谢立苹
- 作品数：7 被引量：13H指数：3
- 供职机构：江苏大学基础医学与医学技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省高校自然科学研究项目吉林省卫生厅课题更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 幽门螺杆菌cag4蛋白的原核表达、纯化及鉴定被引量：4
- 2011年
- 目的:构建幽门螺杆菌cag4蛋白的原核重组体系,表达、纯化融合蛋白。方法:利用PCR技术从幽门螺杆菌NCTC11637中克隆了cag4基因;经T-A克隆,酶切鉴定,构建了原核表达载体pET-28a-cag4;经测序鉴定正确后,转化进入大肠埃希菌BL21(DE3)进行异源表达。利用IPTG体外诱导后,经SDS-PAGE和Western bolt鉴定目的蛋白表达后,采用Ni2+-NTA柱在变性条件下纯化目的蛋白,并对重组蛋白进行透析复性处理。将SDS煮沸法获得的溶壁微球菌肽聚糖掺入SDS-PAGE作为底物,进行酶谱分析。结果:成功扩增了cag4基因基因;重组质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达出pET-28a-cag4融合蛋白;优化了pET-28a-cag4原核表达体系的最适条件;Western bolt分析结果显示表达的基因重组蛋白与目的蛋白相符;酶谱分析显示其具有明显的肽聚糖水解活性。结论:幽门螺杆菌cag4蛋白具有溶菌糖基转移酶活性。
- 王文凯钟桥谢立苹邵世和
- 关键词：原核表达纯化融合蛋白
- 幽门螺杆菌Cag致病岛hp0540基因的克隆表达及其多克隆抗体的制备
- 2010年
- 目的:构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)Cag致病岛(Cag-pathogenicity island,Cag-PAI)编码的hp0540基因的原核表达系统,并制备其多克隆抗体。方法:应用PCR技术从Hp11637基因组DNA中扩增hp0540基因片段,克隆至pMD18-2T载体后,进行序列测定,并对其序列进行生物信息学分析;构建pET-28a-hp0540原核表达载体,转化表达宿主菌BL21DE3;经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE法鉴定目的蛋白的表达,并以Ni2+-NTA柱分离纯化目的蛋白;将纯化蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体并测定抗体效价。结果:成功克隆了hp0540基因,全长1 086 bp,编码361个氨基酸,与基因库公布的其他Hp菌株基因序列的核苷酸同源性为98%。工程菌诱导后SDS-PAGE显示新生表达蛋白带,相对分子质量约为39 000,经Ni2+-NTA柱纯化后可获得重组蛋白,重组蛋白免疫新西兰大白兔后获得效价为1∶160 000的多克隆抗体。结论:成功构建了hp0540基因的原核表达系统并制备了其多克隆抗体,为研究该基因的功能奠定了基础。
- 韩军邵世和谢立苹黄世腾田树伟黄河
- 关键词：幽门螺杆菌CAG致病岛多克隆抗体
- 具核梭杆菌的研究进展被引量：4
- 2003年
- 具核梭杆菌是一种G-专性无芽胞厌氧杆菌,在口腔乃至全身感染性疾病中检出率极高,与临床厌氧菌感染的关系十分密切.具核梭杆菌的致病性与它的黏附特性、代谢产物丁酸及宿主细胞因子水平有关.最近又有研究报道,该菌能够诱导外周血单个核细胞和多形核细胞的凋亡,从而逃避免疫细胞的杀伤作用,引起机体的感染性疾病.
- 谢立苹李中华邵世和
- 关键词：具核梭杆菌丁酸细胞凋亡细胞因子
- 硒与结肠癌研究进展被引量：3
- 2003年
- 研究表明,硒与结肠癌的发生呈明显的负相关,其机制与硒能提高抗氧化损伤能力,调节DNA甲基化水平,诱导肿瘤细胞凋亡,提高机体免疫功能等因素有关.
- 邵世和谢立苹霍龙
- 关键词：硒结肠癌谷胱甘肽抗氧化损伤DNA甲基化
- 幽门螺杆菌cag致病岛CagⅠ蛋白的生物信息学分析被引量：1
- 2014年
- 目的用生物信息学分析方法对幽门螺杆菌(HP)cag致病岛中的CagⅠ蛋白进行综合分析,推断其结构和功能,并探索其在HP致病中的作用。方法用antherprot V5.0软件和网络数据库等分析预测其结构,BLAST程序搜索其同源序列;用PROSITE SCAN和Fingerprint服务器分析推测其潜在的功能。结果 CagⅠ蛋白有361个氨基酸残基,分子量(Mr)为39 370,理论等电点为5.56;N'端20个氨基酸残基为信号肽,有三段跨膜区,二级结构和三级结构中螺旋结构为主体(约80%);CagⅠ为稳定的疏水蛋白,保守性很强,有N-糖基化作用位点、蛋白激酶C磷酸化位点、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和豆蔻酰化作用位点;存在膜蛋白、菌毛蛋白、转运蛋白、ATP/GTP酶、转录调节因子、分泌系统蛋白等多个蛋白质标签。结论 CagⅠ蛋白定位于HP外膜,是Ⅳ型分泌系统重要组成蛋白质,在信号转导和物质转运过程中充当信使或载体,可能具有水解酶及ATP/GTP酶活性。
- 谢立苹姚逸正朱虹徐驰田树伟梁广舒倪颖邵世和
- 关键词：幽门螺杆菌CAG致病岛生物信息学功能分析
- 幽门螺杆菌Ⅳ型分泌系统cagX基因缺失株的构建与鉴定被引量：1
- 2011年
- 目的:构建幽门螺杆菌(H.pylori,Hp)IV型分泌系统cagX基因缺失株,为研究cagX基因的功能奠定基础。方法:利用基因同源重组原理,设计cagX基因上下游同源臂片段,应用PCR扩增目的基因片段,TA克隆后酶切鉴定,将纯化后的同源臂片段连接到含卡那霉素抗性基因的载体pBluescript SKⅡ(-),即cagX基因自杀质粒pBlueKM40-ΔcagX;自杀质粒电击转化HpNCTC 11637,通过卡那霉素筛选基因缺失株,后经PCR和DNA测序鉴定。结果:构建成功了幽门螺杆菌cagX基因自杀质粒,并转化至HpNCTC 11637内。结论:成功获得了幽门螺杆菌cagX基因缺失株Hp11637-ΔcagX。
- 高小焕邵世和段秀杰谢立苹
- 关键词：幽门螺杆菌同源重组基因缺失
- 异源表达的幽门螺杆菌cag4蛋白有溶菌糖基转移酶活性
- 2011年
- 【目的】构建融合基因原核表达载体pET-28a-cag4,并表达重组融合蛋白cag4,分析重组融合蛋白的酶活性,为新型抗生素(或是抗菌药物)的研发提供作用靶位。【方法】本研究利用PCR技术从幽门螺杆菌NCTC11637中克隆了cag4基因;经T-A克隆,酶切鉴定,构建了原核表达载体pET-28a-cag4;经测序鉴定正确后,转化进入大肠埃希菌BL21(DE3)进行异源表达。利用IPTG体外诱导后,经SDS-PAGE和WesternBolt鉴定目的蛋白表达后,采用Ni2+-NTA柱在变性条件下纯化目的蛋白,并对重组蛋白进行透析复性处理。将SDS煮沸法获得的溶壁微球菌肽聚糖掺入SDS-PAGE作为底物,进行酶谱分析。【结果】在大肠埃希菌BL21(DE3)中获得高效表达的重组蛋白;经SDS-PAGE和Western Bolt鉴定表达后,采用Ni2+-NTA柱在变性条件下纯化,并进行透析复性处理。将SDS煮沸法获得的溶壁微球菌肽聚糖掺入SDS-PAGE作为底物,进行酶谱分析,表明目的蛋白具有明显的肽聚糖水解活性;通过监测浊度下降速率,比较其在不同pH条件下活性的变化,即ΔA/(min.mg protein),结果表明,幽门螺杆菌cag4蛋白具有溶菌糖基转移酶活性。【结论】幽门螺杆菌cag4蛋白具有溶菌糖基转移酶活性。
- 王文凯钟桥谢立苹邵世和
- 关键词：幽门螺杆菌异源表达酶谱分析
