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马翠萍
作品数:
4
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供职机构:
中国海洋大学医药学院
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发文基金:
国家高技术研究发展计划
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相关领域:
生物学
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合作作者
路新枝
中国海洋大学医药学院
于文功
中国海洋大学医药学院
褚艳
中国海洋大学
韩峰
中国海洋大学
石超
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一种β-琼胶酶基因agaB及其制备方法和应用
一种β-琼胶酶基因agaB,其特征在于它是编码假别单胞菌CY24的β-琼胶酶的基因。本发明的β-琼胶酶基因agaB编码的β-琼胶酶能够特异性地降解琼胶产生聚合度为8-14的新琼寡糖,每种主要新琼寡糖在降解产物中的含量大于...
于文功
马翠萍
路新枝
韩峰
褚艳
石超
文献传递
一种制造新琼八糖、新琼十糖和新琼十二糖的方法
一种制造新琼八糖、新琼十糖、新琼十二糖的方法,包括利用β-琼胶酶将琼胶或琼脂糖水解为不同大小的新琼寡糖,并用色谱分离不同聚合度的新琼寡糖,其特征在于使用β-琼胶酶agaB基因高效表达的大肠杆菌BL21(DE3)-pET2...
于文功
李京宝
褚艳
马翠萍
韩峰
路新枝
文献传递
一种β-琼胶酶基因agaB及其制备方法和应用
一种β-琼胶酶基因agaB,其特征在于它是编码假别单胞菌CY24的β-琼胶酶的基因。本发明的β-琼胶酶基因agaB编码的β-琼胶酶能够特异性地降解琼胶产生聚合度为8-14的新琼寡糖,每种主要新琼寡糖在降解产物中的含量大于...
于文功
马翠萍
路新枝
韩峰
褚艳
石超
文献传递
β-琼胶酶AgaB催化活性的定向进化
2008年
用体外定向进化技术提高了β-琼胶酶 AgaB 热稳定突变酶 M446的催化活性。采用易错 PCR 和化学诱变法相结合的方法,构建了 M446的突变体文库;利用琼胶酶降解琼胶在平板上产生水解圈的特性,建立了阳性克隆的高通量筛选体系。最终筛选得到酶活性得到提高且保持较高耐热性的突变酶 M117,其酶活提高为突变酶 M446的3倍。测序分析发现编码突变酶 M117的 DNA 序列中有4处点突变,其中2处为同义突变,另外2处引发氨基酸替换,分别为 R9K 和 I111V。对突变酶 M117与 M446的动力学常数进行了比较,发现 M117的 Km 值降低了93.4%,Kcat/Km 值提高了15倍,由此可以推断突变酶M117比活力提高的主要原因是酶与底物的亲和能力提高。
马怡茗
路新枝
石超
马翠萍
于文功
关键词:
定向进化
易错PCR
化学诱变
酶活力
Β-琼胶酶
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