- 东北三省猪附红细胞体16S rRNA核苷酸序列比对
- 为了解东北三省猪附红细胞体基因变异情况,采用CTAB法分别提取黑龙江株、辽宁株、吉林株猪附红细胞体基因组DNA。通过聚合酶链式反应(PCR)扩增出了一条约541bp的基因片段,与预期结果相一致,并分别将黑龙江株、辽宁株、...
- 李月梅陈莹贾立军张守发
- 关键词：东北三省猪附红细胞体
- 文献传递
- 东北三省部分地区猪附红细胞体16S rRNA核苷酸序列比较分析
- 2010年
- 为了解东北三省猪附红细胞体基因的流行变异情况,本试验选取相对保守的16S rRNA核苷酸序列作为分析对象,采用酚仿抽提法提取吉林株、辽宁株和黑龙江株猪附红细胞体基因组DNA,用一对特异性引物扩增目的DNA,然后分别与pMD-18T载体连接并转化BL-21菌株,经重组质粒PCR鉴定后并测序,比较其核苷酸序列。从同源性分析结果可以看出,黑龙江株、辽宁株与广东株猪附红细胞体核苷酸同源性最高,均达到100%;吉林株与美国株猪附红细胞体的核苷酸同源性最高,为97%。系统进化分析结果显示,黑龙江株与辽宁株猪附红细胞体亲缘关系最近,而与吉林株猪附红细胞体较远。结果表明,吉林株、辽宁株和黑龙江株猪附红细胞体16S rRNA基因序列存在差异。
- 李月梅邢莹张守发薛书江郑秀红吕舟
- 关键词：附红细胞体RRNA核苷酸序列东北三省
- 应用PCR方法调查东北三省部分地区猪附红细胞体病流行情况被引量：6
- 2008年
- 为了解东北三省猪附红细胞体感染情况,应用血液压滴标本镜检法和PCR检测方法对东北三省部分地区600头份猪血液样本进行了检测。结果:血液压滴标本镜检法检测阳性率为87.3%(524/600),PCR检测方法检测阳性率为91.5%(549/600)。其中种母猪阳性率为87.2%(34/39),育肥猪阳性率为90.8%(347/382),断奶仔猪阳性率为92.9%(78/84),哺乳仔猪阳性率为94.7%(90/95);黑龙江省阳性率为93.5%(187/200),辽宁省阳性率为89.5%(179/200),吉林省阳性率为91.5%(183/200)。结果表明,东北三省猪附红细胞体感染情况严重。
- 李月梅薛书江其木格张守发
- 关键词：PCR猪附红细胞体流行病学调查
- 猪附红细胞体双抗体夹心ELISA检测方法的建立和应用被引量：4
- 2021年
- 为建立猪附红细胞体双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)检测方法,本研究以抗猪附红细胞体单克隆抗体为捕获抗体,兔抗猪附红细胞体多克隆抗体为检测抗体,优化工作条件,建立猪附红细胞体DAS-ELISA检测方法。结果显示:该方法的最佳工作条件为:捕获抗体包被浓度为5.42 g/mL,检测抗体浓度为6.84 g/mL,酶标二抗的稀释倍数为1∶2000;判定标准为:当检测样品OD492>0.290为阳性;该方法与弓形虫、猪链球菌、猪肺炎支原体和猪繁殖与呼吸综合症病毒等常见猪病原微生物均无交叉反应,特异性好,敏感度可达3.25 mg/L,其重复性变异系数均小于10%;平行检测68份猪临床样品,DAS-ELISA检测的阳性率为29.4%,比血涂片染色镜检阳性率(19.1%)高10.3%。本研究所建立的猪附红细胞体DAS-ELISA检测方法可以作为猪附红细胞体的快速检测方法。
- 李月梅金雪梅张守发张守发许应天相思宇薛书江薛书江
- 关键词：猪附红细胞体双抗体夹心ELISA
- 牛新孢子虫病LAMP检测方法的建立被引量：11
- 2009年
- 为建立一种快捷、灵敏的牛新孢子虫病检测方法,根据GenBank上登录的新孢子虫NcSAG1基因(AF132217)序列设计合成了2对环介导等温扩增(LAMP)特异引物,建立了检测牛新孢子虫病的LAMP技术,并优化了LAMP的各反应条件,进行了敏感性和特异性试验。结果显示,LAMP方法扩增牛新孢子虫的电泳产物呈特征性梯状条带,显色反应呈现绿色荧光,酶切鉴定出现目的条带,LAMP方法检测的敏感性为5×105copies/μL;特异性试验显示,新孢子虫检测管显色后呈阳性,而瑟氏泰勒虫、弓形虫和附红细胞体等对照组均呈阴性。表明,本研究建立的LAMP方法具有灵敏、特异、快速等优点,适合于牛新孢子虫病的检测。
- 金超贾立军曹世诺栾杨王娜李月梅张守发
- 关键词：犬新孢子虫环介导等温扩增
- 弓形虫ROP4基因的克隆及原核表达载体的构建
- 2010年
- 其木格陈健贾立军李月梅金超张守发
- 关键词：原核表达载体弓形虫克隆有核细胞宿主细胞红细胞
- 东北三省猪附红细胞体16S rRNA核苷酸序列比对
- 李月梅陈莹贾立军张守发
- 猪附红细胞体亚单位疫苗对Balb/c小鼠的免疫试验被引量：1
- 2010年
- 为检测猪附红细胞体亚单位疫苗对Balb/c小鼠的免疫保护作用,试验将猪附红细胞体抗原与白油佐剂混合制备亚单位疫苗后免疫Balb/c小鼠,应用间接ELISA方法测定体液免疫水平,并进行攻毒试验。结果表明:在三免后第7天时,检测抗体的OD410值达0.697;攻毒7d后,PCR检测30只Balb/c小鼠的血液,共有7只为阳性,保护率为76.70%。说明猪附红细胞体亚单位疫苗对Balb/c小鼠具有一定的保护作用。
- 郑秀红贾立军李月梅张守发
- 关键词：猪附红细胞体亚单位疫苗免疫保护
- 猪附红细胞体环介导等温扩增快速检测方法的建立被引量：5
- 2010年
- 为了建立猪附红细胞体的快速实用分子生物学检测方法,试验采用环介导等温扩增技术(LAMP)建立一种灵敏、特异、快速的分子生物学检测方法,用10倍系列稀释的DNA样品对该检测方法的灵敏度进行了测试,同时对新孢子虫、弓形虫、瑟氏泰勒虫病原体进行检测以验证LAMP技术的特异性。结果表明:利用LAMP技术成功检测到猪附红细胞体基因区,此方法的灵敏度可达到5×105倍稀释的DNA分子水平,并且特异性强,对新孢子虫、弓形虫、瑟氏泰勒虫病原体检测均为阴性。
- 李月梅薛书江邢莹郑秀红吕舟张守发
- 关键词：猪附红细胞体环介导等温扩增技术
- 东北三省猪附红细胞体病分子流行病学调查及LAMP检测方法的建立
- 附红细胞体病是由附红细胞体寄生于多种动物和人的红细胞表面及血浆、骨髓内，以溶血性贫血、黄疸、发热为主要临床症状的人兽共患病。为了解东北三省猪附红细胞体病的流行状况及基因变异情况，本试验应用PCR技术对东北三省的600份猪...
- 李月梅
- 关键词：猪附红细胞体PCR技术分子流行病学环介导等温扩增
- 文献传递
