钟桥
- 作品数：23 被引量：102H指数：6
- 供职机构：南京医科大学附属苏州医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省高校自然科学研究项目江苏省科技厅基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 评价基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定临床病原菌的效果被引量：5
- 2015年
- 目的评价基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)对临床细菌的鉴定能力。方法收集2014年9月至2015年1月苏州市立医院门诊和住院患者临床标本中分离出的4 511株病原菌,包括3 727株常见细菌,784株真菌,32株少见菌,按标准操作流程分离和培养后,用MALDI-TOF MS和Phoenix-100分别鉴定所分离菌株,鉴定结果不一致菌株采用细菌16S r RNA基因测序技术予以确认;采用MALDI-TOF MS和传统手工法鉴定真菌。结果 3 727株常见细菌,MALDI-TOF MS检出率为97.0%,Phoenix-100检出率为98.6%。另有35株黏液性肺炎克雷伯菌和42株黏液性铜绿假单胞菌,MALDI-TOF MS未能鉴定出,而Phoenix-100均可正确鉴定。两者对克雷伯菌属和假单胞菌属的检出率差异有统计学意义(χ2值分别为36.219、17.288,P均=0.000),对摩根氏菌属、无色杆菌属、黄杆菌属、变形杆菌属的检出率均为100%,对其余菌属检出率差异均无统计学意义(葡萄球菌属、肠球菌属、埃希氏菌属、肠杆菌属、不动杆菌属、伯克霍尔德氏菌属的χ2值分别为2.304、0.000、0.000、1.185、1.343、0.611、0.000,沙雷氏菌属、枸橼酸杆菌属、普罗威登斯菌属、窄食单胞菌属均经fisher检验;P均>0.05)。两系统鉴定结果不一致的80例菌株经16S r RNA基因测序,有47株被MALDI-TOF MS正确鉴定,有28株被Phoenix-100正确鉴定,且差异有统计学意义(χ2=9.060,P=0.003)。MALDI-TOF MS对念珠菌属、酵母菌属以及丝孢酵母菌属的检出率分别为90.7%、100%和100%。32株临床少见菌(芽孢杆菌属、乳杆菌属、丝孢酵母菌属、莫拉氏菌属、产单核李斯特菌等)经MALDI-TOF MS鉴定均得到可信结果。结论 MALDI-TOF-MS能够对葡萄球菌属、肠球菌属、肠杆菌科、非发酵菌群等临床常见细菌以及念珠菌属、酵母菌属等真菌进行可信鉴定,是临床微生物实验室病原菌诊断
- 高晶晶王亚南钟桥陆文香周颖吴元健徐卫东
- 关键词：质谱细菌鉴定
- 幽门螺杆菌cag4蛋白的原核表达、纯化及鉴定被引量：4
- 2011年
- 目的:构建幽门螺杆菌cag4蛋白的原核重组体系,表达、纯化融合蛋白。方法:利用PCR技术从幽门螺杆菌NCTC11637中克隆了cag4基因;经T-A克隆,酶切鉴定,构建了原核表达载体pET-28a-cag4;经测序鉴定正确后,转化进入大肠埃希菌BL21(DE3)进行异源表达。利用IPTG体外诱导后,经SDS-PAGE和Western bolt鉴定目的蛋白表达后,采用Ni2+-NTA柱在变性条件下纯化目的蛋白,并对重组蛋白进行透析复性处理。将SDS煮沸法获得的溶壁微球菌肽聚糖掺入SDS-PAGE作为底物,进行酶谱分析。结果:成功扩增了cag4基因基因;重组质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达出pET-28a-cag4融合蛋白;优化了pET-28a-cag4原核表达体系的最适条件;Western bolt分析结果显示表达的基因重组蛋白与目的蛋白相符;酶谱分析显示其具有明显的肽聚糖水解活性。结论:幽门螺杆菌cag4蛋白具有溶菌糖基转移酶活性。
- 王文凯钟桥谢立苹邵世和
- 关键词：原核表达纯化融合蛋白
- 苏州地区耐左氧氟沙星无乳链球菌临床分离株分子及质谱学特征分析被引量：2
- 2020年
- 目的回顾分析苏州地区临床分离左氧氟沙星耐药无乳链球菌菌株分子及蛋白质谱学特征。方法收集2018年1月至2019年1月临床连续分离非重复耐左氧氟沙星无乳链球菌58株,用PCR法及Sanger基因测序方法检测gyrA、parC和parE基因突变、细菌血清型以及多位点序列分型;用ClinPro Tools 3.0软件对左氧氟沙星耐药菌株蛋白质谱特征峰进行筛选并验证。结果测序检出耐左氧氟沙星菌株以携带gyrA_Ser81Leu+parC_Ser79Tyr+parE_His225Tyr突变为主,占44.8%(26/58),以血清Ⅲ型和ST19型为主,并伴有血清Ⅰb型及ST23型流行;耐药菌株蛋白质谱峰分析显示6894、3445、5076、4544以及3721 m/z为主要特征峰。结论本地区耐左氧氟沙星无乳链球菌主要为gyrA_Ser81Leu+parC_Ser79Tyr+parE_His225Tyr突变,且以血清Ⅲ型及ST19型为主,具有以6894 m/z为代表的质谱特征峰。
- 张宇蔺苏宁陈海鹏秦国英陆文香徐卫东袁栎钟桥
- 关键词：无乳链球菌左氧氟沙星基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱
- MALDI-TOF MS技术在快速鉴别肺炎链球菌与口腔/缓症链球菌中的应用被引量：7
- 2018年
- 目的 应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）快速鉴别肺炎链球菌与口腔/缓症链球菌.方法 收集2013年4月至2016年12月南京医科大学附属苏州医院和苏州大学附属儿童医院临床分离的110株肺炎链球菌和108株口腔/缓症链球菌,并选择肺炎链球菌ATCC49619作为质控菌株,以菌落形态、奥普托欣敏感性试验、胆汁溶菌试验及PCR法检测lytA、spn9802和recA等基因作为判定菌株鉴定结果的参考方法.应用MALDI-TOF MS对所有菌株进行鉴定.选取其中的143株细菌（73株肺炎链球菌和70株口腔/缓症链球菌）作为模型建立菌株,选取剩余的76株细菌（38株肺炎链球菌和38株口腔/缓症链球菌）作为模型验证菌株.采用ClinProTools软件对所有细菌的质谱图谱进行分组统计分析.结果 通过GA、SNN和QC算法得出的敏感度均大于95%,而特异度均为100%.3种算法显示,质荷比为3443、4990、6956和9949 m/z的质谱峰是用于区分肺炎链球菌与口腔/缓症链球菌最为主要的特征性峰,其对应的曲线下面积（AUC）分别为0.884、1、0.999和0.972.峰统计图显示,肺炎链球菌组的3443、4990和9949 m/z峰的强度高于口腔/缓症链球菌组,而6956 m/z峰的强度低于口腔/缓症链球菌组.外部验证显示,除GA模型对肺炎链球菌组和口腔/缓症链球菌组的鉴定正确率分别为97.37%和100.0%,其余2种模型（SNN和QC）对两组细菌的鉴定正确率均为100.0%.结论 MALDI-TOF MS联合ClinProTools可快速准确地鉴别肺炎链球菌与口腔/缓症链球菌,具有高敏感度、高特异度等特点,可为临床诊断肺炎链球菌感染节约时间.
- 高晶晶王亚南杨艺陶云珍陆文香钟桥吴元健徐卫东
- 关键词：肺炎链球菌口腔链球菌光谱法基质辅助激光解吸电离
- 幽门螺杆菌Ⅳ型分泌系统HP0527-C基因的克隆表达及其生物学功能的初步研究被引量：1
- 2008年
- 为克隆表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)NCTC 11637 hp0527-c基因,探讨其生物学功能。设计引物扩增,T-A克隆,测序正确后构建表达载体pET-28a-hp0527-c,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达后以Ni2+-NTA柱获得纯度为98%重组蛋白。经Western blot鉴定正确后,免疫新西兰大白兔获得了较高滴度的多克隆抗体;将重组蛋白作用于BGC-823细胞,RT-PCR检测细胞IL-8mRNA表达增高;同时用MTT法来检测重组蛋白对细胞增殖的影响,结果表明其活性呈现一定量的时间和剂量依赖性。已成功克隆了HP0527-C的重组蛋白,初步探讨了其与细胞之间的相互作用,为进一步阐明H.pylori致病机制奠定了基础。
- 母润红邵世和马方王华崔蕾蕾钟桥鞠小丽董苏荣
- 关键词：幽门螺杆菌克隆表达细胞因子细胞增殖
- 幽门螺杆菌Cag致病岛hp0523基因的缺失及其对CagA蛋白转运能力的影响
- 2009年
- 【目的】构建幽门螺杆菌Cag致病岛编码的hp0523基因缺失株,为研究hp0523基因的功能奠定基础。【方法】本研究利用同源重组原理,设计并扩增了hp0523基因上下游同源臂片段,构建hp0523基因缺失自杀质粒pBlueKM40-Δhp0523,电击转化进入幽门螺杆菌后,通过抗生素筛选后并经PCR验证无误后,获得hp0523基因缺失株H.pylori11637Δhp0523;采用幽门螺杆菌与胃癌上皮细胞BGC-823共培养后,分析该基因缺失前后对细胞毒性蛋白CagA转运能力的影响;并分析比较了缺失前后,CagA蛋白的表达能力变化;【结果】构建幽门螺杆菌hp0523基因缺失的自杀质粒,并成功获得一株hp0523基因缺失株;CagA转运实验表明,hp0523基因缺失后,可以导致细菌转运CagA蛋白的能力丧失;此外,还发现hp0523基因缺失可以影响CagA蛋白表达。【结论】成功获得了幽门螺杆菌hp0523基因缺失株,初步研究发现hp0523基因是幽门螺杆菌Cag致病岛中重要致病因子之一,参与CagA蛋白的转运,可能是其转运装置中组成成分之一。
- 钟桥邵世和母润红王华黄世腾韩军黄河田树伟
- 关键词：幽门螺杆菌CAG致病岛同源重组
- 尿液肾功能指标和血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C对早期糖尿病肾病的诊断价值及其风险评估模型的建立被引量：14
- 2022年
- 目的探讨尿液肾功能指标和血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(CysC)对早期糖尿病肾病(DN)的诊断价值,同时构建早期DN风险评估列线图模型。方法回顾性分析本院2019年1月至2021年12月收治的873例2型糖尿病(T2DM)患者,根据尿微量白蛋白/肌酐比值(umACR)分为T2DM组(n=387)、早期DN(DN1)组(n=313)和临床DN(DN2)组(n=173),比较各组人群临床资料以及肾功能指标,并采用ROC曲线分析各指标单独和联合诊断效能,用R软件绘制相关分析热图,多因素Logistic回归分析DN发生的独立危险因素,建立DN诊断模型并采用Bootstrap法验证。结果血清CysC、eGFR、尿α_(1)-微球蛋白(uα_(1)-MG)、尿β_(2)微球蛋白(uβ_(2)-MG)、尿免疫球蛋白G(uIgG)、尿转铁蛋白(uTrF)和尿微量清蛋白(umAlb)水平:DN2组>DN1组>T2DM组,差异均有统计学意义(P均<0.05);多指标联合诊断的ROC曲线下面积(AUC^(ROC))为0.904,敏感性和特异性分别为75.4%和95.1%,均高于各指标单独检测效能。uα_(1)-MG、uβ_(2)-MG、uIgG、uTrF和CysC与umACR呈正相关,与eGFR呈负相关(P均<0.001)。多因素Logistic回归分析结果显示,年龄、uα_(1)-MG、uβ_(2)-MG、uIgG、uTrF和CysC是DN的独立危险因素(P均<0.05),列线图评估DN风险的一致性指数(C-index)为0.919,区分度良好;校准图显示预测风险发生率与实际风险发生率有良好的一致性。结论uα_(1)-MG、uβ_(2)-MG、uIgG、uTrF和CysC联合对早期DN具有较高诊断价值,基于以上指标所建立的个体化预测DN发生风险的列线图模型具有良好的准确度与区分度,对T2DM并发DN高风险人群的早期诊断和干预提供了可靠的依据。
- 张莉蒋丽琼马钧钟桥
- 关键词：尿液半胱氨酸蛋白酶抑制剂C
- 幽门螺杆菌Cag-PAI hp0525基因的克隆表达及其重组蛋白HP0525对SGC-7901细胞增殖的影响
- 2009年
- 目的：由于文献报道幽门螺杆菌（Helicobacter priori）是产生胃溃疡和胃癌的致病菌之一，一个重要的影响因素是由cag致病岛编码的四型分泌系统。Hp0525是Cag致病岛中重要成分，是一种内膜蛋白ATPase。而幽门螺杆菌中Cag蛋白的表达以及Cag PAI编码的各自蛋白功能研究得还很少，为进一步研究幽门螺杆菌的致病机制和研发幽门螺杆菌诊断试剂盒及疫苗，特克隆幽门螺杆菌NCTC 11637hp0525（caga）基因，并对其进行测序，构建原核重组质粒，表达HP0525蛋白，初步研究其对SGC-7901细胞增殖的影响。方法：应用PCR技术从H.pylori基因组DNA中扩增hp0525编码基因片段，克隆至pMD18-T载体后，再将其定向插入pET-30a载体中，双酶切鉴定筛选阳性克隆，以DNA自动分析仪进行序列测定。测序分析正确后，经IPTG诱导表达，表达蛋白以Ni^2＋-NTA柱进行纯化，并经Western blot和MALDI-TOF鉴定，透析除盐后的蛋白，通过免疫新西兰大白兔和抗体效价的测定，纯化的蛋白作用于SGC-7901细胞，用MTT法检测蛋白对细胞增殖的影响。结果：成功克隆hp0525基因，全长993bp，编码330个氨基酸，与GenBank公布的其他H.pylori菌株基因序列的核苷酸同源性为97％-99％。工程菌诱导后SDS-PAGE显示新生表达蛋白带，相对分子质量为36000，与预期一致，经Ni^2＋-NTA柱纯化后可获得纯度为98％重组蛋白。蛋白作用于SGC-7901细胞后，结果呈现一定量的时间和剂量依赖性。它是一种ATPase，通过测定具有一定的活性。活性为4．40IU／ml结论：成功克隆hp0525基因，并在大肠杆菌BL21中表达，经过镍柱纯化后得到纯度较高的蛋白，MTT法来检测出重组蛋白抑制细胞增殖；同时具有一定的酶活力，为进一步研究其生物学功能奠定了基础。
- 母润红邵世和钟桥崔蕾蕾张成义
- 关键词：幽门螺杆菌克隆增殖
- 应用蒙特卡罗模拟优化肾功能亢进患者万古霉素给药方案的研究被引量：4
- 2020年
- 目的根据万古霉素在肾功能亢进(ARC)和肾功能正常患者中的药物代谢动力学/药物效应动力学(PK/PD)原理,应用蒙特卡罗模拟优化ARC和肾功能正常患者万古霉素对常用革兰阳性菌的初始给药方案。方法使用文献公开发表的ARC及肾功能正常患者中的群体PK模型,收集2017至2019年南京医科大学附属苏州医院甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)、甲氧西林耐药表皮葡萄球菌(MRSE)、粪肠球菌、屎肠球菌的最小抑菌浓度(MIC)分布。采用蒙特卡罗模拟计算不同万古霉素日剂量的目标获得概率(PTA)和累积反应分数(CFR),以预测达到与PK/PD参数指标AUC0~24 h/MIC的万古霉素给药剂量,推荐最佳给药方案。结果蒙特卡罗模拟结果显示,MIC=0.5时ARC患者对革兰阳性菌万古霉素日剂量2.0 g/d的PTA为97.30%,而肾功能正常患者只需要1.5 g/d,PTA即可达99.16%。MIC=1时,肾功能正常患者需要万古霉素2.5 g/d,PTA可达92.91%,而ARC患者需要万古霉素3.5 g/d,PTA才可达88.71%。当MIC≥2时,万古霉素常规推荐的给药剂量(2.0~4.0 g/d)很难达到理想的PTA值。对于常见革兰阳性菌,肾功能正常患者需要万古霉素3.0 g/d,CFR可达91.36%,而ARC患者需要万古霉素4.5 g/d,CFR可达90.60%。MRSA和屎肠球菌的MIC≤1的占比分别为97.25%和94.50%。肾功能正常患者MRSA感染给予万古霉素2.5 g/d,CFR可达93.95%,屎肠球菌给予万古霉素3.0 g/d,CFR可达94.46%;而ARC患者MRSA感染给予万古霉素3.5 g/d,CFR可达91.42%,屎肠球菌给予4.0 g/d,CFR可达93.07%。MRSE的MIC=1和2占比分别为64.64%和27.44%,粪肠球菌为77.09%和20.13%。肾功能正常患者粪肠球菌感染给予万古霉素4.0 g/d,CFR可达92.55%,MRSE需要万古霉素4.5 g/d,CFR可达92.79%,而ARC患者MRSE和粪肠球菌需要万古霉素6.0 g/d,CFR才可达88.35%和92.03%。当革兰阳性菌MIC≤0.5时ARC患者给予万古霉素2.0 g/d和肾功能正常者予1.5 g/d,PTA均可≥90%。MIC=1时肾功能正常患者�
- 石璐钟桥唐莲薛盛敏陆件庄智伟薛宏志李静静虞燕霞周琴孙坚彤
- 关键词：万古霉素蒙特卡罗模拟
- CD40-1C/T基因多态性与儿童哮喘的相关性分析被引量：3
- 2013年
- 目的研究CD40基因5'非翻译区-1位点C/T多态性在本地区哮喘儿童人群中的分布,探讨其与哮喘发病风险之间的关系。方法以134例哮喘患者作为研究对象,儿童门诊健康体检者113名作为对照组。应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测哮喘组和对照组CD40-1C/T位点的基因型及等位基因频率;采用免疫比浊法测定血清总IgE水平。分析该基因多态性与儿童哮喘发病风险及IgE水平之间的关系。结果哮喘组和对照组之间C与T等位基因频率分布差异无统计学意义(P>0.05);CC基因型与CT+TT基因型之间的分布差异有统计学意义(P<0.05),CC基因型的发病风险是CT+TT基因型的1.75倍[95%可信区间(CI):1.01～3.04]。哮喘组IgE水平在CC与CT、TT基因型间差异有统计学意义(P<0.05)。结论CD40基因5'非翻译区-1位点CC基因型可能与本地区儿童哮喘的发生有关。
- 杜建钢徐红星竭琼菲钟桥吴元建徐吉成
- 关键词：CD40哮喘基因多态性
