邢莹
- 作品数：11 被引量：27H指数：4
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- 相关领域：农业科学更多>>
- 牛附红细胞体单管套式PCR检测方法的建立被引量：2
- 2011年
- 为快速、准确地检测出牛附红细胞体,根据GenBank上发表的牛温氏附红细胞体(Mycoplasma wenyonii)l6S rRNA基因序列(登录号AF016546)设计合成内外2对引物,建立了牛附红细胞体单管套式PCR检测方法,并进行了特异性、敏感性及应用试验。结果:建立的牛附红细胞体单管套式PCR检测方法扩增的片段大小为361 bp,与GenBank中相应序列同源性为98%,该方法扩增不出牛瑟氏泰勒虫、新孢子虫、布氏杆菌及牛无乳链球菌等基因片段,检测出标准模板DNA的最小量为1.22 fgμ/L。通过对吉林省延边地区66份血液样本的临床检测显示,单管套式PCR检出率28.8%,高于常规PCR的21.2%和鲜血压片镜检的12.1%,具有准确、特异、敏感等优点,是检测牛附红细胞体的一种新型、可靠的诊断技术。
- 邢莹郑秀红贾立军薛书江张守发
- 关键词：RRNA
- 猪附红细胞体单管巢式PCR诊断方法的建立及应用被引量：9
- 2011年
- 根据GenBank上发表的猪附红细胞体16S rRNA基因序列(登录号U88565)设计合成2对引物,建立了猪附红细胞体单管巢式PCR诊断方法,经酶切分析、单管巢式PCR进一步鉴定后进行序列测定,并与血涂片染色镜检、常规PCR进行了比较。结果:扩增的猪附红细胞体基因序列与GenBank中发表的猪附红细胞体基因序列(U88565)同源性为96%;特异性试验表明,设计的引物不能扩增弓形虫、链球菌、大肠杆菌、葡萄球菌及羊附红细胞体等病原体;敏感性试验表明,单管巢式PCR诊断方法最低能够检测出0.116 fg的标准模板DNA。通过对75份血液样本的检测表明,建立的单管巢式PCR方法明显优于血涂片染色镜检法及常规PCR方法,具有较高的敏感性和实用性。本试验建立的单管巢式PCR诊断方法具有特异、敏感、实用等优点,为猪附红细胞体的检测提供了一种新型、可靠的诊断技术。
- 郑秀红贾立军邢莹张守发
- 关键词：猪附红细胞体
- 东北三省部分地区猪附红细胞体16S rRNA核苷酸序列比较分析
- 2010年
- 为了解东北三省猪附红细胞体基因的流行变异情况,本试验选取相对保守的16S rRNA核苷酸序列作为分析对象,采用酚仿抽提法提取吉林株、辽宁株和黑龙江株猪附红细胞体基因组DNA,用一对特异性引物扩增目的DNA,然后分别与pMD-18T载体连接并转化BL-21菌株,经重组质粒PCR鉴定后并测序,比较其核苷酸序列。从同源性分析结果可以看出,黑龙江株、辽宁株与广东株猪附红细胞体核苷酸同源性最高,均达到100%;吉林株与美国株猪附红细胞体的核苷酸同源性最高,为97%。系统进化分析结果显示,黑龙江株与辽宁株猪附红细胞体亲缘关系最近,而与吉林株猪附红细胞体较远。结果表明,吉林株、辽宁株和黑龙江株猪附红细胞体16S rRNA基因序列存在差异。
- 李月梅邢莹张守发薛书江郑秀红吕舟
- 关键词：附红细胞体RRNA核苷酸序列东北三省
- 猪附红细胞体SRP54基因的克隆及真核表达质粒的构建
- 2012年
- 为了研究猪附红细胞体信号识别颗粒54(SRP54)基因的功能,试验根据GenBank上发表的猪附红细胞体KI_3806全基因组序列(登录号为NC_015153.1)中信号识别颗粒(SRP)蛋白基因设计合成1对特异性引物,采用PCR方法扩增猪附红细胞体SRP54基因片段,将扩增产物克隆至pMD18-T载体上,重组质粒经PCR和酶切鉴定后测序,并将SRP54基因与pVAXⅠ真核表达载体连接。结果表明:克隆的SRP54基因片段长1 173 bp,与GenBank中原序列同源性为97%,构建的真核表达质粒pVAXⅠ-SRP54经PCR和酶切鉴定正确,为猪附红细胞体SRP54基因的后续研究奠定了基础。
- 邢莹贾立军张守发
- 关键词：猪附红细胞体克隆真核表达质粒
- 猪附红细胞体巢式PCR诊断方法的建立及初步应用被引量：2
- 2011年
- 为建立一种更加准确、敏感的猪附红细胞体检测方法,本试验根据猪附红细胞体特异的DNA序列(AJ504999)设计2对巢式PCR引物,建立了巢式PCR检测方法。筛选该检测方法的最佳反应条件,并进行了特异性、敏感性及临床样本检测试验。结果表明,建立的巢式PCR对猪附红细胞体基因组DNA能扩增出特异性片段,而对弓形虫、链球菌、牛瑟氏泰勒虫、牛附红细胞体基因组DNA扩增反应结果均为阴性;DNA最低检测量为0.124 fg/μL;通过对55份临床样本的检测,该巢式PCR较常规PCR的阳性检出率高23.7%。本试验为猪附红细胞体病的诊断提供了一种更为特异、敏感的检测技术。
- 郑秀红邢莹贾立军薛书江甄立家张守发
- 关键词：猪附红细胞体巢式PCR
- 猪附红细胞体环介导等温扩增快速检测方法的建立被引量：5
- 2010年
- 为了建立猪附红细胞体的快速实用分子生物学检测方法,试验采用环介导等温扩增技术(LAMP)建立一种灵敏、特异、快速的分子生物学检测方法,用10倍系列稀释的DNA样品对该检测方法的灵敏度进行了测试,同时对新孢子虫、弓形虫、瑟氏泰勒虫病原体进行检测以验证LAMP技术的特异性。结果表明:利用LAMP技术成功检测到猪附红细胞体基因区,此方法的灵敏度可达到5×105倍稀释的DNA分子水平,并且特异性强,对新孢子虫、弓形虫、瑟氏泰勒虫病原体检测均为阴性。
- 李月梅薛书江邢莹郑秀红吕舟张守发
- 关键词：猪附红细胞体环介导等温扩增技术
- 猪附红细胞体JL-2基因的原核表达及重组蛋白间接ELISA方法的建立
- 猪附红细胞体病是由猪附红细胞体（Eperythrozoon suis）寄生于血浆、红细胞表面或侵入红细胞内部，主要以贫血、黄疸、发热等临床症状为特征的血液性传染病。 目前，对猪附红细胞体病的防治尚无有效方法，而且在NC...
- 邢莹
- 关键词：猪附红细胞体重组蛋白ELISA方法临床症状
- 文献传递
- 弓形虫环介导等温扩增快速检测方法的建立被引量：5
- 2009年
- 为了建立弓形虫的快速检测方法,本研究建立了一种灵敏、特异、快速的分子生物学检测方法——环介导等温扩增技术(LAMP)。用10倍系列稀释的DNA样品对该检测方法的灵敏度进行了测试,同时通过对扩增产物做内切酶验证;为证明LAMP技术的特异性,对新孢子虫、附红细胞体、瑟氏泰勒虫等病原体进行检测。结果显示:利用LAMP技术成功检测到弓形虫基因区,此方法的灵敏度可达到能检测5个拷贝DNA分子水平,酶切分析结果正确,并且特异性强,对新孢子虫、附红细胞体、瑟氏泰勒虫等病原体检测均为阴性。说明LAMP技术可应用于弓形虫的快速检测。
- 李月梅薛书江其木格邢莹张守发
- 关键词：弓形虫环介导等温扩增技术
- 牛附红细胞体LAMP检测方法的建立被引量：5
- 2011年
- 为建立一种快捷、灵敏的牛附红细胞体检测方法,本研究根据GenBank上发表的16S rRNA基因(登录号:AF016546)序列设计合成2对LAMP特异引物,建立了检测牛附红细胞体环介导等温扩增(LAMP)方法,并优化了LAMP的各反应条件,进行了敏感性和特异性试验。LAMP扩增产物经电泳、显色鉴定。结果显示,LAMP方法扩增牛附红细胞体产物呈特征性梯状条带,显色反应呈现绿色荧光;敏感性检测最低浓度为25.6 fg/μL;特异性试验结果显示,牛附红细胞体检测管显色后呈阳性,而猪附红细胞体、牛新孢子虫、弓形虫及牛瑟氏泰勒虫等对照组均呈阴性,说明本研究建立的LAMP方法具有灵敏、特异、快速等优点,适合于牛附红细胞体的检测。
- 郑秀红甄立家邢莹薛书江贾立军张守发
- 关键词：16SRRNA基因环介导等温扩增技术
- 猪附红细胞体SRP54基因的克隆及表达质粒的构建
- 2011年
- 根据GenBank上发表的猪附红细胞体全基因组序列(登录号:NC_015153.1),针对其中的信号识别颗粒(SRP)基因设计合成一对特异性引物,应用PCR方法扩增猪附红细胞体信号识别颗粒54(SRP54)基因片段,克隆至pMD18-T simple载体上,经PCR、酶切初步鉴定正确后进行测序,对所克隆片段进行生物信息学分析,并构建重组表达质粒pGEX-SRP54。结果显示,克隆的SRP54基因片段大小为1 164bp,与GenBank中参考序列的同源性为97%;该基因编码381个氨基酸,编码蛋白的等电点为6.51,无跨膜区;重组表达质粒pGEX-SRP54构建正确。
- 邢莹贾立军张守发
- 关键词：猪附红细胞体克隆生物信息学分析表达质粒
