关键词：人乳头瘤病毒11型尖锐湿疣T细胞表位免疫治疗
- 表达HPV-16结构蛋白的重组痘苗病毒疫苗免疫效果研究被引量：2
- 2007年
- 目的研究表达HPV—16结构蛋白L1和12的重组痘苗病毒（rVVL1L2）的免疫效果。方法以重组痘苗病毒rVVL1L2免疫C57BIJ6小鼠，用酶联免疫（ELISA）和酶联免疫斑点（ELISPOT）方法检测重组痘苗病毒诱发小鼠产生的体液免疫和细胞免疫应答水平；利用C3肿瘤细胞在C57BIJ6小鼠中的成瘤模型，观察重组痘苗病毒在抗肿瘤移植实验和肿瘤生长抑制实验中对小鼠的免疫保护效果。结果重组痘苗病毒rVVL1L2免疫的小鼠，可以检测到针对L1和12特异的抗体、L1165-175肽特异性的、分泌IFN-的T细胞；同时可以观察到免疫后的C57BI/6小鼠，可以有效预防HPV．16相关肿瘤细胞（1．5×10^5C3细胞）的攻击；对已产生的肿瘤，可以延缓肿瘤细胞的生长速度。结论重组痘苗病毒rVVL1L2可以有效诱发小鼠产生体液免疫和细胞免疫应答，为研究预防和治疗HPV-16感染的疫苗提供了实验资料。
- 赵莉任皎高见张卉韩立群范江涛田厚文阮力
- 关键词：人乳头状瘤病毒子宫颈癌痘苗病毒
