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王文凯: 作品数：12 被引量：57H指数：4; 供职机构：江苏大学附属人民医院更多>>; 发文基金：江苏省高校自然科学研究项目国家自然科学基金江苏省科技厅资助项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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比阿培南对501株临床分离致病菌的体外抗菌活性研究被引量：19: 2009年; 目的:评价比阿培南对501株临床分离致病菌的体外抗菌活性。方法:采用刃天青微孔板稀释法测定比阿培南和对照品(美罗培南、亚胺培南、头孢吡肟、头孢他啶、头孢哌酮/舒巴坦、环丙沙星、苯唑西林、万古霉素)对501株临床分离致病菌的体外抗菌活性。结果:比阿培南对大肠埃希菌、克雷伯菌属、产气肠杆菌、阴沟肠杆菌、志贺菌属、沙门菌属、变形杆菌属、沙雷菌属、柠檬酸菌属、不动杆菌属和铜绿假单胞菌的MIC50分别为0.06,0.13,0.25,0.13,0.03,0.03,1.00,0.50,0.13,0.13,0.50μg/mL;MIC90分别为0.13,0.13,0.50,0.50,0.03,0.06,1.00,0.50,0.25,0.25,4.00μg/mL。结论:比阿培南对临床分离致病菌的最低抑菌浓度MIC50、MIC90低于对照品。; 闻平俞晓丽虞建人王文凯; 关键词：比阿培南致病菌抗菌活性

幽门螺杆菌cag4蛋白的原核表达、纯化及鉴定被引量：4: 2011年; 目的:构建幽门螺杆菌cag4蛋白的原核重组体系,表达、纯化融合蛋白。方法:利用PCR技术从幽门螺杆菌NCTC11637中克隆了cag4基因;经T-A克隆,酶切鉴定,构建了原核表达载体pET-28a-cag4;经测序鉴定正确后,转化进入大肠埃希菌BL21(DE3)进行异源表达。利用IPTG体外诱导后,经SDS-PAGE和Western bolt鉴定目的蛋白表达后,采用Ni2+-NTA柱在变性条件下纯化目的蛋白,并对重组蛋白进行透析复性处理。将SDS煮沸法获得的溶壁微球菌肽聚糖掺入SDS-PAGE作为底物,进行酶谱分析。结果:成功扩增了cag4基因基因;重组质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达出pET-28a-cag4融合蛋白;优化了pET-28a-cag4原核表达体系的最适条件;Western bolt分析结果显示表达的基因重组蛋白与目的蛋白相符;酶谱分析显示其具有明显的肽聚糖水解活性。结论:幽门螺杆菌cag4蛋白具有溶菌糖基转移酶活性。; 王文凯钟桥谢立苹邵世和; 关键词：原核表达纯化融合蛋白

2012年某医院金黄色葡萄球菌临床分布及耐药性分析被引量：2: 2014年; 目的：了解该院临床科室金黄色葡萄球菌感染的分布特征及其耐药情况,为感染监控及临床合理用药提供依据。方法：回顾性分析该院2012年1~12月临床科室金黄色葡萄球菌的感染分布及耐药率。结果：530株金黄色葡萄球菌在38个科室当中,分布在前5名的科室分别为脑外科153株（29%）、老年病科122株（23%）、综合ICU69株（13%）、其次为烧整科和胸外科各26株（5%）,其中,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌有382株,占72%;标本主要类型为痰液398株（75%）,其次为分泌物46株（9%）和引流液8株（1%）;金黄色葡萄球菌对常见12种药物耐药排前6位的分别是青霉素G（98%）、诺氟沙星（76%）、红霉素（74%）、特治星（73%）、及克林霉素（70%）;敏感率最高的为万古霉素和利奈唑胺（敏感率各为100.0%）,其次为利福平（敏感率为58%）、妥布霉素（敏感率为50%）。结论：金黄色葡萄球菌表现出较高的多重耐药性及高耐药性,万古霉素、利奈唑胺、氯霉素及复方新诺明等仍为有效控制金黄色葡萄球菌感染的最佳药物,但仍需结合药敏试验合理使用抗菌素;医院应加强抗菌药物的管理和医院感染的监控,合理使用抗生素,以阻止MRSA菌株的院内感染及播散流行。; 王文凯李节孙常秀陈晔虞建人陈建国; 关键词：甲氧西林抗药性

幽门螺杆菌VacA重组蛋白对SGC7901胃癌细胞的作用被引量：4: 2006年; 目的:研究幽门螺杆菌空泡毒素(VacA)编码基因在大肠杆菌中的表达产物对SGC7901胃癌细胞的作用.方法:常规培养pET32a-vacA-E.coliBL21(DE3)工程菌株,IPTG诱导重组蛋白表达,产物纯化后作用于胃癌细胞,倒置显微镜及电镜等检测细胞生长情况.结果:重组蛋白作用于胃癌细胞后,倒置显微镜下观察,细胞生长受抑制,其细胞空泡毒作用减弱甚至消失,电镜下可见10%-20%左右细胞呈现轻度空泡变,仅少数细胞空泡变明显,细胞表面微绒毛消失,少量细胞体积减小,并出现了早期核着边固缩等凋亡改变.结论:重组VacA蛋白对胃癌细胞的生长具有抑制作用,空泡毒作用减弱.; 段秀杰邵世和闻平王文凯; 关键词：幽门螺杆菌空泡毒素重组蛋白胃癌细胞

系统性红斑狼疮患者外周血Th_(17)细胞的检测及意义被引量：1: 2013年; 目的:探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血辅助性T细胞17(T help cell 17,Th17)的水平和意义。方法:分离、刺激培养人外周血单个核细胞后,利用流式细胞术(FCM)分析SLE患者和正常人外周血中Th17细胞占CD+4T的比例,定量PCR检测外周血单个核细胞RORγt的表达水平、酶联免疫吸附法(ELISA)检测外周血IL-17的水平。结果:静止期和活动期SLE患者外周血中Th17细胞比例与正常对照组相比较差异有统计学意义(P<0.05),且活动期SLE患者与静止期患者相比差异有统计学意义(P<0.05)。SLE患者活动期组外周血单个核细胞RORγt mRNA表达水平与健康组及静止期组相比差异有统计学意义(P<0.05),静止期组和健康组相比差异无统计学意义(P>0.05)。与正常对照组相比,静止期和活动期SLE患者血清IL-17的水平有显著升高(P<0.05),且与静止期患者相比,活动期SLE患者差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Th17细胞可能通过分泌细胞因子IL-17参与了SLE发病及病情发展。; 谭军李节王文凯; 关键词：系统性红斑狼疮 TH17细胞白细胞介素-17

硒对幽门螺杆菌空泡毒素及其重组影响被引量：4: 2008年; 目的研究硒(Se)对幽门螺杆菌(Hp)空泡毒素(VacA)及重组VacA的影响。方法采用盐析、透析、柱层析、浓缩、抽滤等方法提纯幽门螺杆菌分泌的空泡毒素。通过琼脂糖凝胶电泳、基因序列分析鉴定重组载体,重组VacA产物经Ni-TEDTM蛋白纯化系统纯化,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、及免疫印迹(Western blot)鉴定,间接酶联免疫吸附(ELISA)法检测其抗原特异性。进行细胞培养、细胞爬片;采用分光光度计、倒置显微镜、透射电镜及流式细胞仪等方法检测硒对幽门螺杆菌分泌的VacA及重组毒素蛋白功能的影响。结果12 mmol/L硒即可使幽门螺杆菌形态发生球形变,鞭毛及菌毛出现脱落,溶血作用减弱,硒对VacA空泡毒作用无直接影响(P>0.05);硒通过抑制Hp生长减少VacA产生量从而使空泡毒作用减弱;通过抑制表达VacA的大肠埃希菌生长,减少重组VacA表达量;能增强重组VacA对人胃上皮癌细胞株(SGC-7901)生长抑制作用,使细胞分裂指数、集落形成率、S期细胞数量降低,G1期细胞总数增加;使表达重组VacA的大肠埃希菌产生脂溶性砖红色色素,并随硒浓度增加颜色加深。结论硒能抑制Hp生长,改变Hp的形态及结构;可使重组VacA表达量减少;能增强重组VacA对SGC-7901细胞的生长抑制及诱导细胞凋亡作用;可使表达重组VacA的大肠埃希菌产生脂溶性砖红色色素;不能直接抑制VacA的空泡毒作用。; 段秀杰王文凯邵世和刘继斌; 关键词：提纯硒

幽门螺杆菌VacA重组蛋白表达、纯化及鉴定被引量：2: 2006年; 目的研究幽门螺杆菌空泡毒素(VacA)编码基因在大肠埃希菌中的表达及纯化重组蛋白的抗原性。方法将PET32 a-vacAE-.coliBL21(DE3)工程菌株常规培养,碱裂解法小量提取重组质粒DNA,琼脂糖凝胶电泳进行酶切鉴定,基因测序法进行插入基因序列分析。重组蛋白采用IPTG诱导表达,镍亲和层析原理提纯,ELISA法检测其抗原性。结果经酶切鉴定表明,插入的基因片段全长约2 240 bp,测序分析及与Genebank比较,可以肯定插入片段为vacA基因,ELISA法检测重组蛋白具有良好的抗原性。结论VacA重组蛋白在大肠埃希菌中成功表达,重组蛋白具有良好的抗原性。; 段秀杰邵世和闻平王文凯; 关键词：VACA 重组蛋白纯化

黄芩素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性研究被引量：11: 2007年; 目的:了解黄芩素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的体外抗菌活性。方法:用美国临床实验室标准化委员会(CLSI/NCCLS)介绍的方法,检测黄芩素和万古霉素对117株临床分离的MRSA的体外抗菌活性。结果:黄芩素对MRSA的MIC_(50)、MIC_(90)和MBC分别为32.0、96.0和168.0μg/mL。结论:黄芩素为一种对MRSA敏感的抗菌药物,可用于临床治疗由MRSA感染引起的多种疾病。; 闻平俞晓丽陈蕾王文凯; 关键词：耐甲氧西林黄芩素

异源表达的幽门螺杆菌cag4蛋白有溶菌糖基转移酶活性: 2011年; 【目的】构建融合基因原核表达载体pET-28a-cag4,并表达重组融合蛋白cag4,分析重组融合蛋白的酶活性,为新型抗生素(或是抗菌药物)的研发提供作用靶位。【方法】本研究利用PCR技术从幽门螺杆菌NCTC11637中克隆了cag4基因;经T-A克隆,酶切鉴定,构建了原核表达载体pET-28a-cag4;经测序鉴定正确后,转化进入大肠埃希菌BL21(DE3)进行异源表达。利用IPTG体外诱导后,经SDS-PAGE和WesternBolt鉴定目的蛋白表达后,采用Ni2+-NTA柱在变性条件下纯化目的蛋白,并对重组蛋白进行透析复性处理。将SDS煮沸法获得的溶壁微球菌肽聚糖掺入SDS-PAGE作为底物,进行酶谱分析。【结果】在大肠埃希菌BL21(DE3)中获得高效表达的重组蛋白;经SDS-PAGE和Western Bolt鉴定表达后,采用Ni2+-NTA柱在变性条件下纯化,并进行透析复性处理。将SDS煮沸法获得的溶壁微球菌肽聚糖掺入SDS-PAGE作为底物,进行酶谱分析,表明目的蛋白具有明显的肽聚糖水解活性;通过监测浊度下降速率,比较其在不同pH条件下活性的变化,即ΔA/(min.mg protein),结果表明,幽门螺杆菌cag4蛋白具有溶菌糖基转移酶活性。【结论】幽门螺杆菌cag4蛋白具有溶菌糖基转移酶活性。; 王文凯钟桥谢立苹邵世和; 关键词：幽门螺杆菌异源表达酶谱分析

重症监护病房鲍曼不动杆菌感染调查及泛耐药情况分析被引量：11: 2010年; 目的了解该市某医院近3年来重症监护病房(ICU)鲍曼不动杆菌感染现状,分析其耐药谱变迁及泛耐药情况,金属酶产生情况,为临床了解及防治院内感染提供依据。方法对该院ICU2005～2007年分离的鲍曼不动杆菌分布及耐药情况进行回顾性分析。细菌鉴定采用法国生物梅里埃公司VITEK-32细菌鉴定仪,常规药敏试验采用K-B纸片法,采用头孢他啶和2-巯基丙酸的双纸片琼脂扩散表型协同试验筛选产金属酶菌株。结果3年间共分离到鲍曼不动杆菌358株,其中2005年87株,2006年102株,2007年169株,其中通过呼吸道感染占82.12%。泛耐药菌株感染率呈现出逐年上升趋势,2005年3株(占3.45%),2006年8株(占7.84%),2007年有21株(占12.43%),且泛耐药菌株感染的发生率与住院时间相关。金属酶表型阳性株共检测出5株,阳性率为15.63%,其中2006年2株,2007年3株。结论鲍曼不动杆菌感染呈逐年上升趋势,以呼吸道感染方式为主,其泛耐药菌株感染率呈上升趋势,金属酶产生率低,不是主要耐药机制。患者住院时间越长感染泛耐药菌株的几率越高。应加强ICU病房环境和人员消毒,加强抗生素的合理使用,控制鲍曼不动杆菌在医院内的定值和播散,重视泛耐药鲍曼不动杆菌监测。; 段秀杰陆建成阴晴高雁王文凯; 关键词：重症监护病房鲍曼不动杆菌泛耐药

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